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細(xì)菌基因組DNA純化試劑盒
本文由 深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司 整理匯編
2024-09-29 11:00 848閱讀次數(shù)
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本公司新推出的全新細(xì)菌基因組純化試劑盒,操作簡便,純化量大,可純化革蘭氏陽性和陰性菌的基因組DNA。細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒使用說明本試劑盒可用于革蘭氏陰性和陽性菌的基因組DNA提取,由細(xì)菌重懸液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液組成??蓮?-5ml菌液中提取基因組DNA。整個(gè)提取過程不超過45分鐘。提取過程包括:1菌液離心,重懸。2裂解菌體,釋放基因組DNA。3鹽析沉淀蛋白,分離DNA。4異丙醇沉淀脫鹽并濃縮。570%乙醇清洗,晾干并用DNA溶解液溶解。本試劑盒采用復(fù)合裂解液,其中含有YZDNA酶的成分,在加熱(65°C)狀態(tài)下,可保證完整的細(xì)菌基因組DNA的充分裂解釋放,本試劑盒即可提取異丙醇沉淀時(shí),罕見渾濁的蛋白質(zhì)雜質(zhì)的共沉淀。提取的基因組可用于PCR擴(kuò)增、內(nèi)切酶消化以及膜雜交等。一、試劑盒組成(本試劑盒提供的組份,至少可提取100份1-5ml菌液基因組DNA的純化,每種組份均有足夠的富余量)1.復(fù)合裂解液:30ml1瓶。2.蛋白沉淀液:300ml1瓶。3.DNA溶解液:20ml1瓶。4.操作說明書一份。二、本試劑盒未提供,須用戶自備的試劑為:異丙醇,70%乙醇(國產(chǎn)分析純)。三、提取操作:1.菌液離心:取革蘭氏陰性菌菌液1-2ml;或者革蘭氏陽性菌菌液2-5ml,1000rpm離心1分鐘。2.加入細(xì)菌重懸液100ul,震蕩使菌體重懸。3.將復(fù)合裂解液置65°C水浴加熱,使結(jié)晶成分溶解,每個(gè)細(xì)菌重懸液中分別加入300ul的復(fù)合裂解液。4.混璇器震蕩混勻10秒,置65°C水浴中反應(yīng)10分鐘(革蘭氏陰性菌),20分鐘(革蘭氏陽性菌)。5.各管中加入300ul蛋白沉淀液。上下顛倒5-6次使兩者混勻。6.13000-16000×g,離心3-5分鐘。7.將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中(注意:由于有些細(xì)菌含有多糖或者脂蛋白成分,離心后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞成分上浮的情況,此時(shí)取漂浮層下的均一透明液體),加入等體積異丙醇,此時(shí)可見透明的絮狀物,混勻后離心,同步驟5,吸去上清。8.離心管中加入200ul,70%的乙醇溶液,來回倒置,清洗管壁,離心同上。9.移去70%乙醇,倒置離心管于干凈的濾紙上,自然干燥10-15分鐘,加入DNA溶解液100ul。10.快速漩渦震蕩1-2秒,使DNA溶解液沖刷到所有沉淀的DNA。11.將純化的全血基因組置65C水浴1小時(shí),或4C過夜使DNA充分溶解(要求不嚴(yán)格的PCR試驗(yàn)可縮短時(shí)間或省去該步),輕輕彈動(dòng)管壁有助于溶解基因組DNA可直接進(jìn)行PCR等下一步操作。四、注意事項(xiàng):1.用戶可選擇使用RNaseA,使用方法為:在第3步完成后1.5ulRNaseA,混勻后,37C孵育15分鐘,冷卻至室溫。(RNaseA的配法:將RNaseA溶于TEbuffer中,濃度為4mg/ml,煮沸10分鐘,以去除DNase,分裝后-20C保存;也可購買配好的試劑使用。)2.革蘭氏陽性菌由于細(xì)胞壁的存在,純化的量較陰性菌要少一倍以上。3.提取得DNA樣本在70%乙醇中,存于-80C,可長期保存。五、儲(chǔ)存條件:本試劑盒在室溫條件下可保存一年。
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細(xì)菌基因組DNA純化試劑盒
