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細(xì)胞 3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性終點(diǎn)比色法定量
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本文由 上海語(yǔ)燕生物技術(shù)有限公司 整理匯編
2018-11-19 10:00 824閱讀次數(shù)
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細(xì)胞3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)主要用途細(xì)胞3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)3-磷酸甘油磷酸激酶和3-磷酸甘油醛脫氫酶酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷(NADH)氧化后峰值的降低,即采用比色法來(lái)測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞(動(dòng)物、人體、昆蟲(chóng)等)裂解懸液樣品3-磷酸甘油醛脫氫酶的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。
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細(xì)胞 3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性終點(diǎn)比色法定量
- 細(xì)胞3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)主要用途細(xì)胞3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)3-磷酸甘油磷酸激酶和3-磷酸甘油醛脫氫酶酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷(NADH)氧化后峰值的降低,即采用比色法來(lái)測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞(動(dòng)物、人體、昆蟲(chóng)等)裂解懸液樣品3-磷酸甘油醛脫氫酶的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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甘油醛 3-磷酸脫氫酶(GAPDH) 酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- 甘油醛 3-磷酸脫氫酶(GAPDH) 酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)[詳細(xì)]
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2016-07-25 00:00
操作手冊(cè)
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乳酸脫氫酶(LDH)總活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途乳酸脫氫酶(LDH)總活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)乳酸脫氫酶反應(yīng)系統(tǒng)中反應(yīng)完成后還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用終點(diǎn)比色法來(lái)測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞和組織裂解萃取樣品(動(dòng)物、人體、植物、昆蟲(chóng)等)乳酸脫氫酶(LDH)的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景乳酸脫氫酶是一種氧化還原酶,催化丙酮酸和乳酸的互相轉(zhuǎn)化反應(yīng)。乳酸脫氫酶由4個(gè)亞單位構(gòu)成,有兩種類型:肌肉型和心肌型。根據(jù)其亞單位成分,分為5種同功酶。乳酸脫氫酶的活性檢測(cè)用來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞或組織的損害狀況?;诒幔╬yruvate)底物在乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase;LDH)的催化下,轉(zhuǎn)化成乳酸(lactate),同時(shí)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide;NAD),完全反應(yīng)后,在分光光度儀下產(chǎn)生吸收峰值的變化(340nm波長(zhǎng))由此定量測(cè)定乳酸脫氫酶的活性。乳酸脫氫酶反應(yīng)系統(tǒng)為:lactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+(高吸收峰)(低吸收峰)[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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乳酸脫氫酶(LDH)總活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)
- 乳酸脫氫酶(LDH)總活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-22 00:00
安裝說(shuō)明
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細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶(ISOCITRATEDEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酸(NADP)還原后峰值的變化,即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)菌裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)菌細(xì)胞裂解懸液樣品異檸檬酸脫氫酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景異檸檬酸脫氫酶(isocitratedehydrogenase;IDH;EC1.1.1.42)是三羧酸循環(huán)(citricacidcycle)或克雷布斯循環(huán)(Krehescycle)中的酶之一,存在于所有生物體內(nèi)。細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶有2種同工酶:同源雙體,40至45Kd分子量;單體,80至100Kd分子量。