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組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書...
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組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測試劑盒是一種旨在使用乙醛脫氫酶2敏感性YZ劑,通過檢測反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)還原后峰值的,即采用比色法來測定組織裂解萃取液樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織裂解懸液樣品(動物、人體等)乙醛脫氫酶2的特異活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景乙醛脫氫酶(aldehydedehydrogenase;ALDH;EC1.2.1.3),又稱為乙醛NAD氧化還原酶(aldehydeNAD-oxidoreductase)是一類NAD(P)依賴性酶,催化廣譜的外源性或內(nèi)源性脂肪族和芳香族乙醛類底物氧化,包括乙醇、氨基酸、生物胺(biogenicamine)、維生素、固醇類、脂質(zhì)、藥物和環(huán)境分子等代謝產(chǎn)物。乙醛脫氫酶是乙醇在體內(nèi)分解代謝過程中兩種主要酶之一。乙醛脫氫酶把乙醛中的兩個氫原子脫掉,使乙醛轉(zhuǎn)化為乙酸,生成的乙酸進(jìn)入脂肪酸氧化途徑,Z終被氧化成二氧化碳和水。乙醛脫氫酶主要有兩種同工酶:ALDH1和ALDH2。ALDH1存在于胞液中,ALDH2存在于線粒體中,ALDH2比ALDH1的活性高。乙醛脫氫酶的缺少,使酒精不能被完全分解為水和二氧化碳,而是以乙醛繼續(xù)留在體內(nèi),使人喝酒后產(chǎn)生惡心欲吐、昏迷不適等醉酒癥狀?;趤碜杂谝掖即x產(chǎn)生的乙醛(acetaldehyde),在7-羥基-3-(4-羥苯基)-異黃酮-7-糖苷(Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside;Daidzin)存在與否的情況下,由乙醛脫氫酶2的催化作用,轉(zhuǎn)化為乙酸(aceticacid)產(chǎn)物后,通過測定反應(yīng)體系中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizedreducednicotinamideadeninedinucleotide;NAD)轉(zhuǎn)化為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)的變化(340nm波長),來定量分析乙醛脫氫酶2的特異活性。乙醛脫氫酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升反應(yīng)液(ReagentD)毫升底物液(ReagentE)毫升陰性液(ReagentF)毫升專性液(ReagentG)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存緩沖液(ReagentC)、反應(yīng)液(ReagentD)、底物液(ReagentE)和專性液(ReagentG)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;反應(yīng)液(ReagentD)和底物液(ReagentE)避免光照;有效保證6月
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組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書...
- 組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測試劑盒是一種旨在使用乙醛脫氫酶2敏感性YZ劑,通過檢測反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)還原后峰值的,即采用比色法來測定組織裂解萃取液樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織裂解懸液樣品(動物、人體等)乙醛脫氫酶2的特異活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景乙醛脫氫酶(aldehydedehydrogenase;ALDH;EC1.2.1.3),又稱為乙醛NAD氧化還原酶(aldehydeNAD-oxidoreductase)是一類NAD(P)依賴性酶,催化廣譜的外源性或內(nèi)源性脂肪族和芳香族乙醛類底物氧化,包括乙醇、氨基酸、生物胺(biogenicamine)、維生素、固醇類、脂質(zhì)、藥物和環(huán)境分子等代謝產(chǎn)物。乙醛脫氫酶是乙醇在體內(nèi)分解代謝過程中兩種主要酶之一。乙醛脫氫酶把乙醛中的兩個氫原子脫掉,使乙醛轉(zhuǎn)化為乙酸,生成的乙酸進(jìn)入脂肪酸氧化途徑,Z終被氧化成二氧化碳和水。乙醛脫氫酶主要有兩種同工酶:ALDH1和ALDH2。ALDH1存在于胞液中,ALDH2存在于線粒體中,ALDH2比ALDH1的活性高。乙醛脫氫酶的缺少,使酒精不能被完全分解為水和二氧化碳,而是以乙醛繼續(xù)留在體內(nèi),使人喝酒后產(chǎn)生惡心欲吐、昏迷不適等醉酒癥狀?;趤碜杂谝掖即x產(chǎn)生的乙醛(acetaldehyde),在7-羥基-3-(4-羥苯基)-異黃酮-7-糖苷(Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside;Daidzin)存在與否的情況下,由乙醛脫氫酶2的催化作用,轉(zhuǎn)化為乙酸(aceticacid)產(chǎn)物后,通過測定反應(yīng)體系中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizedreducednicotinamideadeninedinucleotide;NAD)轉(zhuǎn)化為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)的變化(340nm波長),來定量分析乙醛脫氫酶2的特異活性。乙醛脫氫酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升反應(yīng)液(ReagentD)毫升底物液(ReagentE)毫升陰性液(ReagentF)毫升專性液(ReagentG)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存緩沖液(ReagentC)、反應(yīng)液(ReagentD)、底物液(ReagentE)和專性液(ReagentG)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;反應(yīng)液(ReagentD)和底物液(ReagentE)避免光照;有效保證6月[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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組織乙醛脫氫酶2活性光度法定量檢測試劑盒
