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PCR純化試劑盒/DNA純化試劑盒
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本文由 上海哈靈生物科技有限公司 整理匯編
2015-09-11 00:00 361閱讀次數(shù)
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PCR純化試劑盒/DNA純化試劑盒
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PCR純化試劑盒/DNA純化試劑盒
- PCR純化試劑盒/DNA純化試劑盒[詳細(xì)]
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2015-09-11 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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PCR 純化試劑盒/DNA 純化試劑盒
- PCR 純化試劑盒/DNA 純化試劑盒[詳細(xì)]
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2014-12-11 00:00
期刊論文
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PCR產(chǎn)物純化試劑盒
- 資料名稱:PCR產(chǎn)物純化試劑盒
適用產(chǎn)品:本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù),能夠快速提取來自酶切、PCR等反應(yīng)溶液中的DNA片段。
正文語(yǔ)言:中文
文件編號(hào):BP034-1
文件版本:1.0
文件格式:PDF
文件大?。?.9MB
內(nèi)容簡(jiǎn)介:本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù),能夠快速提取來自酶切、PCR等反應(yīng)溶液中的DNA片段。采用獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng),可Zda限度的去除雜蛋白、其他有機(jī)物、無機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì),殘留的少量雜質(zhì)可使用漂洗液進(jìn)行去除,Z后使用洗脫液進(jìn)行洗脫收集,獲得高純度的DNA片段。使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、連接和轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)。[詳細(xì)]
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2024-09-11 17:37
其它
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糞便DNA高質(zhì)純化試劑盒
- 糞便DNA高質(zhì)純化試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途糞便DNA高質(zhì)純化試劑是一種旨在經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)分離法以后,由糞便(人體、動(dòng)物等)中分離獲得的DNA,進(jìn)行二度親和純化,Zda限度地去除復(fù)雜又難以去除的蛋白、金屬成分、雜質(zhì)等非核酸類物質(zhì)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其應(yīng)用于即時(shí)PCR、RLPF分析、測(cè)序、雜交、遺傳鑒定、突變分析、性別鑒定、司法鑒定等。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,操作簡(jiǎn)單,純度出色,重復(fù)性好,堪稱國(guó)際上同類產(chǎn)品**。技術(shù)背景糞便中含有許多污染成分,降解DNA和YZPCR反應(yīng)。針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)處理無法有效地去除頑固干擾因子的情況下,運(yùn)用特殊親和技術(shù),達(dá)到高度純化的效果。產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)2毫升親和液(ReagentJ)2毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于DNA純化操作的容器微型臺(tái)式離心機(jī)(例如EPPENDORF5415):用于沉淀反應(yīng)物恒溫水槽:用于孵育反應(yīng)物實(shí)驗(yàn)步驟1.