本公司新推出的全新細(xì)菌基因組純化試劑盒,操作簡便,純化量大,可純化革蘭氏陽性和陰性菌的基因組DNA。細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒使用說明本試劑盒可用于革蘭氏陰性和陽性菌的基因組DNA提取,由細(xì)菌重懸液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液組成。可從1-5ml菌液中提取基因組DNA。整個(gè)提取過程不超過45分鐘。提取過程包括:1菌液離心,重懸。2裂解菌體,釋放基因組DNA。3鹽析沉淀蛋白,分離DNA。4異丙醇沉淀脫鹽并濃縮。570%乙醇清洗,晾干并用DNA溶解液溶解。本試劑盒采用復(fù)合裂解液,其中含有YZDNA酶的成分,在加熱(65°C)狀態(tài)下,可保證完整的細(xì)菌基因組DNA的充分裂解釋放,本試劑盒即可提取異丙醇沉淀時(shí),罕見渾濁的蛋白質(zhì)雜質(zhì)的共沉淀。提取的基因組可用于PCR擴(kuò)增、內(nèi)切酶消化以及膜雜交等。一、試劑盒組成(本試劑盒提供的組份,至少可提取100份1-5ml菌液基因組DNA的純化,每種組份均有足夠的富余量)1.復(fù)合裂解液:30ml1瓶。2.蛋白沉淀液:300ml1瓶。3.DNA溶解液:20ml1瓶。4.操作說明書一份。二、本試劑盒未提供,須用戶自備的試劑為:異丙醇,70%乙醇(國產(chǎn)分析純)。三、提取操作:1.菌液離心:取革蘭氏陰性菌菌液1-2ml;或者革蘭氏陽性菌菌液2-5ml,1000rpm離心1分鐘。2.加入細(xì)菌重懸液100ul,震蕩使菌體重懸。3.將復(fù)合裂解液置65°C水浴加熱,使結(jié)晶成分溶解,每個(gè)細(xì)菌重懸液中分別加入300ul的復(fù)合裂解液。4.混璇器震蕩混勻10秒,置65°C水浴中反應(yīng)10分鐘(革蘭氏陰性菌),20分鐘(革蘭氏陽性菌)。5.各管中加入300ul蛋白沉淀液。上下顛倒5-6次使兩者混勻。6.13000-16000×g,離心3-5分鐘。7.將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中(注意:由于有些細(xì)菌含有多糖或者脂蛋白成分,離心后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞成分上浮的情況,此時(shí)取漂浮層下的均一透明液體),加入等體積異丙醇,此時(shí)可見透明的絮狀物,混勻后離心,同步驟5,吸去上清。8.離心管中加入200ul,70%的乙醇溶液,來回倒置,清洗管壁,離心同上。9.移去70%乙醇,倒置離心管于干凈的濾紙上,自然干燥10-15分鐘,加入DNA溶解液100ul。10.快速漩渦震蕩1-2秒,使DNA溶解液沖刷到所有沉淀的DNA。11.將純化的全血基因組置65C水浴1小時(shí),或4C過夜使DNA充分溶解(要求不嚴(yán)格的PCR試驗(yàn)可縮短時(shí)間或省去該步),輕輕彈動(dòng)管壁有助于溶解基因組DNA可直接進(jìn)行PCR等下一步操作。四、注意事項(xiàng):1.用戶可選擇使用RNaseA,使用方法為:在第3步完成后1.5ulRNaseA,混勻后,37C孵育15分鐘,冷卻至室溫。(RNaseA的配法:將RNaseA溶于TEbuffer中,濃度為4mg/ml,煮沸10分鐘,以去除DNase,分裝后-20C保存;也可購買配好的試劑使用。)2.革蘭氏陽性菌由于細(xì)胞壁的存在,純化的量較陰性菌要少一倍以上。3.提取得DNA樣本在70%乙醇中,存于-80C,可長期保存。五、儲(chǔ)存條件:本試劑盒在室溫條件下可保存一年。[詳細(xì)]
2024-09-29 11:00
產(chǎn)品樣冊
細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒
資料名稱:細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒
適用產(chǎn)品:本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù),能夠快速提取細(xì)菌的基因組DNA,提取的基因組DNA片段大,純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠。
正文語言:中文
文件編號(hào):BP035-1
文件版本:1.0
文件格式:PDF
文件大?。?.8MB
