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組織半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
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本文由 上海哈靈生物科技有限公司 整理匯編
2015-05-19 00:00 237閱讀次數(shù)
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組織半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
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組織半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-19 00:00
期刊論文
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組織半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量
- 主要用途組織半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量檢測試劑是一種旨在通過先酸性預(yù)處理,有機(jī)溶劑萃取后,在堿性條件下,與萘醌磺酸鈉進(jìn)行反應(yīng)后,由次亞硫酸鈉作用產(chǎn)生的紅色顯色產(chǎn)物,在分光光度儀下,即采用比色法來測定樣品中半胱氨酸含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良沙利文反應(yīng)(SullivanReaction)、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織(動物、人體等)裂解萃取液樣品中半胱氨酸水平檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景L-半胱氨酸(L-cysteine;Cys;C)學(xué)名為2-氨基-3-巰基丙酸,是一種疏水性非必需α-氨基酸,分子式是HO2CCH(NH2)CH2SH或C3H7NO2S,分子量121.16,編碼為UGU和UGC。其側(cè)鏈?zhǔn)菐€基(thiol),為非極性,作為親核劑(nucleophile),參與酶類反應(yīng)。氧化后,產(chǎn)生二硫化物和衍生物(disulfidederivative)胱氨酸(cystine),二硫化物成為蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)形式。動物通過胱硫醚β合酶(cystathioninebetasynthase)和胱硫醚γ裂合酶(cystathionegammalyase)由絲氨酸(serine)和蛋氨酸(methionine)轉(zhuǎn)化成同源半胱氨酸(homocysteine)、S-腺苷蛋氨酸(S-adenosylmethionine)、胱硫醚(cystathionine),Z后產(chǎn)生半胱氨酸和α-酮基丁酸(α-ketobutyrate)。而植物和細(xì)菌通過絲氨酸乙?;D(zhuǎn)移酶(transacetylase)和O-乙酰絲氨酸巰基裂合酶(O-acetylserine(thio)lyase),由絲氨酸產(chǎn)生半胱氨酸和乙酸。半胱氨酸,是谷胱苷肽的前體,具有抗氧化作用、抗蛋白水解、使蛋白分子之間交聯(lián)、參與硫化物代謝、與各種金屬原子,例如鐵、鋅、銅等結(jié)合、參與蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄后修飾、中和酒精毒性等功能。應(yīng)用于食品調(diào)味和添加、化妝品防護(hù)、生物標(biāo)記、藥物等。血漿半胱氨酸水平用于評估心血管疾病風(fēng)險;半胱氨酸和同源半胱氨酸的比例可以評價靜脈血栓形成、心肌梗死、腎衰的風(fēng)險。在植物中,半胱氨酸參與各種植物生理活動,例如光質(zhì)流動(photoplasmicstreaming)、電子傳導(dǎo)、光合成磷酸化、細(xì)胞分裂、維持抗壞血酸還原狀態(tài)、抗寒性(frosthardiness)、調(diào)節(jié)作物成熟等。半胱氨酸代謝異常將導(dǎo)致胱氨酸?。╟ystinosis)、胱氨醇尿(cystinuria)、肝損傷、生長遲緩、毛發(fā)去色(hairdepigmentation)、水腫(edema)、嗜睡(lethargy)等。基于半胱氨酸,通過酸性預(yù)處理,有機(jī)溶劑萃取,進(jìn)而在堿性條件下,與萘醌磺酸鈉(1,2-naphthoquinone-4-sodiumsulfonate)進(jìn)行反應(yīng),由次亞硫酸鈉(sodiumhyposulfite)作用,產(chǎn)生顯色產(chǎn)物,呈現(xiàn)紅色,通過分光光度儀(505nm波長)來定量分析半胱氨酸的含量。[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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組織黑色素含量比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 組織黑色素含量比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書[詳細(xì)]
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2024-09-11 18:03
課件
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組織乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
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2015-05-28 00:00
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組織硫代酸反應(yīng)物(TBARS)比色法定量檢測試劑盒 產(chǎn)品說明書(中文版)
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2015-01-04 00:00
期刊論文
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細(xì)胞脂質(zhì)比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
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2015-05-12 00:00
產(chǎn)品樣冊
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組織氧化應(yīng)激活性氧羥自由基比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 組織氧化應(yīng)激活性氧羥自由基比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書[詳細(xì)]
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2015-09-16 00:00
專利
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組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書...