在細(xì)菌體內(nèi),氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(oxidizedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate;NADP)依賴性異檸檬酸脫氫酶獲得輔酶NADP和輔助因子錳或鎂離子(Mn)的推動(dòng),脫去底物異檸檬酸的氫和二氧化碳(氧化性脫羧基作用),轉(zhuǎn)化為α-酮戊二酸(α-ketoglutarate),同時(shí)生成還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(reducedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate;NADPH)。一旦磷酸化或在乙酸環(huán)境中,以及有限的葡萄糖條件下,異檸檬酸脫氫酶則失活,從而控制三羧酸循環(huán)和乙醛酸旁路(glyoxylatebypass)之間碳的流動(dòng)?;诋悪幟仕崦摎涿傅腘ADP依賴性,和作用后所產(chǎn)生的NADPH,通過(guò)分光光度儀的峰值變化(340nm波長(zhǎng)),來(lái)定量分析異檸檬酸脫氫酶的活性。異檸檬酸脫氫酶反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)菌琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途細(xì)菌琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用合成電子受體染料,通過(guò)反應(yīng)系統(tǒng)測(cè)定染料還原后峰值的降低,即采用比色法測(cè)算樣品中單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)菌菌株裂解懸液和膜蛋白樣品琥珀酸脫氫酶的特異性活性檢測(cè)。用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、發(fā)酵分析等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景琥珀酸脫氫酶(succinatedehydrogenase;SDH;EC1.3.99.1)是三羧酸循環(huán)(tricarboxylicacidcycle;TCA)或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素,位于線粒體內(nèi)膜,參與細(xì)胞呼吸鏈。細(xì)菌琥珀酸脫氫酶,又稱為SdhCDAB,為膜結(jié)合性蛋白,分為周邊(peripheral)和跨膜(transmembrane)部分,其中周邊親水部分由SdhA和SdhB亞體組成:SdhA亞體含有黃素蛋白(flavoprotein),是琥珀酸的活性部位;SdhB含有鐵硫蛋白(iron-sulfurprotein),進(jìn)行電子傳遞;跨膜疏水部分由SdhC和SdhD亞體組成:SdhC含有亞鐵血紅素-B(Heme-B),SdhD含有泛醌(ubiquinone)結(jié)合部位(Q部位)。其作用在于參與三羧酸循環(huán)(TCAcycle)和呼吸鏈活動(dòng)。琥珀酸脫氫酶催化琥珀酸(succinate)的氧化反應(yīng),產(chǎn)生延胡索酸(furmarate),通過(guò)黃素腺嘌呤二核苷酸(FlavinAdenineDinucleotide;FAD)傳遞電子。基于琥珀酸脫氫酶的反應(yīng)原理,使用人工電子受體染料二氯靛酚鈉(2,6-Dichloroindophenolsodium;DCIP),接受來(lái)自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸(ReducedflavinAdenineDinucleotide;FADH2)的電子,而被還原,在分光光度儀下,其吸光值(600nm波長(zhǎng))的變化,來(lái)測(cè)算琥珀酸脫氫酶的活性。其反應(yīng)方式為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-3活性比色法定量檢測(cè)
- 主要用途細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-3活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)四肽化合物底物Ac-DEVD-pNA,受到半胱氨酸蛋白酶-3的水解,釋放黃色對(duì)硝基苯胺,產(chǎn)生吸光峰值的變化,即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體、昆蟲(chóng)等)半胱氨酸蛋白酶-3(CASPASE-3)的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景半胱氨酸蛋白酶(Cysteine-requiringAspartateprotease;CASPASE),或稱半胱天冬蛋白酶,是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的一類蛋白酶家屬。半胱氨酸蛋白酶-3(CASPASE-3;EC3.4.22.56)是半胱氨酸蛋白酶家屬中CED-3(CellDeathGeneNumber3;秀麗隱桿線蟲(chóng)細(xì)胞死亡基因數(shù)3)分支的一種,又稱CPP32(CysteineProteinaseProtein32kd;半胱氨酸蛋白酶蛋白32)、apopain(凋亡素)、Yama(印度傳說(shuō)中的死亡之神)等。半胱氨酸蛋白酶-3前體為32kd,被切離為17kd和11kd而激活細(xì)胞凋亡。其底物是多聚ADP-核糖多聚酶(poly(ADP-ribose)polymerase;PARP)、半胱氨酸蛋白酶激活DNA酶YZ劑(ICAD)等。半胱氨酸蛋白酶-3的活性檢測(cè)用來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞或組織的凋亡狀況。基于人工合成的四肽化合物底物Ac-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-p-Nithoaniline;乙酰天冬氨酰谷氨酰頡氨酰天冬氨酰對(duì)硝基苯胺)受到半胱氨酸蛋白酶-3的水解,釋放有色對(duì)硝基苯胺,在分光光度儀(405nm波長(zhǎng))下,測(cè)定吸光峰值的變化,來(lái)定量測(cè)定半胱氨酸蛋白酶-3的活性。半胱氨酸蛋白酶-3反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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血液葡萄糖-6-磷酸脫氫酶酶動(dòng)力比色法定量檢測(cè)試劑盒