- 主要用途組織乙醛脫氫酶2活性光度法定量檢測試劑盒是一種旨在使用乙醛脫氫酶2敏感性YZ劑,通過檢測反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)還原后峰值的,即采用光度法來測定組織裂解萃取液樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織裂解懸液樣品(動物、人體等)乙醛脫氫酶2的特異活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景乙醛脫氫酶(aldehydedehydrogenase;ALDH;EC1.2.1.3),又稱為乙醛NAD氧化還原酶(aldehydeNAD-oxidoreductase)是一類NAD(P)依賴性酶,催化廣譜的外源性或內(nèi)源性脂肪族和芳香族乙醛類底物氧化,包括乙醇、氨基酸、生物胺(biogenicamine)、維生素、固醇類、脂質(zhì)、藥物和環(huán)境分子等代謝產(chǎn)物。乙醛脫氫酶是乙醇在體內(nèi)分解代謝過程中兩種主要酶之一。乙醛脫氫酶把乙醛中的兩個氫原子脫掉,使乙醛轉(zhuǎn)化為乙酸,生成的乙酸進(jìn)入脂肪酸氧化途徑,Z終被氧化成二氧化碳和水。乙醛脫氫酶主要有兩種同工酶:ALDH1和ALDH2。ALDH1存在于胞液中,ALDH2存在于線粒體中,ALDH2比ALDH1的活性高。乙醛脫氫酶的缺少,使酒精不能被完全分解為水和二氧化碳,而是以乙醛繼續(xù)留在體內(nèi),使人喝酒后產(chǎn)生惡心欲吐、昏迷不適等醉酒癥狀?;趤碜杂谝掖即x產(chǎn)生的乙醛(acetaldehyde),在7-羥基-3-(4-羥苯基)-異黃酮-7-糖苷(Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside;Daidzin)存在與否的情況下,由乙醛脫氫酶2的催化作用,轉(zhuǎn)化為乙酸(aceticacid)產(chǎn)物后,通過測定反應(yīng)體系中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizedreducednicotinamideadeninedinucleotide;NAD)轉(zhuǎn)化為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)的變化(340nm波長),來定量分析乙醛脫氫酶2的特異活性。乙醛脫氫酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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組織乙醛脫氫酶2活性光度法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織乙醛脫氫酶2活性光度法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2014-12-30 00:00
安裝說明
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組織基質(zhì)金屬蛋白酶2活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途組織基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過含硫多肽底物以及特定YZ劑存在與否的情況下,受到MMP2的水解,釋放出巰基,進(jìn)而使用Ellman試劑,產(chǎn)生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物吸光峰值的變化,即采用比色法來測定組織裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品(動物、人體)、部分或完全純化酶樣品中基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性定量檢測,以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術(shù)背景基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinases;MMPs)是一類結(jié)構(gòu)高度同源的分泌型或膜相關(guān)性鋅內(nèi)肽酶的總稱,因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。其功能在于分解細(xì)胞外基質(zhì)成分。迄今為止發(fā)現(xiàn)的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix)成分,同時參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、組織再吸收(tissueresorption)、疾病發(fā)生,例如關(guān)節(jié)炎、癌細(xì)胞浸入轉(zhuǎn)移等。根據(jù)降解的底物不同可將MMPs分為4大類:(1)膠原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖;(2)明膠酶(Ⅳ型膠原酶):MMP2、MMP9,又稱明膠酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維;(3)基質(zhì)溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金屬蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內(nèi)絕大多數(shù)細(xì)胞并不儲備MMPs,當(dāng)需要MMPs的信號傳遞到細(xì)胞后才臨時合成,合成的MMPs以無活性的酶原(proenzyme)形式分泌到細(xì)胞外,隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活,一種激活的MMPs可激活另一種MMPs,形成瀑布效應(yīng)。基質(zhì)金屬蛋白酶-2,又稱明膠酶A(gelatinase-A)或IV型膠原酶(typeIVcollagenase),其前體分子量為72kDa,激活后分子量為62和56kDa。它在血清或細(xì)胞上清中濃度通常為10至200納克/毫升。它的作用目標(biāo)是天然和變性膠原蛋白(collagens)、纖維連接蛋白(fibronectin)、彈性纖維蛋白(elastin)、層粘連蛋白-5(laminin-5)、前體腫瘤壞死因子-α(pro-TNF-α)和神經(jīng)(蛋白)聚糖(neurocan)。