內(nèi)容簡介:本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù),能夠快速提取細(xì)菌的基因組DNA,提取的基因組DNA片段大,純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠。本試劑盒采用獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng),可Zda限度的去除雜蛋白及其他有機(jī)物,經(jīng)裂解后的DNA可GX結(jié)合到吸附柱上,殘留的少量雜質(zhì)可使用漂洗液進(jìn)行去除,Z后使用洗脫液進(jìn)行洗脫收集,獲得高純度的基因組DNA。用本試劑盒提取的細(xì)菌基因組DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建等分子生物學(xué)下游實(shí)驗(yàn)。[詳細(xì)]
2018-05-24 11:15
其它
PCR純化試劑盒/DNA純化試劑盒
PCR純化試劑盒/DNA純化試劑盒[詳細(xì)]
2015-09-11 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
PCR 純化試劑盒/DNA 純化試劑盒
PCR 純化試劑盒/DNA 純化試劑盒[詳細(xì)]
2014-12-11 00:00
期刊論文
細(xì)菌基因組提取試劑盒說明書
細(xì)菌基因組提取試劑盒說明書[詳細(xì)]
2016-05-25 00:00
期刊論文
病毒基因組提取試劑盒(DNA)說明書
病毒基因組提取試劑盒(DNA)說明書[詳細(xì)]
2016-05-25 00:00
操作手冊
糞便DNA高質(zhì)純化試劑盒
糞便DNA高質(zhì)純化試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途糞便DNA高質(zhì)純化試劑是一種旨在經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)分離法以后,由糞便(人體、動(dòng)物等)中分離獲得的DNA,進(jìn)行二度親和純化,Zda限度地去除復(fù)雜又難以去除的蛋白、金屬成分、雜質(zhì)等非核酸類物質(zhì)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其應(yīng)用于即時(shí)PCR、RLPF分析、測序、雜交、遺傳鑒定、突變分析、性別鑒定、司法鑒定等。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,操作簡單,純度出色,重復(fù)性好,堪稱國際上同類產(chǎn)品**。技術(shù)背景糞便中含有許多污染成分,降解DNA和YZPCR反應(yīng)。針對標(biāo)準(zhǔn)處理無法有效地去除頑固干擾因子的情況下,運(yùn)用特殊親和技術(shù),達(dá)到高度純化的效果。產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)2毫升親和液(ReagentJ)2毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于DNA純化操作的容器微型臺(tái)式離心機(jī)(例如EPPENDORF5415):用于沉淀反應(yīng)物恒溫水槽:用于孵育反應(yīng)物實(shí)驗(yàn)步驟1.準(zhǔn)備好從1克糞便樣品分離的DNA產(chǎn)物(100微克DNA總量)2.移入到1.5毫升離心管3.加入適量的緩沖液(ReagentA)到總?cè)萘繛?00微升4.加入100微升親和液(ReagentB)(注意:使用前,先搖勻沉淀的親和液(ReagentB))5.用手充分混勻6.放進(jìn)56℃恒溫水槽孵育30分鐘,期間用手混勻一次7.放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如EPPENDORF5415)8.小心移出180微升上清液到新的1.5毫升離心管9.移出適量DNA溶液進(jìn)行后續(xù)PCR反應(yīng)或保存在-20℃冰箱里注意事項(xiàng)1.本產(chǎn)品為20次(1克糞便樣品的DNA產(chǎn)物)操作或50次(200毫克糞便樣品的DNA產(chǎn)物)操作2.操作時(shí),須戴手套3.根據(jù)用戶樣品量大小,相應(yīng)調(diào)整試劑用量4.親和液(ReagentB)使用前,須搖勻5.建議使用糞便DNA分離試劑盒(HL20011.1)作為標(biāo)準(zhǔn)分離法操作6.本公司提供系列糞便核酸純化試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純度優(yōu)異[詳細(xì)]
