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植物線粒體粗提分離試劑盒產品說明書(中文版)
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本文由 上海哈靈生物科技有限公司 整理匯編
2015-01-14 00:00 284閱讀次數
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植物線粒體粗提分離試劑盒產品說明書(中文版)
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植物線粒體粗提分離試劑盒產品說明書(中文版)
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2015-01-14 00:00
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植物線粒體粗提分離試劑盒
- 主要用途植物線粒體粗提分離試劑是一種旨在從植物細胞或組織中分離出完整而純化的線粒體細胞器的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適合于各種新鮮植物組織,包括葉片(leaf)、谷粒(grain)、種子(seed)、以及培養(yǎng)細胞的線粒體的制備。其制備物產量高,可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。產品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定,分離產量和純度堪稱國際同類產品**。技術背景線粒體細胞器的分離是現代細胞生物學研究的Z常用的手段之一。從任何組織或細胞分離線粒體的技術方法基本上采用:**,通過機械或化學方法破裂細胞;第二,通過低速差速離心去除殘渣碎屑和巨大細胞器;第三,通過高速差速離心獲得線粒體;甚至,第四,可以通過等密度離心獲得純度更高的線粒體。[詳細]
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動物硬組織線粒體粗提分離試劑盒產品說明書(中文版)
- 主要用途動物硬組織線粒體粗提分離試劑是一種旨在從動物硬組織中分離出完整而純化的線粒體細胞器的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。適合于各種動物硬組織(心臟或肌肉)的線粒體的制備??梢员挥糜诩毎蛲觥⑿盘杺鬟f、能量代謝、蛋白組學和病理生理學等的研究。產品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定,分離產量和純度堪稱同類產品**。技術背景線粒體細胞器的分離是現代細胞生物學研究的Z常用的手段之一。從任何組織或細胞分離線粒體的技術方法基本上采用:**,通過機械或化學方法破裂細胞;第二,通過低速差速離心去除殘渣碎屑和巨大細胞器;第三,通過高速差速離心獲得線粒體;甚至,第四,可以通過等密度離心獲得純度更高的線粒體。產品內容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升凈化液(ReagentC)毫升強化液(ReagentD)毫升保存液(ReagentE)毫升酶解液(ReagentF)毫升產品說明書1份保存方式保存凈化液(ReagentC)和酶解液(ReagentF)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里,有效保證12月用戶自備15毫升錐形離心管:用于線粒體初步制備操作的容器1.5毫升離心管:用于保存線粒體的容器4℃臺式離心機:用于沉淀細胞4℃超速離心機:用于分離細胞器成分DOUNCE勻漿器:用于裂解細胞[詳細]
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- 主要用途動物全血線粒體粗提分離試劑是一種旨在通過化學溶解以純化血白細胞、物理或化學破膜及離心處理分離出完整而純化的線粒體細胞器的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物血細胞中的線粒體的制備。其制備物產量高,可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、能量代謝、蛋白組學和病理生理學等的研究。產品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定,分離產量和純度堪稱同類產品**。技術背景線粒體細胞器的研究是現代細胞生物學的Z重要的課題之一。線粒體成為生物衰老、古生物、細胞凋亡、腫瘤、HIV、老年癡呆癥、糖尿病、肌肉疾病等研究的主要對象。從任何組織或細胞分離線粒體的技術方法基本上采用:**,通過機械或化學方法破裂細胞;第二,通過低速差速離心去除殘渣碎屑和巨大細胞器;第三,通過高速差速離心獲得線粒體;甚至,第四,可以通過等密度離心獲得純度更高的線粒體。[詳細]