- 血液葡萄糖-6-磷酸脫氫酶酶動(dòng)力比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)主要用途血液葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)活性酶動(dòng)力比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)特異反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)還原后峰值的,即采用比色法來(lái)測(cè)定血液樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種(動(dòng)物、人體、昆蟲(chóng)等)血液樣品中包括白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血漿和血清等葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(Glucose-6-phosphatedehydrogenase;G6PD)是一種細(xì)胞漿中的酶,參與磷酸戊糖代謝通路,通過(guò)維持還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)水平,提供細(xì)胞還原性能量,進(jìn)而保持谷胱甘肽水平,幫助細(xì)胞,例如紅細(xì)胞,防止氧化損傷。同時(shí)NADPH的產(chǎn)生,促進(jìn)組織細(xì)胞(例如肝臟、乳腺、脂肪組織、腎上腺等)生物合成脂肪酸、類異戊二烯等。在植物中,存在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的多種異構(gòu)體,位于細(xì)胞漿、質(zhì)體基質(zhì)(plastidicstroma)、和過(guò)氧化體。葡萄糖-6-磷酸脫氫酶缺陷將導(dǎo)致急性溶血性貧血,即蠶豆病?;谄咸烟?6-磷酸(D-glucose-6-phosphate)在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的作用下,轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)脂(6-phosphoglucono-δ-lactone)產(chǎn)物后,同時(shí)其輔酶因子氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(oxidizednicotinamideadeninedinucleotidephosphate;β-NADP)轉(zhuǎn)化為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotidephosphate;β-NADPH),通過(guò)測(cè)定吸光值的變化(340nm波長(zhǎng)),來(lái)定量分析葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的總活性。葡萄糖-6-磷酸脫氫酶反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞酪氨酸酶(tyrosinase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途細(xì)胞酪氨酸酶(tyrosinase)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)酪氨酸酶反應(yīng)系統(tǒng)中底物酪氨酸氧化后,產(chǎn)生多巴色素,呈現(xiàn)吸光峰值的變化,即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解懸液樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種人體和動(dòng)物細(xì)胞,尤其是黑色素細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞裂解懸液樣品中酪氨酸酶的活性檢測(cè),以及YZ劑篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景酪氨酸酶(tyrosinase;EC1.14.18.1)是一種單酚單加氧酶(monophenolmonooxygenase),又稱為單酚酶(monophenolase)或單酚二羥基苯丙氨酸:O2氧化還原酶(monophenoldihydroxyphenylalanin:O2oxidoreductase),具有雙功能的含銅糖蛋白,廣泛存在于植物、酵母和動(dòng)物組織中,其蛋白結(jié)構(gòu)、大小、糖基化方式、激活特征等都不同。人體酪氨酸酶是一個(gè)跨膜蛋白,而催化結(jié)構(gòu)域在黑色素細(xì)胞(melanocyte)或色素細(xì)胞的黑色素器(melanosome)里。酪氨酸酶通過(guò)催化L-酪氨酸(L-tyrosine)等的o-羥基化(o-hydroxylation)反應(yīng)變成L-多巴(L-dopamine),進(jìn)而氧化產(chǎn)生黑色素底物多巴醌(dopaquinone),從而由多巴色素(dopachrome)轉(zhuǎn)化為黑色素(melanin)中的真黑素(eumelanin),以及其它色素,包括毛發(fā)和眼睛色素。紫外線可以激活酪氨酸酶活性,嚴(yán)重時(shí),會(huì)引起色素沉著(hyperpigmentation)。酪氨酸酶基因突變將導(dǎo)致I型眼皮膚白化?。╫culocutaneousalbinism)。酪氨酸酶YZ劑成為增白化妝品的重要元素?;诘孜锢野彼幔诶野彼崦傅拇呋?,產(chǎn)生多巴色素,通過(guò)其吸光值的變化(475nm波長(zhǎng)),來(lái)定量測(cè)定酪氨酸酶的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞丙酮酸激酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途細(xì)胞丙酮酸激酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶的酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取懸液樣品(動(dòng)物、人體、植物、昆蟲(chóng)等)丙酮酸激酶的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景丙酮酸激酶(PyruvateKinase;PK)是細(xì)胞代謝的調(diào)節(jié)酶,催化細(xì)胞糖酵解的Z后反應(yīng):將磷酸烯醇丙酮酸(phosphoenolpyruvate;PEP)轉(zhuǎn)化成丙酮酸(pyruvate),同時(shí)產(chǎn)生ATP。丙酮酸激酶由4個(gè)相同的亞單位構(gòu)成,在肝組織、肌肉組織和紅細(xì)胞中有不同類型的異構(gòu)體。果糖-2,6-二磷酸(Fructose-2,6-bisphosphate;F2,6BP)是該酶的激活劑,而ATP、蛋氨酸(alanine)、乙酰輔酶A(Acetyl-CoA)是該酶的YZ劑。丙酮酸激酶的活性檢測(cè)用來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞或組織,包括紅細(xì)胞的損害狀況?;诹姿嵯┐急徂D(zhuǎn)化成丙酮酸后,通過(guò)乳酸脫氫酶系統(tǒng),測(cè)定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide;NAD)的峰值變化(340nm波長(zhǎng)),來(lái)定量分析丙酮酸激酶的活性。丙酮酸激酶反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)...