- 組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測試劑盒是一種旨在使用乙醛脫氫酶2敏感性YZ劑,通過檢測反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)還原后峰值的,即采用比色法來測定組織裂解萃取液樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織裂解懸液樣品(動物、人體等)乙醛脫氫酶2的特異活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景乙醛脫氫酶(aldehydedehydrogenase;ALDH;EC1.2.1.3),又稱為乙醛NAD氧化還原酶(aldehydeNAD-oxidoreductase)是一類NAD(P)依賴性酶,催化廣譜的外源性或內(nèi)源性脂肪族和芳香族乙醛類底物氧化,包括乙醇、氨基酸、生物胺(biogenicamine)、維生素、固醇類、脂質(zhì)、藥物和環(huán)境分子等代謝產(chǎn)物。乙醛脫氫酶是乙醇在體內(nèi)分解代謝過程中兩種主要酶之一。乙醛脫氫酶把乙醛中的兩個氫原子脫掉,使乙醛轉(zhuǎn)化為乙酸,生成的乙酸進(jìn)入脂肪酸氧化途徑,Z終被氧化成二氧化碳和水。乙醛脫氫酶主要有兩種同工酶:ALDH1和ALDH2。ALDH1存在于胞液中,ALDH2存在于線粒體中,ALDH2比ALDH1的活性高。乙醛脫氫酶的缺少,使酒精不能被完全分解為水和二氧化碳,而是以乙醛繼續(xù)留在體內(nèi),使人喝酒后產(chǎn)生惡心欲吐、昏迷不適等醉酒癥狀?;趤碜杂谝掖即x產(chǎn)生的乙醛(acetaldehyde),在7-羥基-3-(4-羥苯基)-異黃酮-7-糖苷(Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside;Daidzin)存在與否的情況下,由乙醛脫氫酶2的催化作用,轉(zhuǎn)化為乙酸(aceticacid)產(chǎn)物后,通過測定反應(yīng)體系中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizedreducednicotinamideadeninedinucleotide;NAD)轉(zhuǎn)化為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)的變化(340nm波長),來定量分析乙醛脫氫酶2的特異活性。乙醛脫氫酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升反應(yīng)液(ReagentD)毫升底物液(ReagentE)毫升陰性液(ReagentF)毫升專性液(ReagentG)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存緩沖液(ReagentC)、反應(yīng)液(ReagentD)、底物液(ReagentE)和專性液(ReagentG)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;反應(yīng)液(ReagentD)和底物液(ReagentE)避免光照;有效保證6月[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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組織基質(zhì)金屬蛋白酶2活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途組織基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過含硫多肽底物以及特定YZ劑存在與否的情況下,受到MMP2的水解,釋放出巰基,進(jìn)而使用Ellman試劑,產(chǎn)生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物吸光峰值的變化,即采用比色法來測定組織裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品(動物、人體)、部分或完全純化酶樣品中基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性定量檢測,以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術(shù)背景基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinases;MMPs)是一類結(jié)構(gòu)高度同源的分泌型或膜相關(guān)性鋅內(nèi)肽酶的總稱,因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。其功能在于分解細(xì)胞外基質(zhì)成分。迄今為止發(fā)現(xiàn)的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix)成分,同時參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、組織再吸收(tissueresorption)、疾病發(fā)生,例如關(guān)節(jié)炎、癌細(xì)胞浸入轉(zhuǎn)移等。根據(jù)降解的底物不同可將MMPs分為4大類:(1)膠原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖;(2)明膠酶(Ⅳ型膠原酶):MMP2、MMP9,又稱明膠酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維;(3)基質(zhì)溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金屬蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內(nèi)絕大多數(shù)細(xì)胞并不儲備MMPs,當(dāng)需要MMPs的信號傳遞到細(xì)胞后才臨時合成,合成的MMPs以無活性的酶原(proenzyme)形式分泌到細(xì)胞外,隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活,一種激活的MMPs可激活另一種MMPs,形成瀑布效應(yīng)?;|(zhì)金屬蛋白酶-2,又稱明膠酶A(gelatinase-A)或IV型膠原酶(typeIVcollagenase),其前體分子量為72kDa,激活后分子量為62和56kDa。它在血清或細(xì)胞上清中濃度通常為10至200納克/毫升。它的作用目標(biāo)是天然和變性膠原蛋白(collagens)、纖維連接蛋白(fibronectin)、彈性纖維蛋白(elastin)、層粘連蛋白-5(laminin-5)、前體腫瘤壞死因子-α(pro-TNF-α)和神經(jīng)(蛋白)聚糖(neurocan)?;|(zhì)金屬蛋白酶-2與腫瘤發(fā)展與轉(zhuǎn)移、血管形成、動脈粥樣硬化等疾病有關(guān)。基于含硫多肽(thiopeptide)底物Ac-PLG(2-mercapto-4-methyl-pentanoyl)-LG-OC2H5,在特異性YZ劑OA-Hy存在與否的條件下,受到MMP2的水解,釋放出巰基(sulfhydrylgroup),進(jìn)而與Ellman試劑5,5-二硫基-雙(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid);DTNB]反應(yīng)后,產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitrobenzoicacid;TNB),通過其吸收峰值的變化(412nm波長),來定量測定組織基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性?;|(zhì)金屬蛋白酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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植物游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 植物游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途植物游離氨基酸含量比色法定量檢測試劑是一種旨在通過顯色染料茚三酮與游離氨基酸的氨基發(fā)生反應(yīng),在熱處理下,產(chǎn)生藍(lán)色復(fù)合物,由分光光度儀比色分析,定量檢測樣品中游離氨基酸含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心設(shè)計、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種植物組織,包括種子(seed)、葉片(leaf)、根(root)等裂解懸液樣品的游離氨基酸含量檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,檢測準(zhǔn)確。