2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
病毒基因組提取試劑盒(DNA/RNA)說明書
病毒基因組提取試劑盒(DNA/RNA)說明書[詳細(xì)]
2016-05-25 00:00
產(chǎn)品樣冊
糞便DNA高質(zhì)純化試劑盒產(chǎn)品說明書
糞便DNA高質(zhì)純化試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途糞便DNA高質(zhì)純化試劑是一種旨在經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)分離法以后,由糞便(人體、動(dòng)物等)中分離獲得的DNA,進(jìn)行二度親和純化,Zda限度地去除復(fù)雜又難以去除的蛋白、金屬成分、雜質(zhì)等非核酸類物質(zhì)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其應(yīng)用于即時(shí)PCR、RLPF分析、測序、雜交、遺傳鑒定、突變分析、性別鑒定、司法鑒定等。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,操作簡單,純度出色,重復(fù)性好,堪稱國際上同類產(chǎn)品**。技術(shù)背景糞便中含有許多污染成分,降解DNA和YZPCR反應(yīng)。針對標(biāo)準(zhǔn)處理無法有效地去除頑固干擾因子的情況下,運(yùn)用特殊親和技術(shù),達(dá)到高度純化的效果。產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)2毫升親和液(ReagentJ)2毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于DNA純化操作的容器微型臺(tái)式離心機(jī)(例如EPPENDORF5415):用于沉淀反應(yīng)物恒溫水槽:用于孵育反應(yīng)物實(shí)驗(yàn)步驟1.準(zhǔn)備好從1克糞便樣品分離的DNA產(chǎn)物(100微克DNA總量)2.移入到1.5毫升離心管3.加入適量的緩沖液(ReagentA)到總?cè)萘繛?00微升4.加入100微升親和液(ReagentB)(注意:使用前,先搖勻沉淀的親和液(ReagentB))5.用手充分混勻6.放進(jìn)56℃恒溫水槽孵育30分鐘,期間用手混勻一次7.放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如EPPENDORF5415)8.小心移出180微升上清液到新的1.5毫升離心管9.移出適量DNA溶液進(jìn)行后續(xù)PCR反應(yīng)或保存在-20℃冰箱里注意事項(xiàng)1.本產(chǎn)品為20次(1克糞便樣品的DNA產(chǎn)物)操作或50次(200毫克糞便樣品的DNA產(chǎn)物)操作2.操作時(shí),須戴手套3.根據(jù)用戶樣品量大小,相應(yīng)調(diào)整試劑用量4.親和液(ReagentB)使用前,須搖勻5.建議使用糞便DNA分離試劑盒(HL20011.1)作為標(biāo)準(zhǔn)分離法操作6.本公司提供系列糞便核酸純化試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純度優(yōu)異[詳細(xì)]
2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
用 Retsch MM301基因組DNA快速提取
用 Retsch MM301基因組DNA快速提取[詳細(xì)]
2007-03-15 00:00
實(shí)驗(yàn)操作
基因組DNA文庫構(gòu)建必備實(shí)驗(yàn)技巧
