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細胞基質金屬蛋白酶2(MMP-2)活性免疫捕獲定量檢測試劑盒

本文由 上海銘博生物科技有限公司 整理匯編

2018-11-08 10:00 757閱讀次數

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主要用途細胞基質金屬蛋白酶2(MMP-2)活性免疫捕獲定量檢測試劑是一種旨在通過使用MMP-2特異性抗體捕獲樣品中的MMP-2抗原蛋白,識別并切離人工合成含硫多肽,釋放出巰基,進而使用Ellman試劑,產生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產物吸光峰值的變化,來測定樣品中酶活性的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞裂解萃取液樣品(動物、人體)樣品中基質金屬蛋白酶2的特異活性定量檢測。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術背景基質金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinases;MMPs)是一類結構高度同源的分泌型或膜相關性鋅內肽酶的總稱,因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。其功能在于分解細胞外基質成分。迄今為止發(fā)現的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細胞外基質(extracellularmatrix)成分,同時參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、組織再吸收(tissueresorption)、疾病發(fā)生,例如關節(jié)炎、癌細胞浸入轉移等。根據降解的底物不同可將MMPs分為4大類:(1)膠原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖;(2)明膠酶(Ⅳ型膠原酶):MMP2、MMP9,又稱明膠酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維;(3)基質溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金屬蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內絕大多數細胞并不儲備MMPs,當需要MMPs的信號傳遞到細胞后才臨時合成,合成的MMPs以無活性的酶原(proenzyme)形式分泌到細胞外,隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活,一種激活的MMPs可激活另一種MMPs,形成瀑布效應。基質金屬蛋白酶-2,又稱明膠酶A(gelatinase-A)或IV型膠原酶(typeIVcollagenase),其前體分子量為XX,激活后分子量為XX和XX。它在血清或細胞上清中濃度通常為10至200納克/毫升。它的作用目標是天然和變性膠原蛋白(collagens)、纖維連接蛋白(fibronectin)、彈性纖維蛋白(elastin)、層粘連蛋白-5(laminin-5)、前體腫瘤壞死因子-α(pro-TNF-α)和神經(蛋白)聚糖(neurocan)?;|金屬蛋白酶-2與腫瘤發(fā)展與轉移、血管形成、動脈粥樣硬化等疾病有關?;|金屬蛋白酶2的活性檢測通過使用MMP-2特異性抗體涂板在孔板里的相應孔里,然后捕獲樣品中的MMP-2抗原蛋白,在膠原酶潛酶活化劑醋酸氨基苯汞(4-aminophenylmercuricacetate;APMA)的存在下,識別并切離人工合成含硫多肽(thiopeptide)底物Ac-PLG(2-mercapto-4-methyl-pentanoyl)-LG-OC2H5,釋放出巰基(sulfhydrylgroup),進而與Ellman試劑5,5-二硫基-雙(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid);DTNB]反應后,產生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitrobenzoicacid;TNB),通過其吸收峰值的變化(412nm波長),來定量測定組織基質金屬蛋白酶2的特異活性。其反應系統(tǒng)為:

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