- 組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)主要用途組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測(cè)試劑盒是一種旨在使用乙醛脫氫酶2敏感性YZ劑,通過(guò)檢測(cè)反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)還原后峰值的,即采用比色法來(lái)測(cè)定組織裂解萃取液樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織裂解懸液樣品(動(dòng)物、人體等)乙醛脫氫酶2的特異活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景乙醛脫氫酶(aldehydedehydrogenase;ALDH;EC1.2.1.3),又稱為乙醛NAD氧化還原酶(aldehydeNAD-oxidoreductase)是一類NAD(P)依賴性酶,催化廣譜的外源性或內(nèi)源性脂肪族和芳香族乙醛類底物氧化,包括乙醇、氨基酸、生物胺(biogenicamine)、維生素、固醇類、脂質(zhì)、藥物和環(huán)境分子等代謝產(chǎn)物。乙醛脫氫酶是乙醇在體內(nèi)分解代謝過(guò)程中兩種主要酶之一。乙醛脫氫酶把乙醛中的兩個(gè)氫原子脫掉,使乙醛轉(zhuǎn)化為乙酸,生成的乙酸進(jìn)入脂肪酸氧化途徑,Z終被氧化成二氧化碳和水。乙醛脫氫酶主要有兩種同工酶:ALDH1和ALDH2。ALDH1存在于胞液中,ALDH2存在于線粒體中,ALDH2比ALDH1的活性高。乙醛脫氫酶的缺少,使酒精不能被完全分解為水和二氧化碳,而是以乙醛繼續(xù)留在體內(nèi),使人喝酒后產(chǎn)生惡心欲吐、昏迷不適等醉酒癥狀?;趤?lái)自于乙醇代謝產(chǎn)生的乙醛(acetaldehyde),在7-羥基-3-(4-羥苯基)-異黃酮-7-糖苷(Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside;Daidzin)存在與否的情況下,由乙醛脫氫酶2的催化作用,轉(zhuǎn)化為乙酸(aceticacid)產(chǎn)物后,通過(guò)測(cè)定反應(yīng)體系中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizedreducednicotinamideadeninedinucleotide;NAD)轉(zhuǎn)化為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)的變化(340nm波長(zhǎng)),來(lái)定量分析乙醛脫氫酶2的特異活性。乙醛脫氫酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升反應(yīng)液(ReagentD)毫升底物液(ReagentE)毫升陰性液(ReagentF)毫升專性液(ReagentG)微升產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1份保存方式保存緩沖液(ReagentC)、反應(yīng)液(ReagentD)、底物液(ReagentE)和專性液(ReagentG)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;反應(yīng)液(ReagentD)和底物液(ReagentE)避免光照;有效保證6月[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
- 主要用途細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶(ISOCITRATEDEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酸(NADP)還原后峰值的變化,即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)菌裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)菌細(xì)胞裂解懸液樣品異檸檬酸脫氫酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景異檸檬酸脫氫酶(isocitratedehydrogenase;IDH;EC1.1.1.42)是三羧酸循環(huán)(citricacidcycle)或克雷布斯循環(huán)(Krehescycle)中的酶之一,存在于所有生物體內(nèi)。細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶有2種同工酶:同源雙體,40至45Kd分子量;單體,80至100Kd分子量。在細(xì)菌體內(nèi),氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(oxidizedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate;NADP)依賴性異檸檬酸脫氫酶獲得輔酶NADP和輔助因子錳或鎂離子(Mn)的推動(dòng),脫去底物異檸檬酸的氫和二氧化碳(氧化性脫羧基作用),轉(zhuǎn)化為α-酮戊二酸(α-ketoglutarate),同時(shí)生成還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(reducedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate;NADPH)。一旦磷酸化或在乙酸環(huán)境中,以及有限的葡萄糖條件下,異檸檬酸脫氫酶則失活,從而控制三羧酸循環(huán)和乙醛酸旁路(glyoxylatebypass)之間碳的流動(dòng)?;诋悪幟仕崦摎涿傅腘ADP依賴性,和作用后所產(chǎn)生的NADPH,通過(guò)分光光度儀的峰值變化(340nm波長(zhǎng)),來(lái)定量分析異檸檬酸脫氫酶的活性。異檸檬酸脫氫酶反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)
- 細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)[詳細(xì)]
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2015-04-08 00:00
期刊論文
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細(xì)菌琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) (中文版)
- 細(xì)菌琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) (中文版)[詳細(xì)]
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2015-01-05 00:00
期刊論文