基因組DNA文庫構(gòu)建必備實(shí)驗(yàn)技巧基因組DNA文庫用途十分廣泛,如用于人類及動(dòng)植物基因組學(xué)研究,基因表達(dá)調(diào)控研究,分析、分離特定的基因片段等.通常情況下,基因組文庫構(gòu)建的基本流程可以歸為四大步驟:分離基因組DNA、對基因組DNA作相關(guān)的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞.一、分離基因組DNA(gDNA)毫無疑問,高質(zhì)量的基因組DNA對于基因組文庫構(gòu)建是至關(guān)重要的.需要通過經(jīng)驗(yàn)來選擇合適的基因組DNA分離方法,在分離過程中保證DNA不被過度剪切或降解,同時(shí)也要盡量保證DNA的純度.二、處理基因組DNA根據(jù)研究目的,研究者需要選擇合適的載體.不同的載體對基因組DNA的長度有不同的要求,必須選擇合適長度的基因組DNA來構(gòu)建基因組文庫.比如,對于黏粒載體,合適的片段長度大約為40kb;對于BAC載體,合適的片段長度平均為120kb-300kb.構(gòu)建黏?;蚪MDNA文庫,需要將基因組DNA用注射器抽打來隨機(jī)剪切DNA;接著用末端修復(fù)酶修復(fù)DNA,可以提高DNA連接入載體的效率;然后通過脈沖場電泳或者普通電泳來找到40kb左右的DNA片段,隨后使用膠回收試劑盒回收DNA.構(gòu)建BAC基因組DNA文庫,需要將基因組DNA用限制性內(nèi)切酶(常用EcoRI、BamHI或者HindIII)來消化基因組DNA,然后通過脈沖場電泳找到合適長度的DNA片段(比如100kb-150kb),隨后透析回收DNA.需要注意:(1)電泳時(shí),要選用合適的DNALadder,以保證電泳后可以準(zhǔn)確定位所需分子量的DNA.(2)電泳以后,應(yīng)盡量縮短用紫外光照射目標(biāo)DNA的時(shí)間,否則會(huì)顯著降低克隆效率.(3)回收DNA的時(shí)候,應(yīng)該要避免過度離心,以防止DNA被剪切,降低文庫質(zhì)量.三、載體的選擇目前,常用的基因組文庫載體有黏粒載體、P1噬菌體載體、PAC載體(P1人工染色體)、BAC載體(細(xì)菌人工染色體)和YAC載體(酵母人工染色體).選用何種載體可以參考如下幾個(gè)因素:1、目標(biāo)區(qū)域的大?。喝绻蚪M的目標(biāo)區(qū)域很小(小于50kb),那么可以選擇黏粒載體甚至λ噬菌體載體.利用現(xiàn)有的商品化的黏粒載體、GX率的包裝混合物和合適的大腸桿菌菌株,可以方便的構(gòu)建黏粒載體文庫.如果基因組的目標(biāo)區(qū)域比較大,那么P1、PAC或者BAC就比較合適了.P1操作比較困難,PAC相對簡便.BAC載體也是很好的選擇,可以利用現(xiàn)有的成熟產(chǎn)品來構(gòu)建BAC文庫,比如商業(yè)化的一系列BAC載體及配套試劑盒.如果目標(biāo)區(qū)域非常大(大于250kb),那么YAC載體就是了.不過,應(yīng)用YAC載體來構(gòu)建基因組文庫,操作非常繁瑣困難.表1各種載體的比較載體容量(kb)宿主導(dǎo)入細(xì)胞方式黏粒30-45大腸桿菌轉(zhuǎn)導(dǎo)P170-100大腸桿菌轉(zhuǎn)導(dǎo)PAC130-150大腸桿菌電轉(zhuǎn)BAC120-300大腸桿菌電轉(zhuǎn)YAC250-400酵母轉(zhuǎn)化2、篩選文庫的難易程度:黏粒載體一般使用傳統(tǒng)的濾膜影印雜交來篩選,但是這種方法對于構(gòu)建區(qū)域圖譜及疊連群來說既費(fèi)力又浪費(fèi).大容量載體文庫,如P1、PAC、BAC、YAC,以二維陣列保存,既可以用傳統(tǒng)的單拷貝的探針雜交法篩選,又可以用PCR進(jìn)行多克隆的群體篩選.而且,使用高容量載體構(gòu)建文庫,可以減少染色體步查的步驟.3、載體拷貝數(shù)的考慮:當(dāng)把大片段DNA片段克隆到高拷貝的載體時(shí),克隆DNA會(huì)發(fā)生重組,從而影響克隆序列的保真性和穩(wěn)定性;而單拷貝載體的低產(chǎn)量DNA是高通量分析的瓶頸.對這一矛盾的解決方案可采用EPICENTRE公司的CopyControlTM克隆系統(tǒng),CopyControlTM技術(shù)整合了單拷貝載體與多拷貝載體的優(yōu)點(diǎn).單拷貝載體能提高插入片段的穩(wěn)定性,而且能在誘導(dǎo)劑的作用下,即時(shí)擴(kuò)增出高拷貝數(shù)的克隆而獲得高產(chǎn)量的DNA.四、將基因組DNA片段連接入載體使用連接酶把上述大小合適的DNA片段連接入載體.許多商業(yè)化載體已經(jīng)經(jīng)過預(yù)處理,可以直接使用,無需內(nèi)切酶消化及脫磷酸化處理.選用連接快、效率高的連接酶,連接反應(yīng)體系以100μl為宜.注意:BAC載體連接完以后,需要將連接產(chǎn)物做脫鹽處理,除去連接反應(yīng)緩沖液里的鹽分.