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- 動物細胞/組織活性線粒體分離試劑盒產品說明書主要用途動物細胞/組織活性線粒體分離試劑是一種旨在從動物細胞或組織中分離出完整而純化的活性線粒體細胞器的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。適合于動物軟組織(肝或腦組織)和培養(yǎng)細胞的活性線粒體的制備。其制備物產量高,活性保證,可以被用于線粒體酶活性、細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。產品不含污染性蛋白水解酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定,分離產量和純度堪稱同類產品**。技術背景線粒體細胞器的分離是現代細胞生物學研究的Z常用的手段之一。從任何組織或細胞分離線粒體的技術方法基本上采用:**,通過機械或化學方法破裂細胞;第二,通過低速差速離心去除殘渣碎屑和巨大細胞器;第三,通過高速差速離心獲得線粒體;甚至,第四,可以通過等密度離心獲得純度更高的線粒體。產品內容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升凈化液(ReagentC)毫升強化液(ReagentD)毫升保存液(ReagentE)毫升活性液(ReagentF)微升產品說明書1份保存方式保存凈化液(ReagentC)和活性液(ReagentF)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備HANK平衡鹽緩沖溶液(12028)或PBS緩沖溶液(12033):用于清理細胞胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(12024):用于細胞脫離完全細胞培養(yǎng)液(12052):用于中和胰蛋白酶的細胞培養(yǎng)基15毫升錐形離心管:用于線粒體初步制備物的存放50毫升錐形離心管:用于細胞或組織收集后離心或清洗1.5毫升離心管:用于保存線粒體4℃臺式離心機:用于沉淀細胞4℃超速離心機:用于分離細胞器成分DOUNCE勻漿器:用于裂解細胞實驗步驟一、動物軟組織線粒體分離(組織勻漿法)實驗開始前,將試劑盒里的活性液(ReagentF)凍融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升凈化液(ReagentC)和4毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升錐形離心管里,混勻后,標記為裂解工作液,放進冰槽里備用。然后進行下列操作。1.手術取出動物組織,并秤重以確定組織重量(注意:實驗前**使動物空腹12至24小時)2.(選擇步驟)放進預冷的50毫升錐形離心管3.(選擇步驟)加入適量的(1克組織需要xx毫升)清理液(ReagentA)清洗1次4.即刻用刀片切碎組織5.放進一個預冷的15毫升錐形離心管6.加入預冷的xx毫升裂解工作液7.渦旋震蕩5秒,充分混勻8.即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器,在冰槽里用研磨棒勻化組織(約80下)(注意:參見注意事項8)9.將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管,10.放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1500g11.小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管此步驟去除細胞核和未溶解的細胞12.放進4℃超速離心機離心10分鐘,速度為10000g13.小心抽去上清液,保留沉淀顆粒此步驟獲得線粒體沉淀物14.(選擇步驟)加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE)15.(選擇步驟)放進4℃超速離心機再次離心5分鐘,速度為10000g16.(選擇步驟)小心抽去上清液17.加xx毫升保存液(ReagentE),充分混勻18.即刻移入1.5毫升離心管,放進-70℃冰箱里二、動物軟組織線粒體分離(化學處理法)實驗開始前,將試劑盒里的活性液(ReagentF)凍融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升凈化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升錐形離心管里,混勻后,標記為裂解工作液,放進冰槽里備用。然后進行下列操作。1.手術取出動物組織,并秤重以確定組織重量(注意:實驗前**使動物空腹12至24小時)2.(選擇步驟)放進預冷的50毫升錐形離心管3.(選擇步驟)加入適量的(1克組織需要xx毫升)清理液(ReagentA)清洗1次4.移入一個液氮凍存管5.即刻放進液氮罐過夜6.次日從液氮罐里取出,即刻(Z快速度)碾碎組織(注意:切莫使組織凍融)7.放進一個15毫升錐形離心管8.加入預冷的xx毫升裂解工作液9.渦旋震蕩5秒,充分混勻10.在冰槽里孵育2分鐘,其中每間隔一分鐘渦旋震蕩5秒11.加入預冷的xx微升強化液(ReagentD)12.渦旋震蕩5秒,充分混勻13.在冰槽里孵育5分鐘,其中每間隔一分鐘渦旋震蕩5秒(注意:參見注意事項9)14.加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE),用手混勻15.放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1500g16.小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管此步驟去除細胞核和未溶解的細胞17.放進4℃超速離心機離心10分鐘,速度為10000g18.小心抽去上清液,保留沉淀顆粒此步驟獲得線粒體沉淀物19.