基質(zhì)金屬蛋白酶-2與腫瘤發(fā)展與轉(zhuǎn)移、血管形成、動脈粥樣硬化等疾病有關(guān)?;诤蚨嚯模╰hiopeptide)底物Ac-PLG(2-mercapto-4-methyl-pentanoyl)-LG-OC2H5,在特異性YZ劑OA-Hy存在與否的條件下,受到MMP2的水解,釋放出巰基(sulfhydrylgroup),進(jìn)而與Ellman試劑5,5-二硫基-雙(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid);DTNB]反應(yīng)后,產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitrobenzoicacid;TNB),通過其吸收峰值的變化(412nm波長),來定量測定組織基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性。基質(zhì)金屬蛋白酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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乙醛脫氫酶(ALDH)活性檢測試劑盒說明書
- 乙醛脫氫酶(ALDH)活性檢測試劑盒說明書[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶(ISOCITRATEDEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酸(NADP)還原后峰值的變化,即采用比色法來測定細(xì)菌裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種細(xì)菌細(xì)胞裂解懸液樣品異檸檬酸脫氫酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景異檸檬酸脫氫酶(isocitratedehydrogenase;IDH;EC1.1.1.42)是三羧酸循環(huán)(citricacidcycle)或克雷布斯循環(huán)(Krehescycle)中的酶之一,存在于所有生物體內(nèi)。細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶有2種同工酶:同源雙體,40至45Kd分子量;單體,80至100Kd分子量。在細(xì)菌體內(nèi),氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(oxidizedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate;NADP)依賴性異檸檬酸脫氫酶獲得輔酶NADP和輔助因子錳或鎂離子(Mn)的推動,脫去底物異檸檬酸的氫和二氧化碳(氧化性脫羧基作用),轉(zhuǎn)化為α-酮戊二酸(α-ketoglutarate),同時生成還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(reducedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate;NADPH)。一旦磷酸化或在乙酸環(huán)境中,以及有限的葡萄糖條件下,異檸檬酸脫氫酶則失活,從而控制三羧酸循環(huán)和乙醛酸旁路(glyoxylatebypass)之間碳的流動。基于異檸檬酸脫氫酶的NADP依賴性,和作用后所產(chǎn)生的NADPH,通過分光光度儀的峰值變化(340nm波長),來定量分析異檸檬酸脫氫酶的活性。異檸檬酸脫氫酶反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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組織乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-28 00:00
期刊論文
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細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒
- 主要用途細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶(ISOCITRATEDEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酸(NADP)還原后峰值的變化,即采用比色法來測定細(xì)菌裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種細(xì)菌細(xì)胞裂解懸液樣品異檸檬酸脫氫酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景異檸檬酸脫氫酶(isocitratedehydrogenase;IDH;EC1.1.1.42)是三羧酸循環(huán)(citricacidcycle)或克雷布斯循環(huán)(Krehescycle)中的酶之一,存在于所有生物體內(nèi)。細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶有2種同工酶:同源雙體,40至45Kd分子量;單體,80至100Kd分子量。在細(xì)菌體內(nèi),氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(oxidizedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate;NADP)依賴性異檸檬酸脫氫酶獲得輔酶NADP和輔助因子錳或鎂離子(Mn)的推動,脫去底物異檸檬酸的氫和二氧化碳(氧化性脫羧基作用),轉(zhuǎn)化為α-酮戊二酸(α-ketoglutarate),同時生成還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(reducedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate;NADPH)。一旦磷酸化或在乙酸環(huán)境中,以及有限的葡萄糖條件下,異檸檬酸脫氫酶則失活,從而控制三羧酸循環(huán)和乙醛酸旁路(glyoxylatebypass)之間碳的流動?;诋悪幟仕崦摎涿傅腘ADP依賴性,和作用后所產(chǎn)生的NADPH,通過分光光度儀的峰值變化(340nm波長),來定量分析異檸檬酸脫氫酶的活性。異檸檬酸脫氫酶反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)菌琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測試劑盒