準(zhǔn)備好從1克糞便樣品分離的DNA產(chǎn)物(100微克DNA總量)2.移入到1.5毫升離心管3.加入適量的緩沖液(ReagentA)到總?cè)萘繛?00微升4.加入100微升親和液(ReagentB)(注意:使用前,先搖勻沉淀的親和液(ReagentB))5.用手充分混勻6.放進(jìn)56℃恒溫水槽孵育30分鐘,期間用手混勻一次7.放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如EPPENDORF5415)8.小心移出180微升上清液到新的1.5毫升離心管9.移出適量DNA溶液進(jìn)行后續(xù)PCR反應(yīng)或保存在-20℃冰箱里注意事項(xiàng)1.本產(chǎn)品為20次(1克糞便樣品的DNA產(chǎn)物)操作或50次(200毫克糞便樣品的DNA產(chǎn)物)操作2.操作時(shí),須戴手套3.根據(jù)用戶樣品量大小,相應(yīng)調(diào)整試劑用量4.親和液(ReagentB)使用前,須搖勻5.建議使用糞便DNA分離試劑盒(HL20011.1)作為標(biāo)準(zhǔn)分離法操作6.本公司提供系列糞便核酸純化試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純度優(yōu)異[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)菌基因組DNA純化試劑盒
- 本公司新推出的全新細(xì)菌基因組純化試劑盒,操作簡(jiǎn)便,純化量大,可純化革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌的基因組DNA。細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒使用說明本試劑盒可用于革蘭氏陰性和陽(yáng)性菌的基因組DNA提取,由細(xì)菌重懸液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液組成??蓮?-5ml菌液中提取基因組DNA。整個(gè)提取過程不超過45分鐘。提取過程包括:1菌液離心,重懸。2裂解菌體,釋放基因組DNA。3鹽析沉淀蛋白,分離DNA。4異丙醇沉淀脫鹽并濃縮。570%乙醇清洗,晾干并用DNA溶解液溶解。本試劑盒采用復(fù)合裂解液,其中含有YZDNA酶的成分,在加熱(65°C)狀態(tài)下,可保證完整的細(xì)菌基因組DNA的充分裂解釋放,本試劑盒即可提取異丙醇沉淀時(shí),罕見渾濁的蛋白質(zhì)雜質(zhì)的共沉淀。提取的基因組可用于PCR擴(kuò)增、內(nèi)切酶消化以及膜雜交等。一、試劑盒組成(本試劑盒提供的組份,至少可提取100份1-5ml菌液基因組DNA的純化,每種組份均有足夠的富余量)1.復(fù)合裂解液:30ml1瓶。2.蛋白沉淀液:300ml1瓶。3.DNA溶解液:20ml1瓶。4.操作說明書一份。二、本試劑盒未提供,須用戶自備的試劑為:異丙醇,70%乙醇(國(guó)產(chǎn)分析純)。三、提取操作:1.菌液離心:取革蘭氏陰性菌菌液1-2ml;或者革蘭氏陽(yáng)性菌菌液2-5ml,1000rpm離心1分鐘。2.加入細(xì)菌重懸液100ul,震蕩使菌體重懸。3.將復(fù)合裂解液置65°C水浴加熱,使結(jié)晶成分溶解,每個(gè)細(xì)菌重懸液中分別加入300ul的復(fù)合裂解液。4.混璇器震蕩混勻10秒,置65°C水浴中反應(yīng)10分鐘(革蘭氏陰性菌),20分鐘(革蘭氏陽(yáng)性菌)。5.各管中加入300ul蛋白沉淀液。上下顛倒5-6次使兩者混勻。6.13000-16000×g,離心3-5分鐘。7.將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中(注意:由于有些細(xì)菌含有多糖或者脂蛋白成分,離心后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞成分上浮的情況,此時(shí)取漂浮層下的均一透明液體),加入等體積異丙醇,此時(shí)可見透明的絮狀物,混勻后離心,同步驟5,吸去上清。8.離心管中加入200ul,70%的乙醇溶液,來回倒置,清洗管壁,離心同上。9.移去70%乙醇,倒置離心管于干凈的濾紙上,自然干燥10-15分鐘,加入DNA溶解液100ul。10.快速漩渦震蕩1-2秒,使DNA溶解液沖刷到所有沉淀的DNA。11.將純化的全血基因組置65C水浴1小時(shí),或4C過夜使DNA充分溶解(要求不嚴(yán)格的PCR試驗(yàn)可縮短時(shí)間或省去該步),輕輕彈動(dòng)管壁有助于溶解基因組DNA可直接進(jìn)行PCR等下一步操作。四、注意事項(xiàng):1.用戶可選擇使用RNaseA,使用方法為:在第3步完成后1.5ulRNaseA,混勻后,37C孵育15分鐘,冷卻至室溫。(RNaseA的配法:將RNaseA溶于TEbuffer中,濃度為4mg/ml,煮沸10分鐘,以去除DNase,分裝后-20C保存;也可購(gòu)買配好的試劑使用。)2.革蘭氏陽(yáng)性菌由于細(xì)胞壁的存在,純化的量較陰性菌要少一倍以上。3.提取得DNA樣本在70%乙醇中,存于-80C,可長(zhǎng)期保存。五、儲(chǔ)存條件:本試劑盒在室溫條件下可保存一年。[詳細(xì)]
