一法 高效液相色譜（替代GB/T 22961-2008）

原理

試樣中土霉素、四環(huán)素、金霉素和多西環(huán)素的殘留經(jīng)檸檬酸緩沖溶液提取，固相萃取柱凈化，液相色譜熒光檢測器測定，外標法定量。

8.1 提取 取試料5 g（準確至±0.02 g），加檸檬酸緩沖液20 mL，渦旋震蕩2min，超聲10 min， 6000 r/min離心10 min，取上清液，殘渣加檸檬酸緩沖液10 mL，重復(fù)提取兩次，合并三次上清液，待凈化。

關(guān)鍵詞：GB 31656.11-2021與GB/T 22961-2008在提取過程中的區(qū)別

要點：

• 與GB/T 22961-2008相比，GB 31656.11-2021的提取次數(shù)為3次，同時去掉了正己烷脫脂的步驟。

8.2 凈化 固相萃取柱依次用甲醇10 mL、水10 mL、檸檬酸緩沖液5 mL活化，取備用液過柱，用甲醇溶液10 mL、水10 mL淋洗，抽干，加甲醇10 mL，洗脫，收集洗脫液，40℃氮氣吹干， 殘渣加磷酸二氫鉀溶液1.0 mL使溶解，超聲1min，0.22 μm水相濾膜濾過，供高效液相色譜測定。

關(guān)鍵詞：GB 31656.11-2021與GB/T 22961-2008在凈化過程中的區(qū)別

要點：

• 在凈化步驟方面，GB 31656.11-2021的SPE凈化的步驟更簡單了，GB/T 22961-2008是需要用兩種不同類型的SPE柱，先后進行凈化，新的標準去掉了陽離子交換凈化步驟。只保留了HLB的凈化。

• 另外，在HLB的洗脫液也有差異，在GB/T 22961是用乙酸乙酯做洗脫液，新國標的洗脫液直接用甲醇。

 二法 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

原理

試樣中土霉素、四環(huán)素、金霉素和多西環(huán)素的殘留用 Na2EDTA-Mcllvaine 緩沖溶液提取，醋酸鉛沉淀，正己烷除脂，固相萃取柱凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定，外標法定量。

18.1 提取 取試料2 g（準確至±0.02 g），加Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液6 mL、醋酸鉛溶液2 mL， 渦旋混合1 min，超聲10 min，4℃以8000 r/min離心5 min，取上清液。殘渣分別用Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液5 mL，重復(fù)提取兩次，合并3次提取液。

18.2 凈化 向上述提取液加正己烷10 mL，渦旋1 min，8000 r/min離心5min，取下層溶液，加Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液至20.0 mL，備用（鰻鱺、蟹和海參樣品，需按照上述方法凈化兩次）取固相萃取柱依次用甲醇、水各5 mL活化，取備用液10.0 mL過柱，控制流速約1 mL/min， 用水、甲醇溶液各5 mL淋洗萃取柱，棄去流出液，減壓抽干5 min。加甲醇-乙酸乙酯5 mL洗脫，收集洗脫液，40 ℃氮氣吹至近干，加甲酸溶液（0.1%）-乙腈1.0 mL溶解殘渣，渦旋混勻, 濾過，為防藥物變性，需及時供液相色譜-質(zhì)譜儀測定。