- 主要用途細(xì)菌琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在使用合成電子受體染料,通過反應(yīng)系統(tǒng)測定染料還原后峰值的降低,即采用比色法測算樣品中單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種細(xì)菌菌株裂解懸液和膜蛋白樣品琥珀酸脫氫酶的特異性活性檢測。用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、發(fā)酵分析等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測敏感。技術(shù)背景琥珀酸脫氫酶(succinatedehydrogenase;SDH;EC1.3.99.1)是三羧酸循環(huán)(tricarboxylicacidcycle;TCA)或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素,位于線粒體內(nèi)膜,參與細(xì)胞呼吸鏈。細(xì)菌琥珀酸脫氫酶,又稱為SdhCDAB,為膜結(jié)合性蛋白,分為周邊(peripheral)和跨膜(transmembrane)部分,其中周邊親水部分由SdhA和SdhB亞體組成:SdhA亞體含有黃素蛋白(flavoprotein),是琥珀酸的活性部位;SdhB含有鐵硫蛋白(iron-sulfurprotein),進(jìn)行電子傳遞;跨膜疏水部分由SdhC和SdhD亞體組成:SdhC含有亞鐵血紅素-B(Heme-B),SdhD含有泛醌(ubiquinone)結(jié)合部位(Q部位)。其作用在于參與三羧酸循環(huán)(TCAcycle)和呼吸鏈活動。琥珀酸脫氫酶催化琥珀酸(succinate)的氧化反應(yīng),產(chǎn)生延胡索酸(furmarate),通過黃素腺嘌呤二核苷酸(FlavinAdenineDinucleotide;FAD)傳遞電子。基于琥珀酸脫氫酶的反應(yīng)原理,使用人工電子受體染料二氯靛酚鈉(2,6-Dichloroindophenolsodium;DCIP),接受來自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸(ReducedflavinAdenineDinucleotide;FADH2)的電子,而被還原,在分光光度儀下,其吸光值(600nm波長)的變化,來測算琥珀酸脫氫酶的活性。其反應(yīng)方式為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-04-08 00:00
期刊論文
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細(xì)菌琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書 (中文版)
- 細(xì)菌琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書 (中文版)[詳細(xì)]
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2015-01-05 00:00
期刊論文
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純化線粒體琥珀酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 純化線粒體琥珀酸脫氫酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途純化線粒體琥珀酸脫氫酶(SDH)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在使用合成電子受體染料,通過反應(yīng)系統(tǒng)測定染料還原后峰值的降低,即采用比色法測算樣品中單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種純化線粒體裂解懸液樣品琥珀酸脫氫酶的特異性活性檢測。用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測敏感。技術(shù)背景琥珀酸脫氫酶(succinatedehydrogenase;SDH;EC1.3.99.1)是三羧酸循環(huán)(tricarboxylicacidcycle;TCA)或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素,位于線粒體內(nèi)膜,參與細(xì)胞呼吸鏈。琥珀酸脫氫酶由27kd和70kd兩個單體組成。其功能在于催化琥珀酸(succinate)的氧化反應(yīng),產(chǎn)生延胡索酸(furmarate),通過黃素腺嘌呤二核苷酸(FlavinAdenineDinucleotide;FAD)傳遞電子?;阽晁崦摎涿傅姆磻?yīng)原理,使用人工電子受體染料二氯靛酚鈉(2,6-Dichloroindophenolsodium;DCIP),接受來自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸(ReducedflavinAdenineDinucleotide;FADH2)的電子,而被還原,在分光光度儀下,其吸光值(600nm波長)的變化,來測算琥珀酸脫氫酶的活性。其反應(yīng)方式為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)XX毫升裂解液(ReagentB)XX毫升緩沖液(ReagentC)XX毫升反應(yīng)液(ReagentD)XX毫升底物液(ReagentE)XX毫升陰性液(ReagentF)XX微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;反應(yīng)液(ReagentD)含有毒性物質(zhì),避免直接用手接觸;底物液(ReagentE),避免光照;有效保證3月用戶自備15毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器1.5毫升離心管:用于樣品制備和保存的容器4℃(微型)臺式離心機(jī):用于樣品處理DOUNCE勻漿器:用于裂解組織恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水槽:用于反應(yīng)物孵育比色皿:用于比色測定的容器分光光度儀:用于比色分析實驗步驟實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化;底物液(ReagentE)注意避光。然后進(jìn)行下列操作。