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細(xì)菌基因組DNA純化試劑盒

本文由 深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司 整理匯編

2024-09-29 11:00 848閱讀次數(shù)

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本公司新推出的全新細(xì)菌基因組純化試劑盒,操作簡便,純化量大,可純化革蘭氏陽性和陰性菌的基因組DNA。細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒使用說明本試劑盒可用于革蘭氏陰性和陽性菌的基因組DNA提取,由細(xì)菌重懸液、裂解液、蛋白沉淀液以及DNA溶解液組成??蓮?-5ml菌液中提取基因組DNA。整個(gè)提取過程不超過45分鐘。提取過程包括:1菌液離心,重懸。2裂解菌體,釋放基因組DNA。3鹽析沉淀蛋白,分離DNA。4異丙醇沉淀脫鹽并濃縮。570%乙醇清洗,晾干并用DNA溶解液溶解。本試劑盒采用復(fù)合裂解液,其中含有YZDNA酶的成分,在加熱(65°C)狀態(tài)下,可保證完整的細(xì)菌基因組DNA的充分裂解釋放,本試劑盒即可提取異丙醇沉淀時(shí),罕見渾濁的蛋白質(zhì)雜質(zhì)的共沉淀。提取的基因組可用于PCR擴(kuò)增、內(nèi)切酶消化以及膜雜交等。一、試劑盒組成(本試劑盒提供的組份,至少可提取100份1-5ml菌液基因組DNA的純化,每種組份均有足夠的富余量)1.復(fù)合裂解液:30ml1瓶。2.蛋白沉淀液:300ml1瓶。3.DNA溶解液:20ml1瓶。4.操作說明書一份。二、本試劑盒未提供,須用戶自備的試劑為:異丙醇,70%乙醇(國產(chǎn)分析純)。三、提取操作:1.菌液離心:取革蘭氏陰性菌菌液1-2ml;或者革蘭氏陽性菌菌液2-5ml,1000rpm離心1分鐘。2.加入細(xì)菌重懸液100ul,震蕩使菌體重懸。3.將復(fù)合裂解液置65°C水浴加熱,使結(jié)晶成分溶解,每個(gè)細(xì)菌重懸液中分別加入300ul的復(fù)合裂解液。4.混璇器震蕩混勻10秒,置65°C水浴中反應(yīng)10分鐘(革蘭氏陰性菌),20分鐘(革蘭氏陽性菌)。5.各管中加入300ul蛋白沉淀液。上下顛倒5-6次使兩者混勻。6.13000-16000×g,離心3-5分鐘。7.將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中(注意:由于有些細(xì)菌含有多糖或者脂蛋白成分,離心后會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞成分上浮的情況,此時(shí)取漂浮層下的均一透明液體),加入等體積異丙醇,此時(shí)可見透明的絮狀物,混勻后離心,同步驟5,吸去上清。8.離心管中加入200ul,70%的乙醇溶液,來回倒置,清洗管壁,離心同上。9.移去70%乙醇,倒置離心管于干凈的濾紙上,自然干燥10-15分鐘,加入DNA溶解液100ul。10.快速漩渦震蕩1-2秒,使DNA溶解液沖刷到所有沉淀的DNA。11.將純化的全血基因組置65C水浴1小時(shí),或4C過夜使DNA充分溶解(要求不嚴(yán)格的PCR試驗(yàn)可縮短時(shí)間或省去該步),輕輕彈動(dòng)管壁有助于溶解基因組DNA可直接進(jìn)行PCR等下一步操作。四、注意事項(xiàng):1.用戶可選擇使用RNaseA,使用方法為:在第3步完成后1.5ulRNaseA,混勻后,37C孵育15分鐘,冷卻至室溫。(RNaseA的配法:將RNaseA溶于TEbuffer中,濃度為4mg/ml,煮沸10分鐘,以去除DNase,分裝后-20C保存;也可購買配好的試劑使用。)2.革蘭氏陽性菌由于細(xì)胞壁的存在,純化的量較陰性菌要少一倍以上。3.提取得DNA樣本在70%乙醇中,存于-80C,可長期保存。五、儲(chǔ)存條件:本試劑盒在室溫條件下可保存一年。

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