技術(shù)背景氨基酸(aminoacid或α-aminoacid)是一種含有胺和羧基功能基團(tuán)的分子,為生物體中Z必須的元素。根據(jù)其側(cè)鏈的不同,分成四類(弱酸、弱堿、極性、非極性)和20種各種不同的氨基酸;根據(jù)其光學(xué)異構(gòu)體(opticalisomers),又分成L型和D型。L-氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的主要結(jié)構(gòu)分子。氨基酸是多肽、蛋白質(zhì)和輔酶等的組成單位,具有各種代謝作用和營養(yǎng)價值?;谟坞x氨基酸的游離氨基與茚三酮(ninhydrin)反應(yīng),產(chǎn)生中間產(chǎn)物酮酸(ketoacid)和氨分子,進(jìn)而在熱處理下,進(jìn)行脫羧基過程(僅發(fā)生于游離氨基酸),同時產(chǎn)生藍(lán)色復(fù)合物,在分光光度儀(570nm波長)下,呈現(xiàn)吸光峰值的變化,來定量分析游離氨基酸的總含量。其反應(yīng)系統(tǒng)如下:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升萃取液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升反應(yīng)液(ReagentD)毫升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存萃取液(ReagentB)和標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;反應(yīng)液(ReagentD)具有揮發(fā)性,嚴(yán)格密閉瓶蓋,避免光照;有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于標(biāo)準(zhǔn)液配制和樣品操作的容器15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器干式恒溫儀:用于反應(yīng)孵育DOUNCE勻漿器:用于裂解組織微型臺式離心機(jī):用于樣品操作比色皿:用于比色分析的容器分光光度儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟一、樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好新鮮的植物組織(葉片、谷粒、種子等),并秤重以確定1克組織重量(選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管(選擇步驟)加入xx毫升清理液(ReagentA)清洗1次即刻用刀片切碎組織放進(jìn)一個預(yù)冷的15毫升錐形離心管加入預(yù)冷的xx毫升萃取液(ReagentB)渦旋震蕩5秒,充分混勻即刻放進(jìn)預(yù)冷的DOUNCE勻漿器,在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約80下)將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管,放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為5000g(或7500RPM,例如eppendorf5415)小心移出上清液(注意:不要觸碰沉淀物)到另一個新的預(yù)冷的1.5毫升離心管(選擇步驟)如果上清液含有肉眼可見的殘渣,重復(fù)離心5分鐘一次,速度為5000g(或7500RPM,例如eppendorf5415)移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-30030.1)放進(jìn)-70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用二、標(biāo)準(zhǔn)樣品配制準(zhǔn)備好5個1.5毫升離心管,標(biāo)記為1至5號管分別加入xx微升緩沖液(ReagentC)到1至5號管移取xx微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到1號管,混勻小心移取xx微升1號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到2號管,混勻小心移取xx微升2號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到3號管,混勻小心移取xx微升3號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到4號管,混勻?qū)?至5號管放進(jìn)冰槽里備用;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表管號緩沖液(ReagentC)標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)標(biāo)準(zhǔn)氨基酸濃度1xx微升xx微升xx微摩爾/升2xx微升xx微升1號管xx微摩爾/升3xx微升xx微升2號管xx微摩爾/升4xx微升xx微升3號管xx微摩爾/升5xx微升00微摩爾/升標(biāo)準(zhǔn)曲線測定加入xx微升緩沖液(ReagentC)到1.5毫升離心管加入xx微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)加入xx微升反應(yīng)液(ReagentD)渦旋震蕩15秒放進(jìn)90℃干式恒溫儀孵育5分鐘,避免光照放進(jìn)冰槽里1分鐘轉(zhuǎn)移到比色皿即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(波長570nm):獲得吸光讀數(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至8四次構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為吸光讀數(shù);橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)氨基酸濃度(微摩爾/升)樣品測定加入xx微升緩沖液(ReagentC)到1.5毫升離心管加入500微升待測樣品加入xx微升反應(yīng)液(ReagentD)渦旋震蕩15秒放進(jìn)90℃干式恒溫儀孵育5分鐘,避免光照放進(jìn)冰槽里1分鐘轉(zhuǎn)移到比色皿即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(波長570nm):獲得吸光讀數(shù)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)氨基酸濃度(微摩爾/升)濃度計算根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)氨基酸濃度(微摩爾/升)X稀釋倍數(shù)=(微摩爾/升)注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為25次操作,包括標(biāo)準(zhǔn)樣品避免使用Tris緩沖液、尿素等胺類物質(zhì)處理樣品操作時,須戴手套系統(tǒng)操作時,標(biāo)準(zhǔn)樣品測定只需1次反應(yīng)液(ReagentD)具有揮發(fā)性,嚴(yán)格密閉瓶蓋,避免光照孵育時,避免光照本公司提供系列氨基酸檢測試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感[詳細(xì)]
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2024-09-30 10:02
