一、樣品提取 

準(zhǔn)確稱取牛奶 2.00 g（精確到 0.01 g），加入乙酸乙酯 15 mL，高速均質(zhì) 1 min，加入 5 g 無水硫酸鈉，渦旋振蕩 1  min，搖床振蕩 10 min。4000 r/min 轉(zhuǎn)速離心 5 min。將上清 液轉(zhuǎn)移至梨形瓶中，于 45℃旋蒸至近干，用 6 mL 水溶解殘?jiān)?nbsp;2×5 mL 次正己烷除脂，棄去正己烷層，取 3 mL 水層待凈化。 

二、SPE 柱凈化（Copure? HLB，60 mg/3 mL） 

活化：HLB 固相萃取柱使用前依次使用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。 

上樣和洗脫：將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中，以 2 mL/min 的流速過柱，棄去濾液，用 5 mL 水淋洗固相萃取柱， 棄去淋洗液，抽干 5 min。用 5 mL 5%氨化甲醇洗脫固相萃取柱， 收集洗脫液。

重新溶解：洗脫液于 45℃氮吹吹干，用 1 mL 甲醇定容，0.22  μm 微孔濾膜過濾，供 HPLC 上機(jī)測試。 

三、儀器條件 

設(shè)備：Waters Alliance 2695 色譜柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) 檢測器：Waters 2487 紫外檢測器 檢測波長：224 nm  流動(dòng)相：A：水   B：乙腈 洗脫方式：等度洗脫，A: B=83: 17 流速：1.0 mL/min  進(jìn)樣體積：20 μL

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 

表 2 添加水平為 5.0 mg/kg 牛奶中氟苯尼考的添加回收結(jié)果