一、樣品準(zhǔn)備手術(shù)取出動物組織,并秤重以確定200毫克組織重量(選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管(選擇步驟)加入XX毫升清理液(ReagentA)清洗(選擇步驟)抽去清洗液移入到一個液氮凍存管即刻放進(jìn)液氮罐過夜次日從液氮罐里取出,即刻(Z快速度)用研磨棒碾碎組織成粉末狀(注意:切莫使組織凍融)放進(jìn)一個15毫升錐形離心管加入置于冰槽里的XX毫升裂解液(ReagentB)渦旋震蕩5秒,充分混勻即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約20至40下)(注意:參見注意事項8)將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1500g小心移出上清液到另一個新的預(yù)冷的1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心抽去上清液加入XX微升裂解液(ReagentB),混勻顆粒群移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-GMS30030.1)放進(jìn)-70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用二、測定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測樣品,置于冰槽里設(shè)定好分光光度儀(溫度為25℃):波長600nm,間隔60秒,讀數(shù)6次(共5分鐘),并置零緩沖液(ReagentC)在室溫下均衡溫度背景對照測定移取XX微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入XX微升反應(yīng)液(ReagentD)加入XX微升底物液(ReagentE)放進(jìn)25℃培養(yǎng)箱里靜置3分鐘[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過含硫多肽底物以及特定YZ劑存在與否的情況下,受到MMP2的水解,釋放出巰基,進(jìn)而使用Ellman試劑,產(chǎn)生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物吸光峰值的變化,即采用比色法來測定細(xì)胞裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動物、人體)、部分或完全純化酶樣品中基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性定量檢測,以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術(shù)背景基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinases;MMPs)是一類結(jié)構(gòu)高度同源的分泌型或膜相關(guān)性鋅內(nèi)肽酶的總稱,因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。其功能在于分解細(xì)胞外基質(zhì)成分。迄今為止發(fā)現(xiàn)的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix)成分,同時參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、組織再吸收(tissueresorption)、疾病發(fā)生,例如關(guān)節(jié)炎、癌細(xì)胞浸入轉(zhuǎn)移等。根據(jù)降解的底物不同可將MMPs分為4大類:(1)膠原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖;(2)明膠酶(Ⅳ型膠原酶):MMP2、MMP9,又稱明膠酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維;(3)基質(zhì)溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金屬蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內(nèi)絕大多數(shù)細(xì)胞并不儲備MMPs,當(dāng)需要MMPs的信號傳遞到細(xì)胞后才臨時合成,合成的MMPs以無活性的酶原(proenzyme)形式分泌到細(xì)胞外,隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活,一種激活的MMPs可激活另一種MMPs,形成瀑布效應(yīng)。基質(zhì)金屬蛋白酶-2,又稱明膠酶A(gelatinase-A)或IV型膠原酶(typeIVcollagenase),其前體分子量為72kDa,激活后分子量為62和56kDa。它在血清或細(xì)胞上清中濃度通常為10至200納克/毫升。它的作用目標(biāo)是天然和變性膠原蛋白(collagens)、纖維連接蛋白(fibronectin)、彈性纖維蛋白(elastin)、層粘連蛋白-5(laminin-5)、前體腫瘤壞死因子-α(pro-TNF-α)和神經(jīng)(蛋白)聚糖(neurocan)?;|(zhì)金屬蛋白酶-2與腫瘤發(fā)展與轉(zhuǎn)移、血管形成、動脈粥樣硬化等疾病有關(guān)?;诤蚨嚯模╰hiopeptide)底物Ac-PLG(2-mercapto-4-methyl-pentanoyl)-LG-OC2H5,在特異性YZ劑OA-Hy存在與否的條件下,受到MMP2的水解,釋放出巰基(sulfhydrylgroup),進(jìn)而與Ellman試劑5,5-二硫基-雙(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid);DTNB]反應(yīng)后,產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitrobenzoicacid;TNB),通過其吸收峰值的變化(412nm波長),來定量測定細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性?;|(zhì)金屬蛋白酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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組織酪氨酸酶(tyrosinase)活性比色法定量檢測試劑盒