產(chǎn)品樣冊
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組織谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-28 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-04-08 00:00
期刊論文
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血液總脂肪酶(lipase)活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 血液總脂肪酶(lipase)活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-03-30 00:00
實(shí)驗(yàn)操作
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體液總脂肪酶(lipase)活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 體液總脂肪酶(lipase)活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-03-30 00:00
安裝說明
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細(xì)菌琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書 (中文版)
- 細(xì)菌琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書 (中文版)[詳細(xì)]
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2015-01-05 00:00
期刊論文
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純化線粒體琥珀酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 純化線粒體琥珀酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途純化線粒體琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在使用合成電子受體染料,通過反應(yīng)系統(tǒng)測定染料還原后峰值的降低,即采用比色法測算樣品中單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種純化線粒體裂解懸液樣品琥珀酸脫氫酶的特異性活性檢測。用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測敏感。技術(shù)背景琥珀酸脫氫酶(succinatedehydrogenase;SDH;EC1.3.99.1)是三羧酸循環(huán)(tricarboxylicacidcycle;TCA)或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素,位于線粒體內(nèi)膜,參與細(xì)胞呼吸鏈。琥珀酸脫氫酶由27kd和70kd兩個單體組成。其功能在于催化琥珀酸(succinate)的氧化反應(yīng),產(chǎn)生延胡索酸(furmarate),通過黃素腺嘌呤二核苷酸(FlavinAdenineDinucleotide;FAD)傳遞電子?;阽晁崦摎涿傅姆磻?yīng)原理,使用人工電子受體染料二氯靛酚鈉(2,6-Dichloroindophenolsodium;DCIP),接受來自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸(ReducedflavinAdenineDinucleotide;FADH2)的電子,而被還原,在分光光度儀下,其吸光值(600nm波長)的變化,來測算琥珀酸脫氫酶的活性。其反應(yīng)方式為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)XX毫升裂解液(ReagentB)XX毫升緩沖液(ReagentC)XX毫升反應(yīng)液(ReagentD)XX毫升底物液(ReagentE)XX毫升陰性液(ReagentF)XX微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;反應(yīng)液(ReagentD)含有毒性物質(zhì),避免直接用手接觸;底物液(ReagentE),避免光照;有效保證3月用戶自備15毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器1.5毫升離心管:用于樣品制備和保存的容器4℃(微型)臺式離心機(jī):用于樣品處理DOUNCE勻漿器:用于裂解組織恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水槽:用于反應(yīng)物孵育比色皿:用于比色測定的容器分光光度儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化;底物液(ReagentE)注意避光。然后進(jìn)行下列操作。一、樣品準(zhǔn)備手術(shù)取出動物組織,并秤重以確定200毫克組織重量(選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管(選擇步驟)加入XX毫升清理液(ReagentA)清洗(選擇步驟)抽去清洗液移入到一個液氮凍存管即刻放進(jìn)液氮罐過夜次日從液氮罐里取出,即刻(Z快速度)用研磨棒碾碎組織成粉末狀(注意:切莫使組織凍融)放進(jìn)一個15毫升錐形離心管加入置于冰槽里的XX毫升裂解液(ReagentB)渦旋震蕩5秒,充分混勻即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約20至40下)(注意:參見注意事項(xiàng)8)將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1500g小心移出上清液到另一個新的預(yù)冷的1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心抽去上清液加入XX微升裂解液(ReagentB),混勻顆粒群移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-GMS30030.1)放進(jìn)-70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用二、測定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測樣品,置于冰槽里設(shè)定好分光光度儀(溫度為25℃):波長600nm,間隔60秒,讀數(shù)6次(共5分鐘),并置零緩沖液(ReagentC)在室溫下均衡溫度背景對照測定移取XX微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入XX微升反應(yīng)液(ReagentD)加入XX微升底物液(ReagentE)放進(jìn)25℃培養(yǎng)箱里靜置3分鐘[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)胞丙酮酸激酶總活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
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2024-09-20 13:41
應(yīng)用文章
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2015-08-25 00:00
期刊論文
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2015-01-16 00:00
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2015-01-06 00:00
操作手冊
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