(選擇步驟)加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE)20.(選擇步驟)放進4℃超速離心機再次離心5分鐘,速度為10000g21.(選擇步驟)小心抽去上清液22.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混勻23.即刻移入1.5毫升離心管,放進-70℃冰箱里三、動物細胞線粒體分離(細胞勻漿法)實驗開始前,將試劑盒里的活性液(ReagentF)凍融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升凈化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升錐形離心管里,混勻后,標記為裂解工作液,放進冰槽里備用。然后進行下列操作。1.準備5至10瓶75cm2細胞培養(yǎng)瓶的細胞(5X107),直至細胞生長鋪滿整個培養(yǎng)表面2.分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到每個細胞培養(yǎng)瓶,覆蓋培養(yǎng)瓶表面,3.小心抽去清洗液4.重復實驗步驟2至3一次5.加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿整個培養(yǎng)平面6.放進37℃培養(yǎng)箱孵育3分種7.手擊震動培養(yǎng)瓶,使細胞脫落8.分別加入10毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液9.全部移入到一個50毫升錐形離心管10.放進臺式離心機離心10分鐘,速度為200g11.小心抽去上清液12.加入xx毫升預冷的清理液(ReagentA),混勻細胞13.放進臺式離心機離心10分鐘,速度為300g14.小心抽去上清液15.加入預冷的xx毫升裂解工作液16.渦旋震蕩5秒,充分混勻細胞顆粒群17.即刻放進預冷的DOUNCE勻漿器,在冰槽里用研磨棒勻化細胞(約80下)(注意:參見注意事項8)18.將所有細胞勻漿物移入15毫升錐形離心管19.放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1500g20.小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管此步驟去除細胞核和未溶解的細胞21.放進4℃超速離心機離心10分鐘,速度為10000g22.小心抽去上清液,保留沉淀顆粒此步驟獲得線粒體沉淀物23.(選擇步驟)加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE)24.(選擇步驟)放進4℃超速離心機再次離心5分鐘,速度為10000g25.(選擇步驟)小心抽去上清液26.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混勻27.即刻移入1.5毫升離心管,放進-70℃冰箱里四、動物細胞線粒體分離(化學處理法)實驗開始前,將試劑盒里的活性液(ReagentF)凍融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升凈化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升錐形離心管里,混勻后,標記為裂解工作液,放進冰槽里備用。然后進行下列操作。1.準備5至10瓶75cm2細胞培養(yǎng)瓶的細胞(5X107),直至細胞生長鋪滿整個培養(yǎng)表面2.分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽溶液或PBS溶液到每個細胞培養(yǎng)瓶,覆蓋培養(yǎng)瓶表面28.小心抽去清洗液3.重復實驗步驟2至3一次4.加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿整個培養(yǎng)平面5.放進37℃培養(yǎng)箱孵育3分種6.手擊震動培養(yǎng)瓶,使細胞脫落7.分別加入10毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液8.全部移入到一個50毫升錐形離心管9.放進臺式離心機離心10分鐘,速度為200g10.小心抽去上清液11.加入xx毫升預冷的清理液(ReagentA)12.放進臺式離心機離心10分鐘,速度為300g13.小心抽去上清液14.加入預冷的xx毫升裂解工作液15.渦旋震蕩5秒,充分混勻16.在冰槽里孵育2分鐘,其中每間隔一分鐘渦旋震蕩5秒17.加入預冷的xx微升強化液(ReagentD)18.渦旋震蕩5秒,充分混勻19.在冰槽里孵育5分鐘,其中每間隔一分鐘渦旋震蕩5秒(注意:參見注意事項9)20.加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE),用手混勻21.放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1500g22.小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管此步驟去除細胞核和未溶解的細胞23.放進4℃超速離心機離心10分鐘,速度為10000g24.小心抽去上清液,保留沉淀顆粒此步驟獲得線粒體沉淀物25.(選擇步驟)加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE)26.(選擇步驟)放進4℃超速離心機再次離心5分鐘,速度為10000g27.