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線粒體呼吸鏈復(fù)合物V活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
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2018-11-08 10:00 416閱讀次數(shù)
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MB50083v.A線粒體呼吸鏈復(fù)合物V活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途線粒體呼吸鏈復(fù)合物V(F0F1-ATP酶/ATP合成酶)活性光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng),測(cè)定與ATP合成對(duì)應(yīng)的ATP水解產(chǎn)生ADP過程中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后吸光峰值的降低,即采用光度法測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種純化線粒體樣品(動(dòng)物、人體、酵母)以及細(xì)胞或組織裂解懸液樣品的F0F1-ATP酶/ATP合成酶的特異性活性檢測(cè)。可用于心肌、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景線粒體呼吸鏈復(fù)合物V,通常稱為ATP合成酶(ATPsynthase)、F型ATP酶(FtypeATPase)和F1F0ATP酶(F1F0ATPase),是線粒體氧化磷酸化的反應(yīng)。其分子量為500KD,含有十六個(gè)亞單位,其中兩個(gè):ATP酶6和8為線粒體DNA編碼的。ATP酶主要有兩個(gè)結(jié)構(gòu)域:F0為質(zhì)子通道,由幾個(gè)膜蛋白構(gòu)成,包括a、b、c、d、e、F6、A6L、OSCP(oligomycinsensitiveconferringprotein)等;和F1催化活性結(jié)構(gòu)域,由水溶性的α3β3γδε蛋白構(gòu)成。其Z特征性的酶活性是寡霉素敏感的ATP合成酶。復(fù)合物V的主要功能在于產(chǎn)生大部分細(xì)胞所需的能量ATP。ATP的合成需要線粒體內(nèi)膜電子傳遞到氧分子時(shí),呼吸鏈蛋白所產(chǎn)生的質(zhì)子梯度變化。質(zhì)子通過F0結(jié)構(gòu)域傳遞到基質(zhì),激活F1催化活性結(jié)構(gòu)域,促使ATP合成。該酶異常會(huì)導(dǎo)致心肌和神經(jīng)系統(tǒng)疾病。基于ATP,在寡霉素參與下,受到F1F0ATP酶的水解,進(jìn)而通過丙酮酸激酶(pyruvatekinase;PK)和乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase;LDH)反應(yīng)系統(tǒng)中,還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide;NAD),產(chǎn)生的吸光峰值的變化(340nm),來定量分析F1F0ATP酶活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:F1F0ATPaseATP=ADP+PipyruvatekinasePhosphoenolpyruvate+ADP→pyruvate+ATPlactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+(高吸收峰)(低吸收峰)產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)20毫升反應(yīng)液(ReagentB)2.5毫升陰性液(ReagentC)2毫升底物液(ReagentD)500微升專性液(ReagentE)250微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;反應(yīng)液(ReagentB),避免光照,有效保證6月用戶自備比色皿:用于光度分析的容器分光光度儀:用于光度分析培養(yǎng)箱:用于孵育反應(yīng)物實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化;反應(yīng)液(ReagentB)注意避光。然后進(jìn)行下列操作。測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如純化線粒體樣品等),置于冰槽里設(shè)定好分光光度儀(溫度為30℃):波長為340nm,間隔30秒,讀數(shù)11次(共5分鐘),并置零緩沖液(ReagentA)室溫下均衡溫度背景對(duì)照測(cè)定移取780微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入20微升底物液(ReagentD)放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里孵育3分鐘加入100微升陰性液(ReagentC)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照:340波長讀數(shù)0分鐘-340波長讀數(shù)1分鐘或5分鐘樣品總活性測(cè)定移取780微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入20微升底物液(ReagentD)放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里孵育3分鐘加入100微升待測(cè)樣品(注意:10微克總線粒體蛋白)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品總活性讀數(shù):340波長讀數(shù)0分鐘-340波長讀數(shù)1分鐘或5分鐘樣品非特異活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)開始前,移取100微升待測(cè)樣品(注意:10微克總線粒體蛋白)到1.5毫升離心管,加入20微升專性液(ReagentE),混勻后,放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里孵育15分鐘。然后置于冰槽里備用移取760微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入20微升底物液(ReagentD)放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里孵育3分鐘加入120微升上述預(yù)處理的待測(cè)樣品上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品非特異活性讀數(shù):340波長讀數(shù)0分鐘-340波長讀數(shù)1分鐘或5分鐘計(jì)算樣品活性1)樣品活性(總活性和非特異活性)【(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X1(體系容量;毫升)X樣品稀釋倍數(shù)】÷【0.1(樣品容量;毫升)X6.22(毫摩爾吸光系數(shù)X1或5(反應(yīng)時(shí)間;分鐘)】=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克單位=微摩爾NADH/分鐘2)樣品特異活性樣品總活性-樣品非特異活性=樣品特異活性