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純化線粒體琥珀酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)
- 純化線粒體琥珀酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)主要用途純化線粒體琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用合成電子受體染料,通過(guò)反應(yīng)系統(tǒng)測(cè)定染料還原后峰值的降低,即采用比色法測(cè)算樣品中單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種純化線粒體裂解懸液樣品琥珀酸脫氫酶的特異性活性檢測(cè)。用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景琥珀酸脫氫酶(succinatedehydrogenase;SDH;EC1.3.99.1)是三羧酸循環(huán)(tricarboxylicacidcycle;TCA)或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素,位于線粒體內(nèi)膜,參與細(xì)胞呼吸鏈。琥珀酸脫氫酶由27kd和70kd兩個(gè)單體組成。其功能在于催化琥珀酸(succinate)的氧化反應(yīng),產(chǎn)生延胡索酸(furmarate),通過(guò)黃素腺嘌呤二核苷酸(FlavinAdenineDinucleotide;FAD)傳遞電子?;阽晁崦摎涿傅姆磻?yīng)原理,使用人工電子受體染料二氯靛酚鈉(2,6-Dichloroindophenolsodium;DCIP),接受來(lái)自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸(ReducedflavinAdenineDinucleotide;FADH2)的電子,而被還原,在分光光度儀下,其吸光值(600nm波長(zhǎng))的變化,來(lái)測(cè)算琥珀酸脫氫酶的活性。其反應(yīng)方式為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)XX毫升裂解液(ReagentB)XX毫升緩沖液(ReagentC)XX毫升反應(yīng)液(ReagentD)XX毫升底物液(ReagentE)XX毫升陰性液(ReagentF)XX微升產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;反應(yīng)液(ReagentD)含有毒性物質(zhì),避免直接用手接觸;底物液(ReagentE),避免光照;有效保證3月用戶自備15毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器1.5毫升離心管:用于樣品制備和保存的容器4℃(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品處理DOUNCE勻漿器:用于裂解組織恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水槽:用于反應(yīng)物孵育比色皿:用于比色測(cè)定的容器分光光度儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化;底物液(ReagentE)注意避光。然后進(jìn)行下列操作。一、樣品準(zhǔn)備手術(shù)取出動(dòng)物組織,并秤重以確定200毫克組織重量(選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管(選擇步驟)加入XX毫升清理液(ReagentA)清洗(選擇步驟)抽去清洗液移入到一個(gè)液氮凍存管即刻放進(jìn)液氮罐過(guò)夜次日從液氮罐里取出,即刻(Z快速度)用研磨棒碾碎組織成粉末狀(注意:切莫使組織凍融)放進(jìn)一個(gè)15毫升錐形離心管加入置于冰槽里的XX毫升裂解液(ReagentB)渦旋震蕩5秒,充分混勻即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約20至40下)(注意:參見(jiàn)注意事項(xiàng)8)將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1500g小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心抽去上清液加入XX微升裂解液(ReagentB),混勻顆粒群移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-GMS30030.1)放進(jìn)-70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用二、測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品,置于冰槽里設(shè)定好分光光度儀(溫度為25℃):波長(zhǎng)600nm,間隔60秒,讀數(shù)6次(共5分鐘),并置零緩沖液(ReagentC)在室溫下均衡溫度背景對(duì)照測(cè)定移取XX微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入XX微升反應(yīng)液(ReagentD)加入XX微升底物液(ReagentE)放進(jìn)25℃培養(yǎng)箱里靜置3分鐘[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1 (SIRT1)活性比色法定量檢測(cè)
- 主要用途細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)比色探針對(duì)硝基苯胺標(biāo)記人工合成的乙?;痯53多肽底物,經(jīng)過(guò)SIRT1脫乙?;螅晃稽c(diǎn)特異性氨基肽酶水解,釋放黃色對(duì)硝基苯胺,即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、核蛋白樣品、部分或完全純化酶樣品中SIRT1的活性定量檢測(cè),以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景人體組蛋白脫乙?;福╤istonedeacetylase;HDAC)家屬分成三類共20多個(gè)蛋白:種類I(classI)與酵母Rpd3蛋白同源,包括HDAC1、2、3、8,存在于細(xì)胞核中;種類II(classII)與酵母Hda1蛋白同源,包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR,存在于細(xì)胞核和細(xì)胞漿里;上述兩大種類的蛋白分子催化結(jié)構(gòu)域含有鋅,且曲古菌素A(trichostatinA;TSA)敏感。種類III(classIII)為NAD+輔助因子必需,又稱為sirtuins,與酵母Sir2(SilentInformationRegulator2)同源,包括SIRT1至7等,為曲古菌素A(trichostatinA;TSA)不敏感型賴氨酸脫乙?;福╨ysyl-deacetylase)。