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組織乙酰輔酶A羧化酶活性光度法定量 檢測試劑盒產(chǎn)品說明書

本文由 上海科學(xué)儀器有限公司 整理匯編

2018-11-18 10:00 695閱讀次數(shù)

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主要用途組織乙酰輔酶A羧化酶(ACETYL-COACARBOXYLASE)活性光度法定量檢測試劑是一種旨在通過底物乙酰輔酶A和碳酸氫鹽受到乙酰輔酶A羧化酶的催化反應(yīng)后,進(jìn)而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng),測定產(chǎn)生ADP過程中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的氧化反應(yīng),即采用光度法測定其氧化后峰值的變化,以分析組織裂解樣品中乙酰輔酶A羧化酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或完全純化酶樣品中乙酰輔酶A羧化酶活性的定量檢測,以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,高度敏感。技術(shù)背景乙酰輔酶A羧化酶(AcetylCoACarboxylase;ACC;EC6.4.1.2),又稱為乙酰輔酶A碳酸氫鹽連接酶(AcetylCoA:bicarbonateligase-ATP),是ATP依賴性含生物素酶,參與脂肪酸生物合成。哺乳動(dòng)物乙酰輔酶A羧化酶單體分子量為225-250Kd,含有許多磷酸化位點(diǎn),以及1個(gè)生物素輔基位點(diǎn)、2個(gè)催化位點(diǎn)和1個(gè)異構(gòu)(allosteric)位點(diǎn)。乙酰輔酶A羧化酶催化生物素輔基(prostheticgroup)的羧基化反應(yīng),然后將生物素上的羧基轉(zhuǎn)移到輔酶A上,產(chǎn)生丙二酰輔酶A(malonylCoA),成為長鏈脂肪酸合成前的關(guān)鍵步驟。AMP活化蛋白激酶(AMP-ActivatedKinase;AMPK)調(diào)節(jié)該酶的活性,而十四烷基氧糠酸(5-(tetradecyloxy)-2-furoicacid;TOFA)YZ該酶的活性?;诘孜镆阴]o酶A(acetylCoA)和碳酸氫鹽,在ATP的存在下,受到乙酰輔酶A羧化酶的催化,獲得產(chǎn)物丙二酰輔酶A和ADP,進(jìn)而通過丙酮酸激酶(pyruvatekinase;PK)和乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase;LDH)反應(yīng)系統(tǒng)中,還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizednicotinamideadeninedinucleotide;NAD),其吸光峰值的變化(340nm),來定量分析乙酰輔酶A羧化酶的活性。其反應(yīng)方式為:AcetylCoACarboxylaseAcetylCo-A+ATP+HCO3→MalonylCoA+ADP+PipyruvatekinasePhosphoenolpyruvate+ADP→pyruvate+ATPlactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+(高吸收峰)(低吸收峰)產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)60毫升裂解液(ReagentB)10毫升緩沖液(ReagentC)20毫升酶促液(ReagentD)2毫升反應(yīng)液(ReagentE)2毫升底物液(ReagentF)2毫升陰性液(ReagentG)500微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器15毫升錐形離心管:用于樣品處理的容器DOUNCE勻漿器:用于裂解組織(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品預(yù)處理1厘米光徑比色皿或96孔板:用于光度分析操作的容器分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于樣品光度分析

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