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線粒體呼吸鏈復(fù)合物V活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- MB50083v.A線粒體呼吸鏈復(fù)合物V活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途線粒體呼吸鏈復(fù)合物V(F0F1-ATP酶/ATP合成酶)活性光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng),測(cè)定與ATP合成對(duì)應(yīng)的ATP水解產(chǎn)生ADP過程中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后吸光峰值的降低,即采用光度法測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種純化線粒體樣品(動(dòng)物、人體、酵母)以及細(xì)胞或組織裂解懸液樣品的F0F1-ATP酶/ATP合成酶的特異性活性檢測(cè)。可用于心肌、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景線粒體呼吸鏈復(fù)合物V,通常稱為ATP合成酶(ATPsynthase)、F型ATP酶(FtypeATPase)和F1F0ATP酶(F1F0ATPase),是線粒體氧化磷酸化的反應(yīng)。其分子量為500KD,含有十六個(gè)亞單位,其中兩個(gè):ATP酶6和8為線粒體DNA編碼的。ATP酶主要有兩個(gè)結(jié)構(gòu)域:F0為質(zhì)子通道,由幾個(gè)膜蛋白構(gòu)成,包括a、b、c、d、e、F6、A6L、OSCP(oligomycinsensitiveconferringprotein)等;和F1催化活性結(jié)構(gòu)域,由水溶性的α3β3γδε蛋白構(gòu)成。其Z特征性的酶活性是寡霉素敏感的ATP合成酶。復(fù)合物V的主要功能在于產(chǎn)生大部分細(xì)胞所需的能量ATP。ATP的合成需要線粒體內(nèi)膜電子傳遞到氧分子時(shí),呼吸鏈蛋白所產(chǎn)生的質(zhì)子梯度變化。質(zhì)子通過F0結(jié)構(gòu)域傳遞到基質(zhì),激活F1催化活性結(jié)構(gòu)域,促使ATP合成。該酶異常會(huì)導(dǎo)致心肌和神經(jīng)系統(tǒng)疾病?;贏TP,在寡霉素參與下,受到F1F0ATP酶的水解,進(jìn)而通過丙酮酸激酶(pyruvatekinase;PK)和乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase;LDH)反應(yīng)系統(tǒng)中,還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide;NAD),產(chǎn)生的吸光峰值的變化(340nm),來定量分析F1F0ATP酶活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:F1F0ATPaseATP=ADP+PipyruvatekinasePhosphoenolpyruvate+ADP→pyruvate+ATPlactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+(高吸收峰)(低吸收峰)產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)20毫升反應(yīng)液(ReagentB)2.5毫升陰性液(ReagentC)2毫升底物液(ReagentD)500微升專性液(ReagentE)250微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;反應(yīng)液(ReagentB),避免光照,有效保證6月用戶自備比色皿:用于光度分析的容器分光光度儀:用于光度分析培養(yǎng)箱:用于孵育反應(yīng)物實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化;反應(yīng)液(ReagentB)注意避光。然后進(jìn)行下列操作。測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如純化線粒體樣品等),置于冰槽里設(shè)定好分光光度儀(溫度為30℃):波長為340nm,間隔30秒,讀數(shù)11次(共5分鐘),并置零緩沖液(ReagentA)室溫下均衡溫度背景對(duì)照測(cè)定移取780微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入20微升底物液(ReagentD)放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里孵育3分鐘加入100微升陰性液(ReagentC)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照:340波長讀數(shù)0分鐘-340波長讀數(shù)1分鐘或5分鐘樣品總活性測(cè)定移取780微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入20微升底物液(ReagentD)放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里孵育3分鐘加入100微升待測(cè)樣品(注意:10微克總線粒體蛋白)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品總活性讀數(shù):340波長讀數(shù)0分鐘-340波長讀數(shù)1分鐘或5分鐘樣品非特異活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)開始前,移取100微升待測(cè)樣品(注意:10微克總線粒體蛋白)到1.5毫升離心管,加入20微升專性液(ReagentE),混勻后,放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里孵育15分鐘。然后置于冰槽里備用移取760微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入20微升底物液(ReagentD)放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里孵育3分鐘加入120微升上述預(yù)處理的待測(cè)樣品上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品非特異活性讀數(shù):340波長讀數(shù)0分鐘-340波長讀數(shù)1分鐘或5分鐘計(jì)算樣品活性1)樣品活性(總活性和非特異活性)【(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X1(體系容量;毫升)X樣品稀釋倍數(shù)】÷【0.1(樣品容量;毫升)X6.22(毫摩爾吸光系數(shù)X1或5(反應(yīng)時(shí)間;分鐘)】=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克單位=微摩爾NADH/分鐘2)樣品特異活性樣品總活性-樣品非特異活性=樣品特異活性[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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線粒體呼吸鏈復(fù)合物I活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
