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有機(jī)磷和氨基甲酸脂類酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
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本文由 上海銘博生物科技有限公司 整理匯編
2018-11-08 10:00 944閱讀次數(shù)
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1使用目的:本試劑盒用于蔬菜、水果、相應(yīng)食物、水及中毒殘留物中有機(jī)磷和氨基甲酸脂類殘留的定量檢測。2實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有有機(jī)磷和氨基甲酸脂類偶聯(lián)抗原,加入有機(jī)磷和氨基甲酸脂類標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離有機(jī)磷和氨基甲酸脂類與微孔條上預(yù)包被的有機(jī)磷和氨基甲酸脂類偶聯(lián)抗原互相競爭抗有機(jī)磷和氨基甲酸脂類抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測,吸光值與樣品中有機(jī)磷和氨基甲酸脂類含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中有機(jī)磷和氨基甲酸脂類的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的有機(jī)磷和氨基甲酸脂類偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。3.2有機(jī)磷和氨基甲酸脂類標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗有機(jī)磷和氨基甲酸脂類抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存
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有機(jī)磷和氨基甲酸脂類酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
- 1使用目的:本試劑盒用于蔬菜、水果、相應(yīng)食物、水及中毒殘留物中有機(jī)磷和氨基甲酸脂類殘留的定量檢測。2實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有有機(jī)磷和氨基甲酸脂類偶聯(lián)抗原,加入有機(jī)磷和氨基甲酸脂類標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離有機(jī)磷和氨基甲酸脂類與微孔條上預(yù)包被的有機(jī)磷和氨基甲酸脂類偶聯(lián)抗原互相競爭抗有機(jī)磷和氨基甲酸脂類抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測,吸光值與樣品中有機(jī)磷和氨基甲酸脂類含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中有機(jī)磷和氨基甲酸脂類的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的有機(jī)磷和氨基甲酸脂類偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。3.2有機(jī)磷和氨基甲酸脂類標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗有機(jī)磷和氨基甲酸脂類抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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蔬菜和水果中有機(jī)磷有機(jī)氯擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)
- 蔬菜和水果中有機(jī)磷有機(jī)氯擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)[詳細(xì)]
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2011-04-09 00:00
產(chǎn)品樣冊
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TZ87-616檢測果蔬中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類的含量
- TZ87-616檢測果蔬中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類的含量TZ87-616農(nóng)殘留快速檢測儀是對(duì)果蔬中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類的含量進(jìn)行快速準(zhǔn)確的檢測。該類儀器主要針對(duì)各級(jí)政府進(jìn)行監(jiān)督、管理、執(zhí)法、保障部門以及蔬菜檢測ZX、農(nóng)貿(mào)市場、超市、環(huán)保、蔬菜種植基地、餐飲等單位對(duì)果蔬中農(nóng)殘留的測定。在一定條件下,有機(jī)磷(樂果、蠅毒磷等)和氨基甲酸酯(抗蚜威、速滅威、殘殺威、葉蟬散、異丙威等)類藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有YZ作用,其YZ率與藥的濃度呈正相關(guān)。TZ87-616農(nóng)殘留快速檢測儀技術(shù)參數(shù)儀器參考JB/T9324-1999可見分光光度計(jì)專業(yè)標(biāo)準(zhǔn)開發(fā)生產(chǎn)。完備的數(shù)據(jù)庫功能(實(shí)時(shí)顯示,存儲(chǔ)、分析、導(dǎo)出、上傳、打印、處理檢測數(shù)據(jù)),采用可靠隊(duì)列和安全通道技術(shù)采用認(rèn)證和加密手段,保證了數(shù)據(jù)的交互和傳輸安全。檢測依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),能夠?qū)?nèi)置的食品檢測相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行升級(jí)。金屬外殼,結(jié)實(shí)耐用。通道數(shù):兩排通道,每排8個(gè)通道,共16個(gè)通道;波長示值誤差:±3nm。波長重復(fù)性:≤5nm。透射比示值誤差:±1.0%。雜散光:≤0.5%(360nm)。漂移:≤0.5%/30min(500nm)。YZ率檢測范圍:01**%。吸光度范圍:0.000~4.000ABS。波長范圍:412nm。靈敏度:0.0001Abs。數(shù)據(jù)儲(chǔ)存100,000條。光源:進(jìn)口光源系統(tǒng)??梢愿鶕?jù)自身需要選擇內(nèi)置進(jìn)口濾光片,保證純凈穩(wěn)定度。樣品檢測時(shí)間:≤3分鐘。比色皿:10×10標(biāo)準(zhǔn)樣品池。波長校準(zhǔn):自動(dòng)校準(zhǔn)。專用光學(xué)探測器,快速感應(yīng)光強(qiáng)變化,暗電流極小。顯示:5.7寸大屏液晶顯示。檢測完成有蜂鳴提示。接口:帶USB接口,可進(jìn)行雙向數(shù)據(jù)傳輸。內(nèi)置微型熱敏打印機(jī)。[詳細(xì)]
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2018-10-07 10:00
產(chǎn)品樣冊
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GBT5009.199-2003 蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量快速檢測標(biāo)準(zhǔn)
- 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了由酶YZ法測定蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢驗(yàn)方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速篩選測定。
原理:
膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯(紅色)水解為乙酸與靛酚(藍(lán)色),有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶有YZ作用,使催化、水解、變色的過程發(fā)生改變,由此可判斷出樣品中是否有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。