- 主要用途組織酪氨酸酶(tyrosinase)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過酪氨酸酶反應(yīng)系統(tǒng)中底物酪氨酸氧化后,產(chǎn)生多巴色素,呈現(xiàn)吸光峰值的變化,即采用比色法來測定組織裂解懸液樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種人體和動物組織,尤其是皮膚、眼睛和黑色素瘤組織裂解懸液樣品中酪氨酸酶的活性檢測,以及YZ劑篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景酪氨酸酶(tyrosinase;EC1.14.18.1)是一種單酚單加氧酶(monophenolmonooxygenase),又稱為單酚酶(monophenolase)或單酚二羥基苯丙氨酸:O2氧化還原酶(monophenoldihydroxyphenylalanin:O2oxidoreductase),具有雙功能的含銅糖蛋白,廣泛存在于植物、酵母和動物組織中,其蛋白結(jié)構(gòu)、大小、糖基化方式、激活特征等都不同。人體酪氨酸酶是一個跨膜蛋白,而催化結(jié)構(gòu)域在黑色素細(xì)胞(melanocyte)或色素細(xì)胞的黑色素器(melanosome)里。酪氨酸酶通過催化L-酪氨酸(L-tyrosine)等的o-羥基化(o-hydroxylation)反應(yīng)變成L-多巴(L-dopamine),進(jìn)而氧化產(chǎn)生黑色素底物多巴醌(dopaquinone),從而由多巴色素(dopachrome)轉(zhuǎn)化為黑色素(melanin)中的真黑素(eumelanin),以及其它色素,包括毛發(fā)和眼睛色素。紫外線可以激活酪氨酸酶活性,嚴(yán)重時,會引起色素沉著(hyperpigmentation)。酪氨酸酶基因突變將導(dǎo)致I型眼皮膚白化病(oculocutaneousalbinism)。酪氨酸酶YZ劑成為增白化妝品的重要元素?;诘孜锢野彼?,在酪氨酸酶的催化下,產(chǎn)生多巴色素,通過其吸光值的變化(475nm波長),來定量測定酪氨酸酶的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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乳酸脫氫酶(LDH)總活性終點比色法定量檢測試劑盒
- 主要用途乳酸脫氫酶(LDH)總活性終點比色法定量檢測試劑是一種旨在通過乳酸脫氫酶反應(yīng)系統(tǒng)中反應(yīng)完成后還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用終點比色法來測定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細(xì)胞和組織裂解萃取樣品(動物、人體、植物、昆蟲等)乳酸脫氫酶(LDH)的總活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景乳酸脫氫酶是一種氧化還原酶,催化丙酮酸和乳酸的互相轉(zhuǎn)化反應(yīng)。乳酸脫氫酶由4個亞單位構(gòu)成,有兩種類型:肌肉型和心肌型。根據(jù)其亞單位成分,分為5種同功酶。乳酸脫氫酶的活性檢測用來評價細(xì)胞或組織的損害狀況?;诒幔╬yruvate)底物在乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase;LDH)的催化下,轉(zhuǎn)化成乳酸(lactate),同時還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide;NAD),完全反應(yīng)后,在分光光度儀下產(chǎn)生吸收峰值的變化(340nm波長)由此定量測定乳酸脫氫酶的活性。乳酸脫氫酶反應(yīng)系統(tǒng)為:lactatedehydrogenasepyruvate+NADH→lactate+NAD+(高吸收峰)(低吸收峰)[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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乳酸脫氫酶(LDH)總活性終點比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 乳酸脫氫酶(LDH)總活性終點比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-22 00:00
安裝說明
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組織沉默調(diào)節(jié)蛋白1活性比色法定量檢測試劑盒
- 主要用途組織沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過比色探針對硝基苯胺標(biāo)記人工合成的乙?;痯53多肽底物,經(jīng)過SIRT1脫乙?;?,被位點特異性氨基肽酶水解,釋放黃色對硝基苯胺,即采用比色法來測定組織裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品(動物、人體)、核蛋白樣品、部分或完全純化酶樣品中SIRT1的活性定量檢測,以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景人體組蛋白脫乙?;福╤istonedeacetylase;HDAC)家屬分成三類共20多個蛋白:種類I(classI)與酵母Rpd3蛋白同源,包括HDAC1、2、3、8,存在于細(xì)胞核中;種類II(classII)與酵母Hda1蛋白同源,包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR,存在于細(xì)胞核和細(xì)胞漿里;上述兩大種類的蛋白分子催化結(jié)構(gòu)域含有鋅,且曲古菌素A(trichostatinA;TSA)敏感。種類III(classIII)為NAD+輔助因子必需,又稱為sirtuins,與酵母Sir2(SilentInformationRegulator2)同源,包括SIRT1至7等,為曲古菌素A(trichostatinA;TSA)不敏感型賴氨酸脫乙酰基酶(lysyl-deacetylase)。催化賴氨酸脫乙?;磻?yīng),以及由NAD+和乙酰(acetyl)基團(tuán)轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的煙酰胺(nicotinamide)和O-乙酰ADP核糖(O-acetyl-ADP-ribose)。SIRT1位于細(xì)胞核內(nèi),與酵母Sir2同源性Z高。其功能在于調(diào)節(jié)p53活性和YZ細(xì)胞凋亡?;谌斯ず铣傻囊阴;痯53(379至382氨基酸位點)多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys(Ac)具有抗氨基肽酶切離的功能,首先使用比色染料對硝基苯胺(p-Nitroaniline;p-NA)來標(biāo)記乙?;痯53多肽底物,其次進(jìn)行脫乙?;?,Z后底物進(jìn)一步在氨基肽酶的催化酶解,釋放出具有強(qiáng)烈吸光值的黃色對硝基苯胺(波長405nm),由此來定量測定沉默調(diào)節(jié)蛋白1的活性。用戶自備磷酸鹽緩沖溶液(PBS):用于清洗組織樣品15毫升錐形離心管:用于樣品處理的容器1.5毫升離心管:用于樣品操作和保存的容器(微型)臺式離心機(jī):用于組織細(xì)胞預(yù)處理培養(yǎng)箱:用于反應(yīng)物孵育96孔板或100微升1厘米光徑比色皿:用于反應(yīng)和比色的容器酶標(biāo)儀或分光光度儀:用于比色分析注意事項1.本產(chǎn)品為20次操作,包括背景對照2.操作時,須戴手套3.系統(tǒng)操作過程中,背景測定只需1次4.樣品須澄清,至關(guān)重要5.樣品處理時,避免使用蛋白酶YZ劑、PMSF、烷基胺(alkylamine)等6.孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行比色測定7.濾波器可以使用波長400nm替代405nm8.測定值由低到高變化;酶動法測定可以持續(xù)60分鐘9.測定值吸光讀數(shù)越高,表明酶活性越高10.比色測定后,比色皿須清洗徹底11.待測樣本為核蛋白樣品,其蛋白濃度為50微克/20微升;待測樣本為組織裂解懸液,其蛋白濃度為200微克/20微升(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒30030.1)12.如果待測樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度13.沉默調(diào)節(jié)蛋白1單位活性定義為:在30℃,pH8.0條件下,每分鐘內(nèi)能夠釋放1微摩爾對硝基苯酚所需的酶量作為一個活性單位14.本公司提供系列組蛋白脫乙?;笝z測試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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Ca-ATP酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- Ca-ATP酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途ATP酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上,是生物膜上的一種蛋白酶,機(jī)體在缺氧及等狀態(tài)下,ATP酶受到損傷,活力下降。ATP酶活力的大小是各種細(xì)胞能量代謝及功能有無損傷的重要指標(biāo)。本測試盒可測鈉鉀ATP酶、鈣鎂ATP酶的活性。樣品為各種組織及紅細(xì)胞等,本法的Zda特點是樣品前處理不需要高速離心機(jī),方法簡便、快速。產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)6毫升反應(yīng)液(ReagentB)6毫升底物液(ReagentC)6毫升陰性液(ReagentD)6毫升標(biāo)準(zhǔn)品(reagentE)6微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存反應(yīng)液(ReagentB)和底物液(ReagentC)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;底物液(ReagentC)避免光照,有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于反應(yīng)液配制的容器微型臺式離心機(jī):用于樣品制備比色皿或酶標(biāo)板:用于比色的容器分光光度儀:用于比色分析酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析實驗步驟實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的反應(yīng)液(ReagentB)和底物液(ReagentC)置入冰槽里融化。底物液(ReagentC)避免光照。然后進(jìn)行下列操作。樣品準(zhǔn)備選擇一:血漿樣品1.準(zhǔn)備好ACD抗凝管(注意:避免使用肝素或EDTA抗凝管)2.抽取2毫升血液,置于抗凝管里3.放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為5000g4.小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分(注意:避免觸碰白色液體層)5.即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存6.(選擇步驟)移取50微升進(jìn)行蛋白定量測定選擇二:血清樣品1.準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲存管2.抽取2毫升血液,置于儲存管里3.室溫下,靜置30分鐘,直至血液凝結(jié)4.放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心15分鐘,速度為5000g5.小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分(注意:避免觸碰白色液體層)6.即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存7.(選擇步驟)移取50微升進(jìn)行蛋白定量測定選擇三:組織樣本準(zhǔn)確稱取組織重量,按照重量(g):體積(ml)=1:9的比例,加入9倍的是PBS或者生理鹽水,冰水浴條件下機(jī)械勻漿,2500轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,去上清液待測。二、測定準(zhǔn)備1.準(zhǔn)備好上述待測樣品,置于冰槽里2.設(shè)定好分光光度儀(溫度為37℃):波長440nm三、樣本測定1.在96孔酶標(biāo)板上做好相應(yīng)標(biāo)記:背景對照,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔2.分別移取50微升緩沖液(ReagentA)到相應(yīng)孔中3.設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)品孔(加入50微升標(biāo)準(zhǔn)品),樣本孔(加入50微升樣本)陰性液孔(加入50微升陰性液(ReagentD)4.分別加入50微升反應(yīng)液(ReagentB)5.輕輕搖動96孔酶標(biāo)板6.在37℃溫度下孵育2分鐘7.放進(jìn)酶標(biāo)儀,置零8.取出酶標(biāo)板,分別加入50微升底物液(ReagentC)9.輕輕搖動酶標(biāo)板10.即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測,包括(0分鐘初始讀數(shù)和5分鐘讀數(shù))四,樣本計算樣本活性=樣本OD值/標(biāo)準(zhǔn)OD值*標(biāo)品濃度[詳細(xì)]
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2024-09-29 05:34
產(chǎn)品樣冊
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組織黑色素含量比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 組織黑色素含量比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書[詳細(xì)]
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2024-09-11 18:03
課件