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2015-05-19 00:00
課件
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線粒體呼吸鏈復(fù)合物II活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 線粒體呼吸鏈復(fù)合物II活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途線粒體呼吸鏈復(fù)合物II(琥珀酸-輔酶Q還原酶)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用合成輔酶Q同功類似物二氯酚靛酚,通過反應(yīng)系統(tǒng)測(cè)定樣品中二氯酚靛酚還原后吸光峰值的變化,即采用比色法測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種純化線粒體樣品(動(dòng)物、人體、酵母)以及細(xì)胞或組織裂解懸液樣品的琥珀酸-輔酶Q還原酶的特異性活性檢測(cè)。可用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景線粒體呼吸鏈復(fù)合物II,通常稱為琥珀酸-輔酶Q還原酶或琥珀酸脫氫酶(Succinate-CoenzymeQReductase;SuccinateDehydrogenase),是線粒體電子傳遞鏈與三羧酸循環(huán)鏈接的載體:含有四個(gè)亞單位,包括共價(jià)結(jié)合的輔基黃素腺嘌呤二核苷酸(flavinadeninedinucleotide;FAD)和三個(gè)鐵硫ZX(Fe-Sclusters),以及細(xì)胞色素b亞單位,其Z特征性的酶活性是丙二酸鈉敏感的琥珀酸-輔酶Q還原酶。復(fù)合物II催化琥珀酸(succinate)被氧化為富馬酸(fumarate),線粒體內(nèi)電子由供體FAD傳遞到內(nèi)膜上輔酶Q受體(泛醌;ubiquinone)的能量轉(zhuǎn)移反應(yīng),進(jìn)行呼吸鏈傳遞。該酶異常會(huì)導(dǎo)致嗜鉻細(xì)胞瘤(paraganglioma)、腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤(pheochromocytoma)和Leigh綜合征?;阽晁岬孜?,通過琥珀酸-輔酶Q還原酶的催化,氧化為富馬酸,同時(shí)氧化型二氯酚靛酚(dichlorophenal-indophenol;DCPIP)轉(zhuǎn)化為還原型二氯酚靛酚(dichlorophenal-indophenol;DCPIPH2),在分光光度儀下產(chǎn)生吸光峰值的變化(600nm波長),由此定量測(cè)定琥珀酸-輔酶Q還原酶的特異活性。其反應(yīng)系統(tǒng)是:ComplexIISUCCINATE+DCPIP+CoQ→FUMARATE+DCPIPH2+CoQH2藍(lán)色無色↑Abs600nm↓Abs600nm產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)20毫升反應(yīng)液(ReagentB)2.5毫升陰性液(ReagentC)2毫升底物液(ReagentD)500微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;反應(yīng)液(ReagentB)和底物液(ReagentD),避免光照,有效保證6月用戶自備比色皿:用于比色的容器分光光度儀:用于比色分析培養(yǎng)箱:用于孵育反應(yīng)物實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化;緩沖液(ReagentA)室溫預(yù)熱;反應(yīng)液(ReagentB)和底物液(ReagentD)注意避光。然后進(jìn)行下列操作。測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如純化線粒體樣品等),置于冰槽里設(shè)定好分光光度儀(溫度為30℃):波長為600nm,間隔60秒,讀數(shù)6次(共5分鐘),并置零背景對(duì)照測(cè)定移取780微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入20微升底物液(ReagentD)上下傾倒數(shù)次,混勻放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里靜置3分鐘加入100微升陰性液(ReagentC)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放入分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照:600波長讀數(shù)0分鐘-600波長讀數(shù)1分鐘或5分鐘樣品活性測(cè)定移取780微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入20微升底物液(ReagentD)上下傾倒數(shù)次,混勻放進(jìn)30℃培養(yǎng)箱里靜置3分鐘加入100微升待測(cè)樣品(注意:10微克總線粒體蛋白)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放入分光光度儀檢測(cè),此為樣品活性讀數(shù):600波長讀數(shù)0分鐘-600波長讀數(shù)1分鐘或5分鐘計(jì)算樣品活性【(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X1(體系容量;毫升)X樣品稀釋倍數(shù)】÷【0.1(樣品容量;毫升)X21.8(毫摩爾吸光系數(shù)X1或5(反應(yīng)時(shí)間;分鐘)】=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克單位=微摩爾二氯酚靛酚/分鐘[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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線粒體呼吸鏈復(fù)合物I活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途線粒體呼吸鏈復(fù)合物I(NADH-輔酶Q還原酶)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用合成輔酶Q同功類似物和特異性YZ劑,通過反應(yīng)系統(tǒng)測(cè)定樣品中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用比色法測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種純化線粒體樣品(動(dòng)物、人體、酵母)以及細(xì)胞或組織裂解懸液樣品的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-輔酶Q還原酶的特異性活性檢測(cè)。