(選擇步驟)小心抽去上清液28.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混勻29.即刻移入1.5毫升離心管,放進-70℃冰箱里注意事項1.本產品為10次(1克動物組織或5X107細胞)或50次(200毫克動物組織或1X107細胞)操作2.實際操作的動物組織重量或細胞量與試劑使用量按比例調整:例如200毫克動物組織:試劑用量是標準用量的五分之一3.所有操作均須在4℃或以下狀態(tài)進行4.操作時,須戴手套5.操作時,須無菌操作,避免污染母液,尤其是裂解液(ReagentB)和保存液(ReagentE)6.建議使用足夠的樣品量7.建議嚴格控制操作時間8.通常勻化次數為80下達到80%的細胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細胞裂解程度:完整細胞呈現發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加勻化次數9.通常孵育5分鐘達到80%的細胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的細胞裂解程度:完整細胞呈現發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加孵育時間和渦旋震蕩次數10.對于難以裂解的細胞,例如HeLa細胞,采用物理勻漿法是優(yōu)先推薦的技術處理11.通常5X107細胞或1克動物組織的線粒體含量為50微克以上線粒體蛋白12.如果需要計量線粒體,稀釋后數分鐘內完成,否則線粒體將分解13.本產品所獲得的線粒體純度和產量Z為理想。通過調整10000g離心速度到3000至8000g,可以提高粗提的線粒體純化程度,但線粒體產量相應減少14.如果需要獲得99%以上純度的線粒體,使用動物細胞/組織高質純化線粒體分離試劑盒-10006.315.線粒體正?;钚詼y定方法是:CITRATESYNTHASE活性、氧化磷酸化、細胞色素吸收峰譜等16.線粒體內外膜完整測定方法是:CYTOCHROMECOXIDASE活性和熒光JC染色17.本公司提供線粒體套餐:ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、線粒體溶解等18.本公司提供系列線粒體分析試劑產品質量標準1.本產品經鑒定性能長期穩(wěn)定2.本產品經鑒定分離的線粒體內外膜完整3.本產品經鑒定分離的線粒體維持正?;钚?.本產品經鑒定不含污染性蛋白酶和核酶[詳細]
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2018-11-18 10:00
產品樣冊
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全血線粒體DNA萃取試劑盒產品說明書(中文版)
- 全血線粒體DNA萃取試劑盒產品說明書(中文版)[詳細]
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2015-06-11 00:00
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細胞線粒體內鈣離子濃度熒光檢測試劑盒產品說明書(中文版)
- 細胞線粒體內鈣離子濃度熒光檢測試劑盒產品說明書(中文版)[詳細]
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2016-03-15 00:00
選購指南
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紅細胞可溶性膜蛋白(純提)制備試劑盒產品說明書(中文版)
- 紅細胞可溶性膜蛋白(純提)制備試劑盒產品說明書(中文版)[詳細]
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2015-01-29 00:00
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植物鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)
- 植物鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)主要用途植物鈣離子濃度熒光定量檢測試劑是一種旨在通過鈣離子特異性熒光探針Fluo-4,與鈣離子結合后,其熒光強度顯著增強,在熒光分光光度儀下觀察相對熒光峰值的變化,來測定植物組織裂解懸液中總鈣離子濃度的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種植物組織,包括種子(seed)、葉片(leaf)、根(root)、胚胎葉(cotyledon)、上胚軸(epicotyl)等裂解萃取樣品中總鈣離子的濃度檢測。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,檢測敏感。技術背景鈣是人體中的一種重要電介質和礦物質,占1150克。其中99%的鈣以氟磷灰石鈣(calciumfluorophosphateapatite)形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細胞內。鈣具有兩種主要形式:一種是非彌散型蛋白結合鈣,其構成約40%至50%的血清中的總鈣含量;另一種為彌散型游離鈣,其進一步分成具有活性的復合鈣(complexedcalcium)和離子鈣(ionizedcalcium)。