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組織線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

本文由 上海語燕生物技術(shù)有限公司 整理匯編

2018-11-19 10:00 533閱讀次數(shù)

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組織線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途組織線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光定量檢測試劑是一種旨在通過線粒體鈣離子特異性熒光探針Rhod-2,與鈣離子結(jié)合后,其熒光強度顯著增強,在熒光分光光度儀下觀察相對熒光峰值的變化,來測定組織線粒體中總鈣離子濃度的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織(動物、人體等)內(nèi)線粒體鈣離子的濃度檢測。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,檢測敏感。技術(shù)背景鈣是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì),占1150克。其中99%的鈣以氟磷灰石鈣(calciumfluorophosphateapatite)形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細胞內(nèi)。鈣具有兩種主要形式:一種是非彌散型蛋白結(jié)合鈣,其構(gòu)成約40%至50%的血清中的總鈣含量;另一種為彌散型游離鈣,其進一步分成具有活性的復(fù)合鈣(complexedcalcium)和離子鈣(ionizedcalcium)。鈣對神經(jīng)肌肉興奮性(neuromuscularexcitability)、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運輸、釋放神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)、信使傳導(dǎo)等方面起著重要作用。在細胞內(nèi),鈣離子主要儲存在線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器中。其中線粒體鈣離子在調(diào)節(jié)線粒體代謝、保持線粒體的ATP產(chǎn)量達到細胞需求,維持細胞內(nèi)環(huán)境鈣離子平衡方面起著重要作用。線粒體鈣的檢測包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法(flamephotometry)、原子吸收分光光度法等技術(shù),但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾,或者受限于儀器的特殊的要求,以及需要線粒體純化。Rhod-2,羅丹明123(rhodamine123)的衍生產(chǎn)物,一種與鈣離子結(jié)合產(chǎn)生熒光,同時其正電荷特性,特異性地聚集在線粒體里,由此用于測定線粒體內(nèi)鈣離子水平。在熒光分光光度儀下,激發(fā)波長550nm,散發(fā)波長590nm,來定量測定線粒體的鈣濃度。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)40毫升染色液(ReagentB)30微升介導(dǎo)液(ReagentC)600微升飽和液(ReagentD)2毫升陰性液(ReagentE)2毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存染色液(ReagentB)和介導(dǎo)液(ReagentC)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于工作液配制的容器細胞培養(yǎng)箱:用于染色孵育黑色96孔板:用于樣品操作的容器熒光酶標儀:用于熒光分析實驗步驟測定準備設(shè)定好熒光酶標儀(22℃):激發(fā)波長550nm,散發(fā)波長590nm準備好純化的線粒體樣品,置于冰槽里融化測定開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(ReagentB)室溫下融化,然后分別移出30微升介導(dǎo)液(ReagentC)和1.5微升染色液(ReagentB)到新的1.5毫升離心管,標記為染色工作液,并放在暗室里備用。然后進行下列操作。二、熒光酶標儀檢測準備1個黑色96孔板,標記為:線粒體樣品孔、空白對照孔(不含線粒體)、Zda對照孔(不含線粒體)移取100微升純化線粒體樣品(100微克)到線粒體樣品孔里加入100微升飽和液(ReagentD)到Zda對照孔里加入100微升陰性液(ReagentE)到空白對照孔里分別加入10微升染色工作液到所有孔里輕輕搖動黑色96孔板,混勻室溫下(22℃),孵育30分鐘,避免光照放進37℃細胞培養(yǎng)箱里孵育30分鐘,避免光照即刻放進熒光酶標儀測讀:獲得相對熒光單位(relativefluorescenceunit;RFU)計算樣品線粒體鈣離子濃度【(樣品RFU-空白對照孔RFU)÷(Zda對照孔RFU-樣品RFU)】X570(納摩爾;解離常數(shù))=納摩爾/100微克線粒體注意事項本產(chǎn)品為20次操作操作時,須戴手套避免使用EDTA等處理樣品孵育反應(yīng)完成后即刻進行熒光測定如果待測樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度檢測敏感度可達納摩爾級鈣濃度范圍可以使用熒光分光光度儀檢測本公司提供系列鈣生化檢測試劑產(chǎn)品質(zhì)量標準本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感

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