其用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景線粒體呼吸鏈復(fù)合物I,通常稱為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸輔酶Q還原酶(reducednicotinamideadeninedinucleotidecoenzymeQreductase;NADH-CoQreductase),又稱為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶(reducednicotinamideadeninedinucleotidedehydrogenase;NADHdehydrogenase),是線粒體電子傳遞鏈中Zda的結(jié)構(gòu)成分:含有30至40多個(gè)多肽結(jié)構(gòu)。其特征性的酶活性是魚藤酮敏感的NADH-輔酶Q還原酶(NADH:QReductase)。復(fù)合物I催化線粒體內(nèi)電子由供體NADH傳遞到內(nèi)膜上輔酶Q受體(泛醌;ubiquinone)的能量轉(zhuǎn)移反應(yīng),為整個(gè)呼吸鏈反應(yīng)系統(tǒng)的**步?;谳o酶Q底物,在魚藤酮存在與否的情況下,通過NADH-輔酶Q還原酶的催化,轉(zhuǎn)化成還原型泛醌(CoQH2),同時(shí)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide;NAD),在分光光度儀下產(chǎn)生吸收峰值的變化(340nm波長),由此定量測(cè)定NADH-輔酶Q還原酶的特異活性。其反應(yīng)系統(tǒng)是:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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線粒體呼吸鏈復(fù)合物 II 活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 線粒體呼吸鏈復(fù)合物II活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書免費(fèi)下載,下載后方可查看??![詳細(xì)]
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2018-10-01 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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線粒體呼吸鏈復(fù)合物I活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途線粒體呼吸鏈復(fù)合物I(NADH-輔酶Q還原酶)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用合成輔酶Q同功類似物和特異性YZ劑,通過反應(yīng)系統(tǒng)測(cè)定樣品中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用比色法測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種純化線粒體樣品(動(dòng)物、人體、酵母)以及細(xì)胞或組織裂解懸液樣品的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-輔酶Q還原酶的特異性活性檢測(cè)。其用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景線粒體呼吸鏈復(fù)合物I,通常稱為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸輔酶Q還原酶(reducednicotinamideadeninedinucleotidecoenzymeQreductase;NADH-CoQreductase),又稱為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶(reducednicotinamideadeninedinucleotidedehydrogenase;NADHdehydrogenase),是線粒體電子傳遞鏈中Zda的結(jié)構(gòu)成分:含有30至40多個(gè)多肽結(jié)構(gòu)。其特征性的酶活性是魚藤酮敏感的NADH-輔酶Q還原酶(NADH:QReductase)。復(fù)合物I催化線粒體內(nèi)電子由供體NADH傳遞到內(nèi)膜上輔酶Q受體(泛醌;ubiquinone)的能量轉(zhuǎn)移反應(yīng),為整個(gè)呼吸鏈反應(yīng)系統(tǒng)的**步?;谳o酶Q底物,在魚藤酮存在與否的情況下,通過NADH-輔酶Q還原酶的催化,轉(zhuǎn)化成還原型泛醌(CoQH2),同時(shí)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide;NAD),在分光光度儀下產(chǎn)生吸收峰值的變化(340nm波長),由此定量測(cè)定NADH-輔酶Q還原酶的特異活性。其反應(yīng)系統(tǒng)是:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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動(dòng)物線粒體呼吸鏈復(fù)合物I活性定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 動(dòng)物線粒體呼吸鏈復(fù)合物I活性定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書[詳細(xì)]
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2024-09-17 19:14
專利
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組織谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-28 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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細(xì)胞谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 細(xì)胞谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-01-15 00:00
其它
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CK-E植物線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV(MRCC-IV)說明書
- CK-E植物線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV(MRCC-IV)說明書[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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組織乙醛脫氫酶2活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織乙醛脫氫酶2活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2014-12-30 00:00