[詳細(xì)]
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2024-09-11 18:03
標(biāo)準(zhǔn)
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NY-T 448-2001 蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測方法
- 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了甲胺磷等有機(jī)磷和克百威等氨基甲酸醋類農(nóng)藥在蔬菜中的殘毒快速檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于葉菜類(除韭菜)、果菜類、豆菜類、瓜菜類、根菜類(除胡蘿卜、菱白等)中甲胺磷、氧化樂果、對(duì)硫磷、甲拌磷、久效磷、倍硫磷、殺撲磷、敵敵畏、克百威、涕滅威、滅多威、抗蚜威、丁硫克百威、甲蔡威、丙硫克百威、速滅威、殘殺威、異丙威等的農(nóng)藥殘毒快速檢測。歡迎索取詳細(xì)資料!164267[詳細(xì)]
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2018-09-26 10:00
產(chǎn)品樣冊
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GBT5009.199-2003 蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測
- 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了由酶YZ法測定蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速篩選測定。歡迎索取詳細(xì)資料!164267[詳細(xì)]
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2018-09-26 10:00
產(chǎn)品樣冊
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NYT761-2004蔬菜和水果中有機(jī)磷有機(jī)氯擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留
- NYT761-2004蔬菜和水果中有機(jī)磷有機(jī)氯擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留檢測[詳細(xì)]
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2018-11-13 15:46
產(chǎn)品樣冊
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GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測
- 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了由酶YZ法測定蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢驗(yàn)方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速篩選測定。
[詳細(xì)]
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2024-09-10 22:34
標(biāo)準(zhǔn)
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NY 761-2004-T 蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留
- NY 761-2004-T 蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留[詳細(xì)]
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2012-08-01 00:00
其它
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蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定
- 蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定[詳細(xì)]
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2024-09-14 19:13
操作手冊
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蔬菜中有機(jī)磷有機(jī)氯擬除蟲菊酯氨基甲酸酯類等農(nóng)藥多
- 蔬菜中有機(jī)磷有機(jī)氯擬除蟲菊酯氨基甲酸酯類等農(nóng)藥多[詳細(xì)]
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2024-09-18 02:54
操作手冊
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脂聯(lián)素酶聯(lián)免疫分析
- 兔子脂聯(lián)素(ADP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定兔子血清,血漿及相關(guān)液體樣本中脂聯(lián)素(ADP)的含量。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中兔子脂聯(lián)素(ADP)水平。用純化的兔子脂聯(lián)素(ADP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入脂聯(lián)素(ADP),再與HRP標(biāo)記的脂聯(lián)素(ADP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂聯(lián)素(ADP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中兔子脂聯(lián)素(ADP)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:135μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為90μg/L,60μg/L,30μg/L,15μg/L,7.5μg/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%檢測范圍:3μg/L-100μg/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-10-23 10:31
產(chǎn)品樣冊
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大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
- 大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中c-Jun氨基末端激酶(JNK)的含量。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)水平。用純化的大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入c-Jun氨基末端激酶(JNK),再與HRP標(biāo)記的c-Jun氨基末端激酶(JNK)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的c-Jun氨基末端激酶(JNK)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:22.5ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為15ng/ml,10ng/ml,5ng/ml,2.5ng/ml,1.25ng/ml)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和15%檢測范圍:0.6ng/ml-20ng/ml保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月www.biokanu.com[詳細(xì)]
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2018-09-27 10:00
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