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2024-09-29 11:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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PCR產(chǎn)物純化試劑盒說明書
- PCR產(chǎn)物純化試劑盒說明書[詳細(xì)]
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2016-05-25 00:00
實(shí)驗(yàn)操作
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糞便DNA高質(zhì)純化試劑盒產(chǎn)品說明書
- 糞便DNA高質(zhì)純化試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途糞便DNA高質(zhì)純化試劑是一種旨在經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)分離法以后,由糞便(人體、動(dòng)物等)中分離獲得的DNA,進(jìn)行二度親和純化,Zda限度地去除復(fù)雜又難以去除的蛋白、金屬成分、雜質(zhì)等非核酸類物質(zhì)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其應(yīng)用于即時(shí)PCR、RLPF分析、測(cè)序、雜交、遺傳鑒定、突變分析、性別鑒定、司法鑒定等。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,操作簡(jiǎn)單,純度出色,重復(fù)性好,堪稱國(guó)際上同類產(chǎn)品**。技術(shù)背景糞便中含有許多污染成分,降解DNA和YZPCR反應(yīng)。針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)處理無法有效地去除頑固干擾因子的情況下,運(yùn)用特殊親和技術(shù),達(dá)到高度純化的效果。產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)2毫升親和液(ReagentJ)2毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于DNA純化操作的容器微型臺(tái)式離心機(jī)(例如EPPENDORF5415):用于沉淀反應(yīng)物恒溫水槽:用于孵育反應(yīng)物實(shí)驗(yàn)步驟1.準(zhǔn)備好從1克糞便樣品分離的DNA產(chǎn)物(100微克DNA總量)2.移入到1.5毫升離心管3.加入適量的緩沖液(ReagentA)到總?cè)萘繛?00微升4.加入100微升親和液(ReagentB)(注意:使用前,先搖勻沉淀的親和液(ReagentB))5.用手充分混勻6.放進(jìn)56℃恒溫水槽孵育30分鐘,期間用手混勻一次7.放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如EPPENDORF5415)8.小心移出180微升上清液到新的1.5毫升離心管9.移出適量DNA溶液進(jìn)行后續(xù)PCR反應(yīng)或保存在-20℃冰箱里注意事項(xiàng)1.本產(chǎn)品為20次(1克糞便樣品的DNA產(chǎn)物)操作或50次(200毫克糞便樣品的DNA產(chǎn)物)操作2.操作時(shí),須戴手套3.根據(jù)用戶樣品量大小,相應(yīng)調(diào)整試劑用量4.親和液(ReagentB)使用前,須搖勻5.建議使用糞便DNA分離試劑盒(HL20011.1)作為標(biāo)準(zhǔn)分離法操作6.本公司提供系列糞便核酸純化試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純度優(yōu)異[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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質(zhì)粒小提純化試劑盒
- 資料名稱:質(zhì)粒小提純化試劑盒
適用產(chǎn)品:本試劑盒適用于小量提取質(zhì)粒DNA。