安裝說明
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純化線粒體琥珀酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 純化線粒體琥珀酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途純化線粒體琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用合成電子受體染料,通過反應(yīng)系統(tǒng)測(cè)定染料還原后峰值的降低,即采用比色法測(cè)算樣品中單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種純化線粒體裂解懸液樣品琥珀酸脫氫酶的特異性活性檢測(cè)。用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景琥珀酸脫氫酶(succinatedehydrogenase;SDH;EC1.3.99.1)是三羧酸循環(huán)(tricarboxylicacidcycle;TCA)或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素,位于線粒體內(nèi)膜,參與細(xì)胞呼吸鏈。琥珀酸脫氫酶由27kd和70kd兩個(gè)單體組成。其功能在于催化琥珀酸(succinate)的氧化反應(yīng),產(chǎn)生延胡索酸(furmarate),通過黃素腺嘌呤二核苷酸(FlavinAdenineDinucleotide;FAD)傳遞電子?;阽晁崦摎涿傅姆磻?yīng)原理,使用人工電子受體染料二氯靛酚鈉(2,6-Dichloroindophenolsodium;DCIP),接受來自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸(ReducedflavinAdenineDinucleotide;FADH2)的電子,而被還原,在分光光度儀下,其吸光值(600nm波長)的變化,來測(cè)算琥珀酸脫氫酶的活性。其反應(yīng)方式為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)XX毫升裂解液(ReagentB)XX毫升緩沖液(ReagentC)XX毫升反應(yīng)液(ReagentD)XX毫升底物液(ReagentE)XX毫升陰性液(ReagentF)XX微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;反應(yīng)液(ReagentD)含有毒性物質(zhì),避免直接用手接觸;底物液(ReagentE),避免光照;有效保證3月用戶自備15毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器1.5毫升離心管:用于樣品制備和保存的容器4℃(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品處理DOUNCE勻漿器:用于裂解組織恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水槽:用于反應(yīng)物孵育比色皿:用于比色測(cè)定的容器分光光度儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化;底物液(ReagentE)注意避光。然后進(jìn)行下列操作。一、樣品準(zhǔn)備手術(shù)取出動(dòng)物組織,并秤重以確定200毫克組織重量(選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管(選擇步驟)加入XX毫升清理液(ReagentA)清洗(選擇步驟)抽去清洗液移入到一個(gè)液氮凍存管即刻放進(jìn)液氮罐過夜次日從液氮罐里取出,即刻(Z快速度)用研磨棒碾碎組織成粉末狀(注意:切莫使組織凍融)放進(jìn)一個(gè)15毫升錐形離心管加入置于冰槽里的XX毫升裂解液(ReagentB)渦旋震蕩5秒,充分混勻即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約20至40下)(注意:參見注意事項(xiàng)8)將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1500g小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心抽去上清液加入XX微升裂解液(ReagentB),混勻顆粒群移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-GMS30030.1)放進(jìn)-70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用二、測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品,置于冰槽里設(shè)定好分光光度儀(溫度為25℃):波長600nm,間隔60秒,讀數(shù)6次(共5分鐘),并置零緩沖液(ReagentC)在室溫下均衡溫度背景對(duì)照測(cè)定移取XX微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入XX微升反應(yīng)液(ReagentD)加入XX微升底物液(ReagentE)放進(jìn)25℃培養(yǎng)箱里靜置3分鐘[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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兔子線粒體呼吸鏈復(fù)合物II(琥珀酸-輔酶Q還原酶)試劑盒使用說明書
- 兔子線粒體呼吸鏈復(fù)合物II(琥珀酸-輔酶Q還原酶)試劑盒使用說明書[詳細(xì)]
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2014-09-01 00:00
選購指南
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組織乙酰輔酶A羧化酶(ACETYL-COA CARBOXYLASE)活性光度法定量 檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織乙酰輔酶A羧化酶(ACETYL-COA CARBOXYLASE)活性光度法定量 檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2014-12-23 00:00
選購指南
