1.樣品準(zhǔn)備

(1) 將1 g雞糞與20 mL提取液 *加入塑料離心管；

(2) 渦旋混合1 min；超聲提取 10 min，8000 rpm下離心5 min，收集上清液；

(3) 殘留物用15 mL、10 mL提取液重復(fù)提取兩次，合并三次提取液，水定容至50 mL，作為上樣液；

(4) 取25 mL上樣液(相當(dāng)于0.5 g樣品)，加入1 mL磷酸，8000 rpm下離心5 min，上清液在40 ℃下用減壓蒸餾蒸至小于15 mL，加水50 mL，混勻待凈化。

*提取液：Mcllvaine 緩沖液 */ 甲醇=1/1，pH=7.5 Mcllvaine

緩沖液（pH4.0）：稱(chēng)取磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）27.6 g、檸檬酸（C6H8O7·H2O）12.9 g、乙二胺四乙酸而鈉鹽37.2 g，用水用?溶解后稀釋并定容至1000 mL。

2.SPE柱凈化——ProElut PXA 500 mg/12 mL（Cat.#68307）上層 ProElut PLS 200 mg/6 mL（Cat.#68012）下層 將PXA與PLS用適配器連接（PXA在上層，PLS在下層），裝在固相萃取裝置上備用。

(1)活 化：依次加入10 mL甲醇，10 mL水，流出液棄去；

(2)上 樣：將待凈化液加入小柱，流出液棄去；

(3)淋 洗：加入5 mL水，流出液棄去；

(4)洗 脫：10 mL 1%乙酸甲醇溶液洗脫，收集洗脫液；

(5)重新溶解：將洗脫液在45 ℃下減壓蒸干，1 mL水溶解殘?jiān)?，上機(jī)分析。

分析條件 色譜柱：Spursil C18，150 mm×4.6 mm，5μm（Cat# 82001）

流 速：1.0mL/min

檢測(cè)器：UV 365 nm

柱 溫：30℃

進(jìn)樣量：20 μL

流動(dòng)相：A：乙腈 / 甲醇=1/1，B：0.01 moL/L 草酸水溶液， 梯度： 時(shí)間t 0 10 10.5 20 B％ 70 50 70 70 *本方法中，目標(biāo)化合物是由HPLC測(cè)定的，但這并不表明其他儀器不適合。當(dāng)使用者采用其他方式進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，同樣可以采用本方法進(jìn)行樣品前處理

適用于有機(jī)肥中土霉素、四環(huán)素、金霉素、QL霉素檢測(cè)。

1.土霉素 2.四環(huán)素 3.金霉素 4.QL霉素