正文語(yǔ)言:中文
文件編號(hào):BP020-1
文件版本:1.0
文件格式:PDF
文件大?。?.9MB
內(nèi)容簡(jiǎn)介:CommaX?質(zhì)粒小提純化試劑盒采用堿裂解法和新型硅膠膜吸附技術(shù), 能夠快速提取和純化質(zhì)粒DNA。菌體經(jīng)堿裂解后上樣到離心柱中。在高鹽和低pH條件下,質(zhì)粒DNA特異性地吸附到硅膠膜上;而在低鹽或水溶液狀態(tài)下,DNA解吸附而被洗脫下來,從而得到純化。用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測(cè)序、連接、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞等實(shí)驗(yàn)。[詳細(xì)]
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2018-05-18 15:21
其它
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質(zhì)粒中提純化試劑盒
- 資料名稱:質(zhì)粒中提純化試劑盒
適用產(chǎn)品:適用于中量提取質(zhì)粒DNA。
正文語(yǔ)言:中文
文件編號(hào):BP026-1
文件版本:1.0
文件格式:PDF
文件大?。?.9MB
內(nèi)容簡(jiǎn)介:CommaX?系列產(chǎn)品采用經(jīng)典的硅膠膜吸附技術(shù)。質(zhì)粒中提純化柱由收集管、吸附柱、篩板、硅膠膜和壓圈五部分組成。在高鹽和低pH條件下,硅膠膜專一性地吸附DNA;而在低鹽或水溶液狀態(tài)下,DNA解吸附而被洗脫下來,從而得到純化。此方法具有簡(jiǎn)便、無毒、回收率高和純化效果好等特點(diǎn)。用質(zhì)粒中提純化柱提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測(cè)序、連接、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞等實(shí)驗(yàn)。[詳細(xì)]
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2018-05-23 09:52
其它
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質(zhì)粒中提純化試劑盒
- 資料名稱:質(zhì)粒中提純化試劑盒
適用產(chǎn)品:適用于中量提取質(zhì)粒DNA。
正文語(yǔ)言:中文
文件編號(hào):BP026-1
文件版本:1.0
文件格式:PDF
文件大?。?.9MB
內(nèi)容簡(jiǎn)介:CommaX?系列產(chǎn)品采用經(jīng)典的硅膠膜吸附技術(shù)。質(zhì)粒中提純化柱由收集管、吸附柱、篩板、硅膠膜和壓圈五部分組成。在高鹽和低pH條件下,硅膠膜專一性地吸附DNA;而在低鹽或水溶液狀態(tài)下,DNA解吸附而被洗脫下來,從而得到純化。此方法具有簡(jiǎn)便、無毒、回收率高和純化效果好等特點(diǎn)。用質(zhì)粒中提純化柱提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測(cè)序、連接、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞等實(shí)驗(yàn)。[詳細(xì)]
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2018-05-23 16:27
其它
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質(zhì)粒大提純化試劑盒
- 資料名稱:質(zhì)粒大提純化試劑盒
適用產(chǎn)品:適用于大量提取質(zhì)粒DNA。
正文語(yǔ)言:中文
文件編號(hào):BP027-1
文件版本:1.0
文件格式:PDF
文件大?。?.9MB
內(nèi)容簡(jiǎn)介:CommaX?系列產(chǎn)品采用經(jīng)典的硅膠膜吸附技術(shù)。質(zhì)粒大提純化柱由收集管、吸附柱、篩板、硅膠膜和壓圈五部分組成。在高鹽和低pH條件下,硅膠膜專一性地吸附DNA;而在低鹽或水溶液狀態(tài)下,DNA解吸附而被洗脫下來,從而得到純化。此方法具有簡(jiǎn)便、無毒、回收率高和純化效果好等特點(diǎn)。用質(zhì)粒大提純化柱提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測(cè)序、連接、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)染等多種細(xì)胞等實(shí)驗(yàn)。[詳細(xì)]
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2018-05-23 16:28