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組織谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途組織谷氨酰胺酶(glutaminase)活性光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過谷氨酰胺酶和谷氨酸脫氫酶的酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)還原后吸光峰值的,即采用光度法來測(cè)定組織裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織裂解懸液樣品(動(dòng)物、人體、昆蟲等)谷氨酰胺酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景谷氨酰胺酶(glutaminase;EC3.5.1.2)是一種氨基酸水解酶(amidohydrolase),將谷氨酰胺脫氨基(deaminating)轉(zhuǎn)化為谷氨酸。其同工酶具有組織特異性:其功能在肝細(xì)胞中產(chǎn)生的氨,用于合成尿素;在腎小管上皮細(xì)胞中產(chǎn)生的氨通過氨離子分泌,調(diào)節(jié)腎的酸堿平衡;同時(shí)在膠質(zhì)細(xì)胞(glialcell)和腸細(xì)胞中也有表達(dá)。谷氨酰胺酶在藥物和食品工業(yè)方面應(yīng)用廣泛,例如調(diào)味品的生產(chǎn)和白血病ZL的藥物等?;诘孜锕劝滨0吩诠劝滨0访该傅淖饔孟拢D(zhuǎn)化為谷氨酸和氨氣,進(jìn)而在谷氨酸脫氫酶的催化下,伴隨著氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizednicotinamideadeninedinucleotide;NAD+)轉(zhuǎn)化為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH),產(chǎn)生的吸光峰值的變化(340nm波長),來定量分析谷氨酰胺酶的活性。其酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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純化線粒體呼吸控制率(RCR)定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途純化線粒體呼吸控制率(RCR)定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過極譜法檢測(cè)系統(tǒng)(polarographicsystem)測(cè)定新鮮活體線粒體在ADP存在(III態(tài)呼吸)與否(IV態(tài)呼吸)的情況下溶解氧(dissolvedoxygen)的消耗差異,即呼吸控制率(RCR),以評(píng)價(jià)線粒體結(jié)構(gòu)和功能完整性以及氧化磷酸化效率的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的??梢员挥糜诰€粒體生理功能和藥物作用機(jī)制等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)易,活體檢測(cè),性能穩(wěn)定。技術(shù)背景線粒體是細(xì)胞呼吸鏈和氧化磷酸化的ZX。電子傳遞和ATP合成通過質(zhì)子梯度偶聯(lián)成一體。線粒體結(jié)構(gòu)完整,功能正常,底物充分,電子傳遞形成的質(zhì)子梯度不斷被消耗,電子得以順暢傳遞,氧氣快速消耗,其耗氧率大,為III態(tài)呼吸。ADP耗竭,質(zhì)子梯度不能消耗,阻礙電子傳遞,氧氣消耗減少,為IV態(tài)呼吸。呼吸控制率(respiratorycontrolratio或respiratorycontrolindex;RCR),又稱呼吸調(diào)節(jié)比,是指III態(tài)(加入ADP)的呼吸速率與IV態(tài)(ADP耗竭)的呼吸速率之比。正常線粒體的RCR為3至10:RCR降低意味著線粒體ATP合成功能損傷,呼吸障礙;RCR意味著細(xì)胞活動(dòng)旺盛,代謝加快。產(chǎn)品內(nèi)容介質(zhì)液(ReagentA)毫升態(tài)底物液(ReagentB)微升態(tài)底物液(ReagentC)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在-20℃冰箱里,有效保證6月用戶自備CLARK氧電極儀:用于測(cè)定溶解氧濃度實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前,制備好新鮮的線粒體置于冰槽里備用;同時(shí)將-20℃冰箱里的試劑融化,并預(yù)熱氧電極儀到25℃。然后進(jìn)行下列操作。1.加入xx毫升介質(zhì)液(ReagentA)到反應(yīng)玻璃槽2.使用微型磁力子攪拌,充分混勻3.密封反應(yīng)槽[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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動(dòng)物硬組織活性線粒體分離試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 動(dòng)物硬組織活性線粒體分離試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-19 00:00
操作手冊(cè)
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組織乙酰輔酶A羧化酶活性光度法定量 檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途組織乙酰輔酶A羧化酶(ACETYL-COACARBOXYLASE)活性光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過底物乙酰輔酶A和碳酸氫鹽受到乙酰輔酶A羧化酶的催化反應(yīng)后,進(jìn)而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng),測(cè)定產(chǎn)生ADP過程中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的氧化反應(yīng),即采用光度法測(cè)定其氧化后峰值的變化,以分析組織裂解樣品中乙酰輔酶A羧化酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或完全純化酶樣品中乙酰輔酶A羧化酶活性的定量檢測(cè),以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,高度敏感。技術(shù)背景乙酰輔酶A羧化酶(AcetylCoACarboxylase;ACC;EC6.4.1.2),又稱為乙酰輔酶A碳酸氫鹽連接酶(AcetylCoA:bicarbonateligase-ATP),是ATP依賴性含生物素酶,參與脂肪酸生物合成。哺乳動(dòng)物乙酰輔酶A羧化酶單體分子量為225-250Kd,含有許多磷酸化位點(diǎn),以及1個(gè)生物素輔基位點(diǎn)、2個(gè)催化位點(diǎn)和1個(gè)異構(gòu)(allosteric)位點(diǎn)。乙酰輔酶A羧化酶催化生物素輔基(prostheticgroup)的羧基化反應(yīng),然后將生物素上的羧基轉(zhuǎn)移到輔酶A上,產(chǎn)生丙二酰輔酶A(malonylCoA),成為長鏈脂肪酸合成前的關(guān)鍵步驟。AMP活化蛋白激酶(AMP-ActivatedKinase;AMPK)調(diào)節(jié)該酶的活性,而十四烷基氧糠酸(5-(tetradecyloxy)-2-furoicacid;TOFA)YZ該酶的活性?;诘孜镆阴]o酶A(acetylCoA)和碳酸氫鹽,在ATP的存在下,受到乙酰輔酶A羧化酶的催化,獲得產(chǎn)物丙二酰輔酶A和ADP,進(jìn)而通過丙酮酸激酶(pyruvatekinase;PK)和乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase;LDH)反應(yīng)系統(tǒng)中,還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizednicotinamideadeninedinucleotide;NAD),其吸光峰值的變化(340nm),來定量分析乙酰輔酶A羧化酶的活性。