催化賴氨酸脫乙酰基反應(yīng),以及由NAD+和乙酰(acetyl)基團(tuán)轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的煙酰胺(nicotinamide)和O-乙酰ADP核糖(O-acetyl-ADP-ribose)。SIRT1位于細(xì)胞核內(nèi),與酵母Sir2同源性Z高。其功能在于調(diào)節(jié)p53活性和YZ細(xì)胞凋亡?;谌斯ず铣傻囊阴;痯53(379至382氨基酸位點(diǎn))多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys(Ac)具有抗氨基肽酶切離的功能,首先使用比色染料對(duì)硝基苯胺(p-Nitroaniline;p-NA)來(lái)標(biāo)記乙?;痯53多肽底物,其次進(jìn)行脫乙?;琙后底物進(jìn)一步在氨基肽酶的催化酶解,釋放出具有強(qiáng)烈吸光值的黃色對(duì)硝基苯胺(波長(zhǎng)405nm),由此來(lái)定量測(cè)定沉默調(diào)節(jié)蛋白1的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
- 主要用途細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)含硫多肽底物以及特定YZ劑存在與否的情況下,受到MMP2的水解,釋放出巰基,進(jìn)而使用Ellman試劑,產(chǎn)生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物吸光峰值的變化,即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或完全純化酶樣品中基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性定量檢測(cè),以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術(shù)背景基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinases;MMPs)是一類結(jié)構(gòu)高度同源的分泌型或膜相關(guān)性鋅內(nèi)肽酶的總稱,因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。其功能在于分解細(xì)胞外基質(zhì)成分。迄今為止發(fā)現(xiàn)的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix)成分,同時(shí)參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、組織再吸收(tissueresorption)、疾病發(fā)生,例如關(guān)節(jié)炎、癌細(xì)胞浸入轉(zhuǎn)移等。根據(jù)降解的底物不同可將MMPs分為4大類:(1)膠原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖;(2)明膠酶(Ⅳ型膠原酶):MMP2、MMP9,又稱明膠酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維;(3)基質(zhì)溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金屬蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內(nèi)絕大多數(shù)細(xì)胞并不儲(chǔ)備MMPs,當(dāng)需要MMPs的信號(hào)傳遞到細(xì)胞后才臨時(shí)合成,合成的MMPs以無(wú)活性的酶原(proenzyme)形式分泌到細(xì)胞外,隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活,一種激活的MMPs可激活另一種MMPs,形成瀑布效應(yīng)?;|(zhì)金屬蛋白酶-2,又稱明膠酶A(gelatinase-A)或IV型膠原酶(typeIVcollagenase),其前體分子量為72kDa,激活后分子量為62和56kDa。它在血清或細(xì)胞上清中濃度通常為10至200納克/毫升。它的作用目標(biāo)是天然和變性膠原蛋白(collagens)、纖維連接蛋白(fibronectin)、彈性纖維蛋白(elastin)、層粘連蛋白-5(laminin-5)、前體腫瘤壞死因子-α(pro-TNF-α)和神經(jīng)(蛋白)聚糖(neurocan)?;|(zhì)金屬蛋白酶-2與腫瘤發(fā)展與轉(zhuǎn)移、血管形成、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病有關(guān)?;诤蚨嚯模╰hiopeptide)底物Ac-PLG(2-mercapto-4-methyl-pentanoyl)-LG-OC2H5,在特異性YZ劑OA-Hy存在與否的條件下,受到MMP2的水解,釋放出巰基(sulfhydrylgroup),進(jìn)而與Ellman試劑5,5-二硫基-雙(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid);DTNB]反應(yīng)后,產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitrobenzoicacid;TNB),通過(guò)其吸收峰值的變化(412nm波長(zhǎng)),來(lái)定量測(cè)定細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性?;|(zhì)金屬蛋白酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞蛋白磷酸酶1(PP1)活性定磷比色法定量檢測(cè)
- 要用途細(xì)胞蛋白磷酸酶1(PP1)活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用特異性底物糖原磷酸化酶a,在PP2AYZ劑存在下,受到PP1去磷酸化后,釋放出游離磷酸根,與孔雀綠染料發(fā)生顯色反應(yīng)后,采用比色法測(cè)定其峰值的變化,以此進(jìn)行測(cè)算單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)胞裂解懸液樣品包括免疫沉淀復(fù)合物和粗提或部分純化酶樣品的蛋白磷酸化酶1活性及其YZ劑的檢測(cè)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞凋亡、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景蛋白磷酸化酶1(proteinphosphatase1;PP1;EC3.1.3.48),又稱為1型蛋白絲/蘇氨酸磷酸化酶,是7個(gè)主要絲/蘇氨酸磷酸化酶(包括PP1、PP2A、PP2B、PP2C、PP4、PP5、PP6)成員之一,從酵母到人類高度進(jìn)化保留。