一、樣品提取 

準(zhǔn)確稱取 5.00 g 勻漿魚肉試樣 ( 精確到 0.01 g) 于 50 mL 具塞塑料離心管中，加入 35 mL 甲醇 / 水溶液 (5:95, v/ v)，離心管置入搖床中，室溫下恒溫振蕩器振蕩速度 110 r/min，避光振蕩 45 min。提取液在 3500 r/min 下離心 10  min，上清液經(jīng)濾紙過濾，濾液加入 10 mL 正己烷，充分混 勻后，以 5000 r/min 離心 10 min，棄取上層溶液，下層溶 液待凈化。 

二、SPE 柱凈化（Copure? HLB，60 mg/3 mL） 

活化：HLB 固相萃取柱使用前依次使用 3 mL 甲醇和 3 mL 水 活化。 

上樣和洗脫：將待凈化液的樣品清液加入已活化好的固相萃 取柱中，以 1 mL/min的流速過柱，棄去濾液。依次用 3 mL 0.02 mol/L 鹽酸溶液、0.1 mol/L 鹽酸溶液、甲醇 / 水溶液 (5:95, v/v) 淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，用吸耳球吹出小柱中殘 留液。用 5 mL 甲醇洗脫固相萃取柱，收集洗脫液。 

重新溶解：洗脫液于 40℃氮吹吹干，用 2 mL 甲醇定容，0.22 μm 微孔濾膜過濾，供 HPLC 上機(jī)測試。 

三、儀器條件 

設(shè)備：Waters Alliance 2695 色譜柱：XB-C18 （4.6 mm×250 mm, 5 μm) 檢測器：Waters 2487 紫外檢測器 檢測波長：380 nm 流動相：A：甲醇 B：0.1 mol/L 甲酸水溶液 洗脫方式：梯度洗脫，見表 1 

表 1 梯度洗脫條件