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小鼠成纖維細胞

本文由 上海語燕生物技術(shù)有限公司 整理匯編

2018-11-19 10:00 546閱讀次數(shù)

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NCTCclone929[Lcell,L-929,derivativeofStrainL](小鼠成纖維細胞)1.OriginandGeneralCharacteristicsCellNameNCTCclone929[Lcell,L-929,derivativeofStrainL]OrganismmusmusculusAge100daysTissuesubcutaneousconnectivetissue;areolarandadiposeMorphologyfibroblastGrowthPropertiesadherentDescriptionsThiscelllinehasbeentestedandfoundnegativeforectromeliavirus(mousepox).BiosafetyLevel12.CultureConditionsandHand領(lǐng)CompleteGrowthMediumMEM(150410)+10%FBS(164210500)+1%-P/S(180120)Removeanddiscardculturemedium.BrieflyrinsethecelllayerwithDPBSsolutiontoremovealltracesofserumthatcontainstrypsininhibitor.Add1.0to2.0mLofTrypsin-EDTAsolutiontoflaskandobservecellsunderaninvertedmicroscopeuntilcelllayerisdispersed(usuallywithin3Subculturingto5minutes).Cellsthataredifficulttodetachmaybeplacedat37°Ctofacilitatedispersal.Add4.0to6.0mLofcompletegrowthmediumandaspiratecellsbygentlypipetting.Addappropriatealiquotsofthecellsuspensiontonewculturevessels.SubcultivationRatio1:3-1:5MediumRenewal2to3timesperweekCryopreservationFreezemedium:50%basalmedium+40%FBS+10%DMSOStoragetemperature:liquidnitrogenvaporphaseCultureConditionsAtmosphere:Air,95%;CO2,5%Temperature:37℃3.SpecialFeaturesoftheCellLineTumorigenicYes,inimmunosuppressedmice.EffectsYes,inimmunosuppressedmice.ReceptorExpressionAntigenExpressionGeneExpressionApplicationsToxicitytesting;Transfectionhost收到常溫細胞后如何處理?(細胞培養(yǎng)詳細操作步驟請參照郵件附件)首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

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