五、將重組載體轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞如果構(gòu)建黏粒文庫,需要用包裝蛋白來包裝上述的連接反應(yīng)產(chǎn)物,測定包裝好的黏粒克隆的滴度,然后轉(zhuǎn)染.挑出重組子,鑒定插入片段的大小.如果文庫的大小和質(zhì)量都令人滿意的話,就可以鋪板進(jìn)行文庫篩選,或者擴(kuò)增、保存文庫.如果構(gòu)建BAC文庫,應(yīng)選擇電轉(zhuǎn)法,將上述連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入受體菌,涂板長出克隆.獲得克隆后需要對BAC克隆的大小進(jìn)行評估,確定文庫大小是否能夠滿足要求.如果文庫大小合適,就可以進(jìn)行后續(xù)操作了.六、文庫克隆數(shù)的確定基因組DNA文庫需要包含足夠多的克隆,來保證文庫的代表性.一般使用如下的經(jīng)驗(yàn)公式來確定:N=ln(1-P)/ln(1-f)P是希望得到的覆蓋率,f是插入片段大小與基因組DNA大小的比值,N是所需的克隆數(shù).舉例來說,用BAC載體構(gòu)建人類基因組文庫,人類基因組大小為3x109bp,插入片段大小為100kb,希望覆蓋率99%,那么所需要的BAC克隆數(shù)為N=ln(1-0.99)/ln(1-[106bp/3x109bp])=138,298技術(shù)支持資料:材料緩沖液和溶液-堿裂解液I,4°C50mM葡萄糖25mMTris-Cl(pH8.0)10mMEDTA(pH8.0)配制堿裂解液I約100ml,滅菌,保存在四度.-堿裂解液II,新鮮配置,室溫保存0.2NNaOH(從10N的NaOH新鮮制備)1%(w/v)SDS堿裂解液II應(yīng)該新鮮配制,室溫保存.-堿裂解液III,4°C5M醋酸鉀,60ml冰醋酸,11.5mlSDW,28.5ml-酒精-70%酒精-異丙醇-酚:氯仿(1:1,v/v)-醋酸鈉(3M,pH5.2)-STE,4°C10mMTris-Cl(pH8.0)0.1MNaCl1mMEDTA(pH8.0)-TE(pH8.0)10mMTris-Cl(pH8.0)10mMEDTA(pH8.0)載體與菌株BAC轉(zhuǎn)化的大腸桿菌培養(yǎng)基和抗生素含12.5μg/ml氯霉素的LB平板和液體培養(yǎng)基酶和緩沖液溶菌酶RNaseA,不含DNase限制性內(nèi)切酶和相應(yīng)緩沖液核苷酸/寡核苷酸用于脈沖場凝膠電泳(pulsed-fieldgelelectrophoresis)的DNA標(biāo)準(zhǔn)參照物凝膠/點(diǎn)樣緩沖液脈沖場凝膠電泳(Pulsed-fieldgels,或者0.5%瓊脂糖凝膠)離心機(jī)/轉(zhuǎn)頭/離心管其他37攝氏度搖床1.BACDNA大量提取方案(參考文獻(xiàn):Molecularcloning:ALaboratoryManualThirdEdition)此方案適合從500ml的菌液中提取BACDNA,一般可以產(chǎn)生20-25μg純化的DNA.方法1.將50μlBAC轉(zhuǎn)化菌的過夜培養(yǎng)物接種到500ml含12.5μg/ml氯霉素的LB液體培養(yǎng)基中,37℃震蕩(280rpm)培養(yǎng)12到16小時(shí).2.2500g,4℃,離心15min,收集菌體.3.用100ml冰預(yù)冷的STE重新懸浮細(xì)菌沉淀.按步驟2方法離心收集細(xì)菌.4.用24ml含RNase(100μg/ml)的堿性裂解液I溶解細(xì)菌.加溶菌酶至終濃度為1mg/ml.5.加入24ml新鮮配置的堿性裂解液II.蓋緊離心瓶蓋,輕輕翻轉(zhuǎn)瓶子數(shù)次,使內(nèi)容物完全混勻,冰裕5min.6.加入24ml冰預(yù)冷的堿性裂解液III,蓋緊瓶蓋,輕輕翻轉(zhuǎn)瓶子數(shù)次,使內(nèi)容物完全混勻,置冰上5min.7.15000g,4℃,離心10min,將上清轉(zhuǎn)移到另一離心瓶中,棄沉淀.8.加等體積的酚:氯仿.輕輕翻轉(zhuǎn)離心瓶數(shù)次,混勻.3000g,室溫離心15min.9.將水相移至另一離心瓶中,加入等體積的異丙醇,翻轉(zhuǎn)離心瓶數(shù)次,混勻.10.15,000g,室溫離心15分鐘,回收核酸沉淀.11.棄上清,用20ml70%乙醇漂洗沉淀.12.棄乙醇,風(fēng)干使乙醇揮發(fā)殆盡.13.