其反應(yīng)方式為:AcetylCoACarboxylaseAcetylCo-A+ATP+HCO3→MalonylCoA+ADP+PipyruvatekinasePhosphoenolpyruvate+ADP→pyruvate+ATPlactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+(高吸收峰)(低吸收峰)產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)60毫升裂解液(ReagentB)10毫升緩沖液(ReagentC)20毫升酶促液(ReagentD)2毫升反應(yīng)液(ReagentE)2毫升底物液(ReagentF)2毫升陰性液(ReagentG)500微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器15毫升錐形離心管:用于樣品處理的容器DOUNCE勻漿器:用于裂解組織(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品預(yù)處理1厘米光徑比色皿或96孔板:用于光度分析操作的容器分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于樣品光度分析[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途細(xì)胞谷氨酰胺酶(glutaminase)活性光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過谷氨酰胺酶和谷氨酸脫氫酶的酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)還原后吸光峰值的,即采用光度法來測(cè)定細(xì)胞裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解懸液樣品(動(dòng)物、人體、昆蟲等)谷氨酰胺酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景谷氨酰胺酶(glutaminase;EC3.5.1.2)是一種氨基酸水解酶(amidohydrolase),將谷氨酰胺脫氨基(deaminating)轉(zhuǎn)化為谷氨酸。其同工酶具有組織特異性:其功能在肝細(xì)胞中產(chǎn)生的氨,用于合成尿素;在腎小管上皮細(xì)胞中產(chǎn)生的氨通過氨離子分泌,調(diào)節(jié)腎的酸堿平衡;同時(shí)在膠質(zhì)細(xì)胞(glialcell)和腸細(xì)胞中也有表達(dá)。谷氨酰胺酶在藥物和食品工業(yè)方面應(yīng)用廣泛,例如調(diào)味品的生產(chǎn)和白血病ZL的藥物等。基于底物谷氨酰胺在谷氨酰胺酶酶的作用下,轉(zhuǎn)化為谷氨酸和氨氣,進(jìn)而在谷氨酸脫氫酶的催化下,伴隨著氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizednicotinamideadeninedinucleotide;NAD+)轉(zhuǎn)化為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH),產(chǎn)生的吸光峰值的變化(340nm波長),來定量分析谷氨酰胺酶的活性。其酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞長鏈脂酰輔酶A合成酶活性酶連續(xù)循環(huán)光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 細(xì)胞長鏈脂酰輔酶A合成酶活性酶連續(xù)循環(huán)光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途細(xì)胞長鏈脂酰輔酶A合成酶(LONG-CHAINACYLCOASYNTHETASE;LACS)活性酶連續(xù)循環(huán)光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過肌激酶、丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶的酶連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用光度法來測(cè)定細(xì)胞裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解懸液樣品(動(dòng)物、人體等)長鏈脂酰輔酶A合成酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景脂肪酸β氧化過程(β-oxidation)在動(dòng)物組織的線粒體發(fā)生的脂肪酸代謝通路,可概括為活化、轉(zhuǎn)移、β氧化及Z后經(jīng)三羧酸循環(huán)被徹底氧化生成CO2和H2O,并釋放能量等四個(gè)階段。脂酰輔酶A合成酶(acylcoAsynthetase;EC.6.2.1.3),又稱為脂肪酸硫激酶(fattyacidthiokinase)或脂酰輔酶A連接酶(acylcoAligase),是脂肪酸進(jìn)入β-氧化前的活化所必需:在ATP、CoA-SH、Mg2+存在下,催化飽和或不飽和直鏈脂肪酸分子(C4)連接輔酶A合成相應(yīng)的脂酰輔酶A。其為一高能化合物,水溶性增強(qiáng),提高代謝活性。當(dāng)脂肪酸進(jìn)入細(xì)胞后,在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體外膜上先被活化,形成脂酰輔酶A衍生物,然后再進(jìn)入線粒體內(nèi)氧化。脂酰輔酶A合成酶分成三種底物特異性的種類:小于4個(gè)碳(C4)的短鏈脂酰輔酶A合成酶(acetyl-CoAsynthetase),介于4至12個(gè)碳(C4-C12)的中鏈脂酰輔酶A合成酶(butyryl-CoAsynthetase),和大于12個(gè)碳(C12)的長鏈脂酰輔酶A合成酶(palmitoylCoAsynthetase)?;陂L鏈脂肪酸棕櫚酸(palmitate)和輔酶A在長鏈脂酰輔酶A合成酶的作用下,產(chǎn)生棕櫚酰輔酶A(palmitoyl-CoA)后,通過肌激酶(myokinase)、丙酮酸激酶(pyruvatekinase)和乳酸脫氫酶(lacticdehydrogenase)系統(tǒng),測(cè)定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizednicotinamideadeninedinucleotide;NAD)的變化(340nm波長),來定量分析長鏈脂酰輔酶A合成酶的活性。