其參與調(diào)節(jié)多種重要的細(xì)胞生理功能,包括糖原代謝、細(xì)胞分裂、肌肉收縮、信號(hào)傳導(dǎo)、神經(jīng)元功能、轉(zhuǎn)錄、翻譯等,以及與HIV-1轉(zhuǎn)錄過(guò)程的調(diào)節(jié),并且與老年性癡呆等多種疾病密切相關(guān)。PP1分子結(jié)構(gòu)表面的3個(gè)凹槽及β12-β13Loop環(huán)結(jié)構(gòu),是底物與YZ劑的結(jié)合部位;其催化亞體為37kd,調(diào)節(jié)亞體有2種:目標(biāo)亞體和YZ亞體?;谔禺愋缘孜锾窃姿峄竌,在PP2AYZ劑福司曲星(fostriecin;FOS)存在的情況下,受到蛋白磷酸化酶1的去磷酸化作用,釋放出游離磷酸根,與孔雀綠(malachitegreen)染料發(fā)生顯色反應(yīng)后,在分光光度儀下(660nm波長(zhǎng))產(chǎn)生峰值的變化,由此測(cè)定蛋白磷酸化酶1(PP1)的特異活性。[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞PTEN活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
- 細(xì)胞PTEN活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)主要用途細(xì)胞PTEN活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用特異性合成底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3),在PTEN去磷酸化后,釋放出游離磷酸根,與孔雀綠染料發(fā)生顯色反應(yīng)后,采用比色法測(cè)定其峰值的變化,以此進(jìn)行測(cè)算單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)胞裂解懸液樣品的PTEN活性及其YZ劑的檢測(cè)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞凋亡、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景細(xì)胞張力蛋白同源在10號(hào)染色體缺失性磷酸酶(phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosometen;PTEN;EC3.1.3.67),又稱為多發(fā)性晚期腫瘤突變基因1(mutatedinmultipleadvancedcancers1;MMAC1),是一個(gè)腫瘤YZ基因,位于染色體10q23.3,轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物515kb,蛋白產(chǎn)物175氨基酸。PTEN蛋白含有一酪蛋白磷酸酶的功能區(qū)和約175個(gè)氨基酸左右的與骨架蛋白張力蛋白(tenasin)、輔助蛋白(auxilin)同源的區(qū)域,是一種雙重特異性磷酸酶,能使酪氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、磷酯酰肌醇(phosphoinositide)等去磷酸化。PTEN具有調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、防止細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)和分開(kāi)裂解、參與細(xì)胞凋亡、粘附、遷移、浸潤(rùn),控制細(xì)胞內(nèi)磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate;PIP3)水平,調(diào)控Akt/PKB信號(hào)通路等功能。PTEN基因突變和缺失將導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移,以及多發(fā)性錯(cuò)構(gòu)瘤綜合征(Cowdensyndrome)等?;诘孜锪字<〈?3,4,5-三磷酸,在PTEN的催化下,水解產(chǎn)生磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2),同時(shí)釋放出游離磷酸根,進(jìn)而與孔雀綠染料發(fā)生顯色反應(yīng)產(chǎn)生其峰值的變化(660nm波長(zhǎng)),以此測(cè)算PTEN的活性。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)120毫升裂解液(ReagentB)10毫升緩沖液(ReagentC)1毫升陰性液(ReagentD)1毫升反應(yīng)液(ReagentE)200微升終止液(ReagentF)1毫升顯色液(ReagentG)4毫升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)500微升產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1份保存方式保存裂解液(ReagentB)、緩沖液(ReagentC)、反應(yīng)液(ReagentE)和顯色液(ReagentG)在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;其余的保存在4℃冰箱里;終止液(ReagentF)和顯色液(ReagentG)具有腐蝕性,避免直接用手接觸;顯色液(ReagentG)避免光照,有效保證6月用戶自備15毫升離心管:用于樣品處理的容器1.5毫升離心管:用于樣品處理和保存的容器細(xì)胞刮脫棒:用于貼壁細(xì)胞脫離(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品收集培養(yǎng)箱:用于孵育反應(yīng)物比色皿:用于比色的容器分光光度儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液放進(jìn)冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶或60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿的待測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞(5X106細(xì)胞)小心加入3毫升預(yù)冷的清理液(ReagentA),覆蓋生長(zhǎng)表面小心抽去清理液使用細(xì)胞刮脫棒輕柔刮脫細(xì)胞加入3毫升清理液(ReagentA),混勻細(xì)胞移入到預(yù)冷的15毫升錐形離心管(注意:懸浮細(xì)胞從這一步驟開(kāi)始)放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液加入500微升裂解液(ReagentB),充分混勻轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管QL渦旋震蕩15秒置于冰槽里孵育30分鐘放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf5415)小