其它
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組織DNA的提取和純化
- 組織DNA的提取和純化[詳細(xì)]
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2015-10-15 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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MAIIA Diagnostics EPO純化試劑盒 說明書
- 世界ding級(jí)實(shí)驗(yàn)材料供應(yīng)商MAIIADiagnostics正式授權(quán)上海起發(fā)為其ZG代理,MAIIADiagnostics在一直是行業(yè)的標(biāo)桿,一直為廣大科研客戶提供Z為優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù),上海起發(fā)一直秉承為ZG科研客戶帶來**的產(chǎn)品,**的服務(wù),簽約MAIIADiagnostics就是為了給廣大科研客戶帶來更加完善的產(chǎn)品和服務(wù),您的滿意將是我們Zda的收獲MAIIADiagnosticsZG代理,MAIIADiagnostics上海代理,MAIIADiagnostics北京代理,MAIIADiagnostics廣東代理,MAIIADiagnostics江蘇代理MAIIADiagnostics湖北代理,MAIIADiagnostics天津,MAIIADiagnostics黑龍江代理,MAIIADiagnostics內(nèi)蒙古代理,MAIIADiagnostics吉林代理,MAIIADiagnostics福建代理,MAIIADiagnostics江蘇代理,MAIIADiagnostics浙江代理,MAIIADiagnostics四川代理,歡迎來到MAIIA診斷!促紅細(xì)胞生成素(EPO)的創(chuàng)新納米技術(shù)研究和分析。我們提供獨(dú)特的產(chǎn)品:從尿液和血清中純化EPO的工具>>使用我們優(yōu)質(zhì)的EPO單克隆抗體>>我們的MAIIA測(cè)試輕松EPO同種型分析>>尿液沉淀物含有蛋白質(zhì)-我們?yōu)槟馍⑺鼈?!MaiiaDiagnostics-EPOPurificationKitEPO純化促紅細(xì)胞生成素EPO是促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin)的英文簡(jiǎn)稱。人體中的促紅細(xì)胞生成素是由腎臟和肝臟分泌的一種激素樣物質(zhì),能夠促進(jìn)紅細(xì)胞生成。服用紅細(xì)胞生成素可以使患貧血的病人增加血流比溶度(即增加血液中紅細(xì)胞百分比)。這種藥物近年進(jìn)入商業(yè)市場(chǎng)。人體缺氧時(shí),此種激素生成增加,并導(dǎo)致紅細(xì)胞增生。EPO正是根據(jù)促紅細(xì)胞生成素的原理人工合成,它能促進(jìn)肌肉中氧氣生成,從而使肌肉更有勁、工作時(shí)間更長(zhǎng)。來自MAIIADiagnostics的EPO純化工具提供了一種獨(dú)特的系統(tǒng),用于從水性介質(zhì)如尿液,血清或血漿中快速純化和濃縮內(nèi)源性EPO,epoetins,NESP和Mircera,作為進(jìn)一步分析的前提。EPO純化試劑盒(Art.No.1390)易于使用的EPO親和純化工具,旨在作為用于通過IEF,LC/MS或EPOWGAMAIIA分析EPO的前期步驟,用于小樣品體積。一次性抗EPO柱用單克隆抗EPO抗體3F6固定,其非常特異地捕獲內(nèi)源和重組人EPO??笶PO柱具有從20mL尿液,2mL血清或血漿中純化和濃縮EPO的能力,具有高EPO回收率的55μL洗脫液和保留的同種型分布。如果使用適當(dāng)?shù)恼婵掌绻?,可以很容易地同時(shí)處理幾種凈化。解吸由微型離心機(jī)進(jìn)行。試劑盒含有足夠25次純化的試劑。運(yùn)行EPOPurificationKit并由MAIIADiagnostics提供的配件是FunnelPackF40,25個(gè)(Art。No.1340),單獨(dú)訂購(gòu)。MAIIA所需但不提供的設(shè)備診斷是具有標(biāo)準(zhǔn)化Luer內(nèi)錐形連接,真空源和調(diào)節(jié)器以提供穩(wěn)定流量的真空歧管(例如,QIAgenVacuumPumpArt。No.84010/84010和QIAgenManifold用于處理1-24旋轉(zhuǎn)列。)