長鏈脂酰輔酶A合成酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)系統(tǒng)為:Long-chainacylcoAsynthetasepalmitate+CoA+ATP→palmitoyl-CoA+AMP+PPimyokinaseAMP+ATP→2ADPpyruvatekinase2ADP+2phosphoenolpyruvate→2ATP+2pyruvatelacticdehydrogenase2pyruvate+2β-NADH→2lactate+2β-NAD+產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)120毫升裂解液(ReagentB)10毫升緩沖液(ReagentC)5毫升反應(yīng)液(ReagentD)500微升酶促液(ReagentE)250微升底色液(ReagentF)250微升陰性液(ReagentG)250微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存反應(yīng)液(ReagentD)、酶促液(ReagentE)和底色液(ReagentF)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;反應(yīng)液(ReagentD)和底色液(ReagentF)避免光照;有效保證6月用戶自備15毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器細(xì)胞刮脫棒:用于脫離貼壁細(xì)胞(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品制備200微升1厘米光徑比色皿或96孔板:用于光度分析的容器分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于光度分析實(shí)驗(yàn)步驟樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶或60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿的待測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞(1至5X106細(xì)胞)小心加入3毫升清理液(ReagentA),覆蓋生長表面小心抽去清理液使用細(xì)胞刮脫棒輕柔刮脫細(xì)胞(注意:可以使用胰酶消化)加入3毫升清理液(ReagentA),混勻細(xì)胞移入到預(yù)冷的15毫升錐形離心管(注意:懸浮細(xì)胞從這一步驟開始)放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液加入500微升裂解液(ReagentB),充分混勻轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管QL渦旋震蕩15秒置于冰槽里孵育30分鐘放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf5415)小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-HL30030.1)即刻放進(jìn)-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作測(cè)定準(zhǔn)備開啟并設(shè)定好分光光度儀(溫度為25℃):波長340nm,間隔5分鐘,讀數(shù)3次(共15分鐘),并置零從-20℃冰箱里取出試劑,置于冰槽里融化;反應(yīng)液(ReagentD)和底色液(ReagentF)避免光照緩沖液(ReagentC)室溫下均衡溫度背景對(duì)照測(cè)定移取195微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入25微升反應(yīng)液(ReagentD)加入12.5微升酶促液(ReagentE)加入12.5微升底色液(ReagentF)上下傾倒數(shù)次,混勻在25℃溫度下孵育3分鐘加入5微升陰性液(ReagentG)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照(0分鐘讀數(shù)-15分鐘讀數(shù))樣品測(cè)定移取195微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入25微升反應(yīng)液(ReagentD)加入12.5微升酶促液(ReagentE)加入12.5微升底色液(ReagentF)上下傾倒數(shù)次,混勻在25℃溫度下孵育3分鐘加入5微升待測(cè)樣品(20微克蛋白)(注意:樣品須清澈)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品讀數(shù)(0分鐘讀數(shù)-15分鐘讀數(shù))五、計(jì)算樣品活性[(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X0.25(體系容量;毫升)X樣品稀釋倍數(shù)]÷[0.005(樣品容量;毫升)X6.22(毫摩爾吸光系數(shù))X15(反應(yīng)時(shí)間;分鐘)X2]=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克單位=微摩爾棕櫚酰輔酶A/分鐘酶標(biāo)儀測(cè)定在96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記:背景對(duì)照和樣品分別移取195微升緩沖液(ReagentC)到96孔板里分別加入25微升反應(yīng)液(ReagentD)分別加入12.5微升酶促液(ReagentE)分別加入12.5微升底色液(ReagentF)輕輕搖動(dòng)96孔板在25℃溫度下孵育3分鐘分別加入5微升陰性液(ReagentG)或待測(cè)樣品(20微克蛋白)到相應(yīng)孔里(注意:樣品須清澈)輕輕搖動(dòng)96孔板即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè):0分鐘讀數(shù)和15分鐘讀數(shù)活性計(jì)算:[(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X樣品稀釋倍數(shù)X0.25(體系容量;毫升)]÷[0.005(樣品容量;毫升)X6.22(毫摩爾吸光系數(shù))X0.6(光徑距離;厘米)X15(反應(yīng)時(shí)間;分鐘)X2]=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克單位=微摩爾棕櫚酰輔酶A/分鐘注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為20次操作,包括背景對(duì)照操作時(shí),須戴手套系統(tǒng)操作過程中,背景測(cè)定只需1次建議使用比色皿測(cè)定樣品須澄清,至關(guān)重要加樣后3秒內(nèi)光度測(cè)定測(cè)定值由高到低變化;測(cè)定可持續(xù)15分鐘光度測(cè)定后,比色皿須清洗徹底樣本測(cè)定0分鐘讀數(shù)高于15分鐘讀數(shù)表明具有酶活性建議待測(cè)樣本蛋白濃度為20微克/5微升(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-HL30030.1)如果待測(cè)樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度長鏈脂酰輔酶A合成酶單位活性定義為:在25℃,pH8.1條件下,每分鐘內(nèi)能夠合成1微摩爾棕櫚酰輔酶A所需的酶量作為一個(gè)活性單位本公司提供系列脂肪酸代謝檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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