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細(xì)菌蛋白酶(PROTEASE)活性比色法定量檢測試劑盒說明書
- 細(xì)菌蛋白酶(PROTEASE)活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途細(xì)菌蛋白酶(PROTEASE)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過底物偶氮酪蛋白受到蛋白酶水解,產(chǎn)生橘紅色產(chǎn)物的吸光峰值的變化,即采用比色法來測定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實驗證明的。其適用于各種細(xì)菌細(xì)胞裂解液以及培養(yǎng)上清樣品蛋白酶的總活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景蛋白酶(protease)又稱為肽酶(peptidase)或蛋白質(zhì)酶(proteinase),是一類蛋白水解的酶,屬于水解酶(hydrolase)家屬中一員,存在于所有生物體內(nèi)。通過肽鍵的水解,進(jìn)行蛋白質(zhì)的分解代謝,參與體內(nèi)血液凝結(jié)、補(bǔ)體系統(tǒng)、凋亡、細(xì)胞生長和分化等一系列生理活動。蛋白酶基本分成6類,包括絲氨酸(serine)、蘇氨酸(threonine)、半胱氨酸(cysteine)、谷氨酸(glutamate)、天冬氨酸(aspartate)、金屬(metalloprotease)蛋白酶等;也可以分成酸性、中性和堿性蛋白酶等;還可以分成內(nèi)切肽酶,例如胰蛋白酶(trypsin),和外切肽酶,例如羧基肽酶A(carboxypeptidase)。細(xì)菌蛋白酶與碳和氮循環(huán)有關(guān);作為外毒素(exotoxin),也是細(xì)菌致病的毒力(virulence)因子;同時細(xì)菌蛋白酶可以應(yīng)用于食品、制藥、皮革、診斷、水處理、銀回收和潔凈劑工業(yè)等。同時據(jù)此用以識別革藍(lán)氏陰性細(xì)菌,例如枯草芽孢桿菌(Bac.Subtilis)等。基于底物偶氮酪蛋白(azocasein或sulfanilamideazocasein),在細(xì)菌蛋白酶的催化水解下,產(chǎn)生橘紅色產(chǎn)物,通過其吸收峰值的變化(440nm波長),來定量分析蛋白酶的總活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容裂解液(ReagentA)毫升反應(yīng)液(ReagentB)毫升終止液(ReagentC)毫升中和液(ReagentD)毫升陰性液(ReagentE)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存反應(yīng)液(ReagentB)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里;終止液(ReagentC)和中和液(ReagentD)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器微型臺式離心機(jī):用于樣品制備恒溫水槽:用于孵育反應(yīng)比色皿:用于比色的容器分光光度儀:用于比色分析實驗步驟樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好500微升待測細(xì)菌(OD600=0.4至0.8,即1至2X107細(xì)胞/毫升)轉(zhuǎn)移到到1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心5分鐘,速度為1000g(或3500RPM,例如EPPENDORF5415)小心抽去上清液加入xx微升裂解液(ReagentA),充分混勻QL渦旋震蕩15秒置于冰槽里15分鐘放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心15分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf5415)小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-30030.1)即刻放進(jìn)-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作測定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測樣品(例如細(xì)菌裂解萃取液或培養(yǎng)上清等),置于冰槽里設(shè)定好分光光度儀(溫度為37℃):波長440nm,并置零實驗開始前,將反應(yīng)液(ReagentB)置于65℃恒溫水槽孵育20分鐘后使用三、背景測定移取xx微升反應(yīng)液(ReagentB)到新的1.5毫升離心管加入xx微升陰性液(ReagentE)上下傾倒數(shù)次,混勻在37℃溫度下孵育30分鐘加入xx微升終止液(ReagentC)渦旋震蕩5秒在冰槽里孵育15分鐘即刻放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心15分鐘,速度為3000g小心移取500微升上清液到新的1.5毫升離心管加入xx微升中和液(ReagentD),混勻轉(zhuǎn)移到比色皿里即刻放進(jìn)分光光度儀檢測,此為背景空對照樣品活性測定移取xx微升反應(yīng)液(ReagentB)到新的1.5毫升離心管加入100微升待測樣品(蛋白總量100微克)(注意:樣品需澄清)上下傾倒數(shù)次,混勻在37℃溫度下孵育30分鐘加入xx微升終止液(ReagentC)渦旋震蕩5秒在冰槽里孵育15分鐘即刻放進(jìn)4℃微型臺式離心機(jī)離心15分鐘,速度為3000g小心移取500微升上清液到新的1.5毫升離心管(注意:沉淀物為橘紅色)加入xx微升中和液(ReagentD),混勻轉(zhuǎn)移到比色皿里即刻放進(jìn)分光光度儀檢測,此為樣品讀數(shù)計算樣品活性注意事項本產(chǎn)品為20次操作操作時,須戴手套終止液(ReagentC)和中和液(ReagentD)具有腐蝕性,注意操作安全系統(tǒng)檢測時,背景測定只需一次樣品須澄清,至關(guān)重要比色測定后,比色皿須清洗徹底建議待測樣本的蛋白濃度為100微克/100微升(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒30030.1)如果待測樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度蛋白酶活性單位濃度定義:在37℃下,pH7.5的情況下,每單位酶在單位時間內(nèi)(每分鐘)產(chǎn)生0.01吸光值的升高變化本公司提供系列細(xì)菌生理生化檢測試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
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