1390EPOPurificationKit25tests我們公司Zda優(yōu)勢(shì)是強(qiáng)大的采購(gòu),1:基本什么都能進(jìn)口,血清,抗體,耗材,還有部分限制進(jìn)口的,2:貨品全,現(xiàn)經(jīng)營(yíng)過700多個(gè)品牌,基本所有生物試劑耗材都可以進(jìn)口,特別是冷偏的產(chǎn)品那就更有優(yōu)勢(shì),3:提供加急服務(wù),一般1-2周到貨,超過時(shí)限加急費(fèi)全免4:價(jià)格公道,絕大部分價(jià)格有優(yōu)勢(shì),當(dāng)然不能保證1**%產(chǎn)品都是價(jià)格Zdi,因?yàn)閮r(jià)格Zdi意味著沒有服務(wù).5:良好的信譽(yù),大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù),客戶包括清華,北大交大復(fù)旦,中山等100多所大學(xué),ROCHE,阿斯利康,國(guó)藥,fisher等500多家公司6:我們du家代理的品牌有:AntibodyResearchCorporation,arcticzymes,Biorelevant,AmberGen,Inc.,clemente-associates,clodronateliposomes,ColumbiaBiosciences,enzymeresearch,GeneBridgesGmbH,Genovis,AmberGen,Inc.BiotechnologyGmbH,HaematologicTechnologiesHTIHaemtech,hookelabs,Immudex,InnovativeResearchofAmerica,inspiralis,ListBiologicalLaboratories,Inc.,lumafluor,Microsurfaces,multiplicom,nanotools,Pel-FreezBiologicals,pentapharm,progen,ProteinArk,QA-Bio,Inc,QA-Bio,IncQuickZymeBiosciences,Teknova,TriLinkBioTechnologies,Inc.,ZyagenLaboratories等7:我們還是invitrogen,qiagen,MidlandBioProductsCorporationam,sigma;neb,roche,merck,rnd,BD,GE,pierce,BioLegend等知名批發(fā),歡迎合作。[詳細(xì)]
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2018-09-29 10:02
產(chǎn)品樣冊(cè)
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質(zhì)粒DNA的分離、純化和鑒定概述
- 質(zhì)粒DNA的分離、純化和鑒定概述[詳細(xì)]
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2009-03-31 00:00
其它
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純化線粒體膜通道孔(MPTP)熒光檢測(cè)試劑盒
- 主要用途純化線粒體膜通道孔(MPTP)熒光檢測(cè)試劑是一種旨在通過鈣黃綠素載入后離心處理或鈷淬滅技術(shù),選擇性地聚集在線粒體內(nèi)呈現(xiàn)熒光染色,而存在于或由線粒體釋放到線粒體外的熒光染料,即刻發(fā)生熒光去除或淬滅,來分析和觀察線粒體膜通道孔活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種純化線粒體膜通道孔活性(瞬時(shí)或長(zhǎng)期開放狀態(tài))的檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,活體檢測(cè),分辨率高,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景線粒體膜通道孔(mitochondrialpermeabilitytransitionpore;MPTP)是由線粒體內(nèi)外膜成分構(gòu)成的非特異性且鈣離子依賴性通道。在細(xì)胞凋亡或壞死時(shí),線粒體內(nèi)容物通過膜通道孔釋放到胞漿中。膜通道孔的開放,顯著改變線粒體的通透性。鈣離子過度進(jìn)入、線粒體谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等導(dǎo)致膜通道孔的持續(xù)開放,而造成細(xì)胞色素C的釋放和線粒體膜電位的消失。鈣黃綠素-AM,又稱雙甲亞胺二乙酸鈉熒光素-乙酰氧基甲基酯【bis(bis-carboxymethylaminomethylfluorescein)-acetoxymethylester】,作為熒光探針:**,適宜的分子量622kd,小于1.5kd;第二,幾乎不具有膜結(jié)合性;第三,不是線粒體酶的底物;第四,容易進(jìn)入細(xì)胞及其線粒體。鈣黃綠素-AM進(jìn)入線粒體后,被內(nèi)酯酶切離,產(chǎn)生具有極性的熒光性強(qiáng)的鈣黃綠素,被線粒體俘獲。