鈣對神經肌肉興奮性(neuromuscularexcitability)、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運輸、釋放神經傳導介質、信使傳導等方面起著重要作用。鈣的檢測包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法(flamephotometry)、原子吸收分光光度法等技術,但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾,或者受限于儀器的特殊的要求。Fluo-4,一種與鈣離子結合,其熒光強度迅速增強100倍的熒光探針,可以敏感測定微量游離鈣離子水平。在熒光分光光度儀下,激發(fā)波長485nm,散發(fā)波長520nm,來定量測定植物組織細胞的鈣濃度。產品內容清理液(ReagentA)60毫升裂解液(ReagentB)20毫升反應液(ReagentC)6毫升飽和液(ReagentD)2毫升陰性液(ReagentE)2毫升產品說明書1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里;反應液(ReagentC)避免光照;有效保證6月[詳細]
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2018-11-08 10:00
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活體細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒產品說明書(中文版)
- 主要用途活體細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑是一種旨在通過長波長的熒光染料特異性地聚集在線粒體,并呈現紅色,用于分析和觀察線粒體活性與形態(tài)以及雙重染色或重疊染色定位的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種線粒體(動物、人體、昆蟲等)的形態(tài)觀察、活性探測和定位標記。產品嚴格無菌,即到即用,活體檢測,分辨率高,操作簡捷,性能穩(wěn)定,滯留持久。技術背景線粒體是細胞中重要的細胞器,其主要功能是提供細胞內各種物質代謝所需要的能量。線粒體大量存在于代謝旺盛的細胞中,如動物的心肌,肝,腎等器官和組織的細胞中。大量制備線粒體就是從這些器官組織中提取,或從組織培養(yǎng)細胞中提取。在光學顯微鏡下線粒體呈現為顆粒狀、棒狀或彎曲細線。線粒體熒光探針MitoTrackerRED,是一種含有硫醇(Thiol)氯甲基基團的熒光染料,自由通過細胞膜,選擇性地聚集在線粒體。它可以對活細胞進行直接染色,在580nm波長可以清晰看到被染成紅色的線狀或顆粒小體的線粒體。并可以分析線粒體膜電位,以檢測線粒體活性。[詳細]
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2018-11-18 10:00
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活體細胞線粒體損傷/氧化熒光測定試劑盒產品說明書(中文版)
- 主要用途活體細胞線粒體損傷/氧化熒光測定試劑是一種旨在通過特異性染色劑分析線粒體膜心磷脂的變化來定性或定量測定線粒體內含質量以及自由基、氧化物等對細胞線粒體的毒性與損傷作用的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老、代謝和營養(yǎng)學等的研究。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡易,活體檢測,性能穩(wěn)定。技術背景心磷脂(Cardiolipin)是線粒體膜上的主要成分之一。它對細胞氧化特別敏感。線粒體脂類分解,致使心磷脂顯著減少,Z終造成線粒體的嚴重損害。Nonyl-AcrydineOrange(NAO)是一種可自由通過細胞膜的染色劑,特異性地染色線粒體上的心磷脂,并發(fā)出熒光。一旦線粒體膜質量減少或受到損害以及被氧化,其熒光顯著減弱。[詳細]
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2018-11-18 10:00
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人體血小板高純分離試劑盒產品說明書(中文版)
- 人體血小板高純分離試劑盒產品說明書(中文版)[詳細]
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動物細胞高純高爾基體分離試劑盒產品說明書(中文版)
- 動物細胞高純高爾基體分離試劑盒產品說明書(中文版)[詳細]
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2015-03-30 00:00
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動物細胞高純內質網分離試劑盒產品說明書(中文版)
- 動物細胞高純內質網分離試劑盒產品說明書(中文版)[詳細]
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2015-03-30 00:00
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