小心將BACDNA沉淀溶于0.2mlTE(pH8.0)中.2.BACDNA的小量提取(參考文獻(xiàn):Molecularcloning:ALaboratoryManualThirdEdition)此方案適合從5ml菌液中提取BACDNA,一般可以產(chǎn)生0.1-0.4μg的BACDNA.方法:1.挑取單菌落接種至5ml含12.5μg/ml氯霉素的LB培養(yǎng)基中,37℃劇烈震搖過夜.2.2000g,4℃,離心5min,收集菌體.3.在每個(gè)離心管中加5ml預(yù)冷的STE,用移液器吹懸細(xì)菌沉淀.按步驟2離心收集細(xì)菌.4.將菌體重懸于200ul冰冷的堿性裂解液I中.將菌體轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的微量離心管中,置于冰上.5.向管中加入400μl新鮮配置的堿性裂解液II.輕輕翻轉(zhuǎn)數(shù)次,將離心管置于冰上.6.向管中加入300μl冰冷的堿性裂解液III,輕輕翻轉(zhuǎn)數(shù)次.將離心管置于冰上5min.7.在微量離心機(jī)上以Zda速度4℃離心5min,除去細(xì)胞碎片沉淀.將上清移入一新的微量離心管中.室溫下加入900μl異丙醇,輕輕翻轉(zhuǎn)數(shù)次離心管,混勻.8.立即在微量離心機(jī)上室溫下Zda速離心5min,使核酸沉淀.棄去上清,用1ml70%乙醇小心漂洗.室溫下離心2min,吸去乙醇.室溫干燥沉淀5-10min后,將沉淀溶于50μlTE(pH8.0)中.[詳細(xì)]
2018-11-16 10:02
產(chǎn)品樣冊
組織DNA的提取和純化
組織DNA的提取和純化[詳細(xì)]
2015-10-15 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
科學(xué)家為一種細(xì)菌重編基因組密碼
科學(xué)家為一種細(xì)菌重編基因組密碼[詳細(xì)]
2024-09-28 02:39
實(shí)驗(yàn)操作
血液基因組DNA提取試劑盒
資料名稱:血液基因組DNA提取試劑盒
適用產(chǎn)品:使用本試劑盒回收的D N A 可適用于各種常規(guī)操作, 包括酶切、P C R 、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。
正文語言:中文
文件編號(hào):BP024-1
文件版本:1.0
文件格式:PDF
文件大?。?.9MB
內(nèi)容簡介:本試劑盒采用酶裂解法裂解血液樣本,適用于從新鮮、加抗凝血?jiǎng)┗蚶鋬龅难簶颖局刑崛』蚪MDNA。離心吸附柱采用的硅基質(zhì)材料為本公司特有新型材料,可特異性、GX、專一吸附DNA,可Zda限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。提取的基因組DNA片段大,純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠。[詳細(xì)]
2018-05-23 09:43
其它
土壤基因組DNA提取試劑盒
資料名稱:土壤基因組DNA提取試劑盒
適用產(chǎn)品:適用于新鮮的土壤樣本(如花盆土、農(nóng)田土、花壇土、濕泥、河流沉積物等)中提取基因組DNA。
正文語言:中文
文件編號(hào):BP028-1
文件版本:1.0
文件格式:PDF
文件大小:0.8MB
內(nèi)容簡介:本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù),能夠快速提取和純化土壤基因組DNA,適用于新采取的土壤樣本,如農(nóng)田土、花壇土、濕泥等。本試劑盒采用獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng),可將土壤樣本中的腐殖酸等雜質(zhì)盡量去除,經(jīng)裂解后的DNA可GX結(jié)合到吸附柱上,殘留的少量雜質(zhì)可使用漂洗液進(jìn)行去除,Z后使用洗脫液進(jìn)行洗脫收集,獲得高純度的基因組DNA。用本試劑盒提取的土壤基因組DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建等分子生物學(xué)下游實(shí)驗(yàn)。[詳細(xì)]
2018-05-23 16:29
其它
植物基因組DNA提取試劑盒
資料名稱:植物基因組DNA提取試劑盒