同時(shí)線粒體外的鈣黃綠素通過離心去除或受到其淬滅劑鈷離子的淬滅。一旦線粒體膜通道孔瞬時(shí)開放,鈣黃綠素釋放出線粒體外,由于離心處理或被鈷離子淬滅。線粒體內(nèi)鈣黃綠素?zé)晒獾淖兓砻髂ねǖ揽椎拈_放狀態(tài)。產(chǎn)品內(nèi)容染色液(ReagentA)微升中和液(ReagentB)毫升保存液(ReagentC)毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存染色液(ReagentA)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里;有效保證6月用戶自備黑色96孔板:用于線粒體熒光分析的容器1.5毫升離心管:用于線粒體染色的容器載波片/蓋玻片:用于線粒體樣品存放后熒光分析微型臺(tái)式離心機(jī):用于沉淀線粒體培養(yǎng)箱:用于染色孵育(共聚焦)熒光顯微鏡:用于線粒體熒光分析熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀:用于線粒體熒光定量分析實(shí)驗(yàn)步驟直接法準(zhǔn)備好待測(cè)的純化線粒體樣品移取100微升線粒體樣品(總量為0.2毫克)到1.5毫升離心管加入xx微升染色液(ReagentA),混勻放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育15分鐘,避免光照放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf5415)小心抽去上清液加入xx微升37℃預(yù)熱的保存液(ReagentC),混勻顆粒群放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf5415)小心抽去保存液(ReagentC)小心加入xx微升37℃預(yù)熱的保存液(ReagentC),混勻顆粒群選擇下列方式之一進(jìn)行操作:(A)使用(共聚焦)熒光顯微鏡觀察(定性檢測(cè)):1)移取10微升上述懸液到載波片上,蓋上蓋玻片2)激發(fā)波長(zhǎng)488nm,散發(fā)波長(zhǎng)505nm――綠色熒光減弱,表明膜通道孔活性(MPTP)增強(qiáng)或使用熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)(定量檢測(cè)):1)移取100微升上述懸液到100微升比色杯或黑色96孔板2)即刻放進(jìn)熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀:激發(fā)波長(zhǎng)488nm,散發(fā)波長(zhǎng)505nm――RFU降低,表明膜通道孔活性(MPTP)增強(qiáng)間接法實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(ReagentA)置入冰槽里融化,中和液(ReagentB)放進(jìn)37℃恒溫水槽里預(yù)熱。然后移出xx微升染色液(ReagentA)到新的1.5毫升離心管,加入xx微升中和液(ReagentB),混勻后,標(biāo)記為染色工作液,置入暗室里。然后進(jìn)行下列操作。準(zhǔn)備好待測(cè)的純化線粒體樣品移取100微升線粒體樣品(總量為0.2毫克)到1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf5415)小心抽去上清液加入xx微升含有染色液(ReagentA)和中和液(ReagentB)的染色工作液,充分混勻放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱里孵育15分鐘,避免光照選擇下列方式之一進(jìn)行操作:使用(共聚焦)熒光顯微鏡觀察(定性檢測(cè)):1)移取10微升上述細(xì)胞懸液到載波片上,蓋上蓋玻片(每隔5分鐘檢測(cè)一次,持續(xù)30分鐘)2)激發(fā)波長(zhǎng)488nm,散發(fā)波長(zhǎng)505nm――綠色熒光減弱,表明膜通道孔活性(MPTP)增強(qiáng)或使用熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)(定量檢測(cè)):1)移取100微升上述懸液到100微升比色杯或黑色96孔板2)即刻放進(jìn)熒光分光光度儀或熒光酶標(biāo)儀(每隔5分鐘檢測(cè)一次,持續(xù)30分鐘):激發(fā)波長(zhǎng)488nm,散發(fā)波長(zhǎng)505nm――RFU降低,表明膜通道孔活性(MPTP)增強(qiáng)[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
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