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管移取2微升進(jìn)行蛋白定量測(cè)定(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-HL30030.1)即刻放進(jìn)-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作二、測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如細(xì)胞裂解萃取液等),置于冰槽里(注意:樣品須澄清)設(shè)定好分光光度儀(溫度為30℃):波長(zhǎng)為660nm,并置零準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管,標(biāo)記為1至5號(hào)管按下表分別加入陰性液(ReagentD)和標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)到每個(gè)離心管,混勻?qū)?至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見(jiàn)下表管號(hào)陰性液(ReagentD)標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)測(cè)定體系標(biāo)準(zhǔn)磷濃度10100微升20微摩爾/升225微升75微升15微摩爾/升350微升50微升10微摩爾/升475微升25微升5微摩爾/升5100微升00標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定移取20微升陰性液(ReagentD)到新的比色皿加入5微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液在37℃溫度下孵育10分鐘加入8微升終止液(ReagentF),混勻加入100微升顯色液(ReagentG),混勻室溫下靜置15分鐘,避免光照即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè):獲得吸光讀數(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至7四次構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為吸光單位(A);橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)磷濃度(微摩爾/升)樣品背景測(cè)定移取20微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入5微升待測(cè)樣品(總量100微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白)在37℃溫度下孵育10分鐘加入8微升終止液(ReagentF),混勻加入100微升顯色液(ReagentG),混勻室溫下靜置15分鐘,避免光照即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè):獲得吸光讀數(shù)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品背景對(duì)應(yīng)磷濃度樣品活性測(cè)定移取10微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入5微升待測(cè)樣品(總量100微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白)在37℃溫度下孵育2分鐘加入10微升反應(yīng)液(ReagentE)在37℃溫度下孵育10分鐘加入8微升終止液(ReagentF),混勻加入100微升顯色液(ReagentG),混勻室溫下靜置15分鐘,避免光照即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè):獲得吸光讀數(shù)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品活性對(duì)應(yīng)磷濃度計(jì)算樣品活性{[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品活性對(duì)應(yīng)磷濃度(微摩爾/升)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品背景對(duì)應(yīng)磷濃度(微摩爾/升)]X5(體系倍數(shù))X樣品稀釋倍數(shù)}÷10(反應(yīng)時(shí)間;分鐘)=納摩爾磷/毫升/分鐘÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=納摩爾磷/毫克/分鐘注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為25次操作,包括5次標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定操作時(shí),避免污染母液操作時(shí),須戴手套終止液(ReagentF)和顯色液(ReagentG)具有腐蝕性,避免直接用手接觸樣品切忌使用磷酸緩沖液和脫氧膽酸納處理比色測(cè)定后,比色皿須清洗徹底如果用戶沒(méi)有660nm波長(zhǎng),可以使用600至660nm的任一波長(zhǎng)替代顯示綠色表明具有較強(qiáng)酶活性空白對(duì)照讀數(shù)應(yīng)小于0.2建議待測(cè)樣本蛋白濃度為100微克/5微升;如果樣本酶活性過(guò)低或過(guò)高,則可以增加或降低樣本量;(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-HL30030.1)鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶活性單位濃度定義:在37℃溫度下,pH8.0的情況下,每單位酶在單位時(shí)間內(nèi)(每分鐘)釋放1微摩爾的磷本公司提供系列磷酸化酶檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)準(zhǔn)確[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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血液葡萄糖-6-磷酸脫氫酶酶動(dòng)力比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)
- 血液葡萄糖-6-磷酸脫氫酶酶動(dòng)力比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)[詳細(xì)]
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2014-12-25 00:00
期刊論文
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