適用產(chǎn)品:本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù),能夠快速提取植物基因組DNA,適用于從植物組織細(xì)胞中提取總基因組DNA,提取的基因組DNAZda長度可達(dá)到50 kb。
正文語言:中文
文件編號(hào):BP029-1
文件版本:1.0
文件格式:PDF
文件大?。?.9MB
內(nèi)容簡介:本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù),能夠快速提取植物基因組DNA,適用于從植物組織細(xì)胞中提取總基因組DNA,提取的基因組DNAZda長度可達(dá)到50 kb。本試劑盒采用獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng),可Zda限度的去除雜蛋白及其他有機(jī)物等雜質(zhì),經(jīng)裂解后的DNA可GX結(jié)合到吸附柱上,殘留的少量雜質(zhì)可使用漂洗液進(jìn)行去除,Z后使用洗脫液進(jìn)行洗脫收集,獲得高純度的基因組DNA。用本試劑盒提取的植物基因組DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建等分子生物學(xué)下游實(shí)驗(yàn)。[詳細(xì)]
2018-05-23 16:30
其它
土壤基因組DNA提取試劑盒
資料名稱:土壤基因組DNA提取試劑盒
適用產(chǎn)品:適用于新鮮的土壤樣本(如花盆土、農(nóng)田土、花壇土、濕泥、河流沉積物等)中提取基因組DNA。
正文語言:中文
文件編號(hào):BP028-1
文件版本:1.0
文件格式:PDF
文件大?。?.8MB
內(nèi)容簡介:本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù),能夠快速提取和純化土壤基因組DNA,適用于新采取的土壤樣本,如農(nóng)田土、花壇土、濕泥等。本試劑盒采用獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng),可將土壤樣本中的腐殖酸等雜質(zhì)盡量去除,經(jīng)裂解后的DNA可GX結(jié)合到吸附柱上,殘留的少量雜質(zhì)可使用漂洗液進(jìn)行去除,Z后使用洗脫液進(jìn)行洗脫收集,獲得高純度的基因組DNA。用本試劑盒提取的土壤基因組DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建等分子生物學(xué)下游實(shí)驗(yàn)。[詳細(xì)]
2018-05-24 10:22
其它
植物基因組DNA提取試劑盒
資料名稱:植物基因組DNA提取試劑盒
適用產(chǎn)品:本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù),能夠快速提取植物基因組DNA,適用于從植物組織細(xì)胞中提取總基因組DNA,提取的基因組DNAZda長度可達(dá)到50 kb。
正文語言:中文
文件編號(hào):BP029-1
文件版本:1.0
文件格式:PDF
文件大?。?.9MB
內(nèi)容簡介:本試劑盒采用獨(dú)特的硅膠膜吸附技術(shù),能夠快速提取植物基因組DNA,適用于從植物組織細(xì)胞中提取總基因組DNA,提取的基因組DNAZda長度可達(dá)到50 kb。本試劑盒采用獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng),可Zda限度的去除雜蛋白及其他有機(jī)物等雜質(zhì),經(jīng)裂解后的DNA可GX結(jié)合到吸附柱上,殘留的少量雜質(zhì)可使用漂洗液進(jìn)行去除,Z后使用洗脫液進(jìn)行洗脫收集,獲得高純度的基因組DNA。用本試劑盒提取的植物基因組DNA可適用于各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建等分子生物學(xué)下游實(shí)驗(yàn)。[詳細(xì)]
2018-05-24 10:37
其它
質(zhì)粒DNA的分離、純化和鑒定概述
質(zhì)粒DNA的分離、純化和鑒定概述[詳細(xì)]
2009-03-31 00:00
其它
糞便基因組提取試劑盒說明書
糞便基因組提取試劑盒說明書[詳細(xì)]
2016-05-25 00:00
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