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細胞培養(yǎng)常見的問題和解決方法
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本文由 上海索寶生物科技有限公司 整理匯編
2018-09-02 10:00 1429閱讀次數(shù)
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細胞培養(yǎng)常見問題及回答如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基?培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長??傊?,MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始,各種目的無血清培養(yǎng)**AIMV(12005)培養(yǎng)基(SFM)。L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有Z終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩(wěn)定?GlutaMAX-I二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I二肽溶液有Z小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎完全降解。什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞?用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200~2000個/毫升,在0.1毫升的細胞懸液中加入0.1毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻,數(shù)分鐘后,用血球計數(shù)板計數(shù)細胞。活細胞排斥臺盼蘭,因而染成藍色的細胞是死細胞。如何消除組織培養(yǎng)的污染?當重要的培養(yǎng)污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。1.在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞,稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。2.分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0mg/ml。3.每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。4.確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2~3代。5.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。6.重復步驟4。7.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4~6代,確定污染是否以已被消除。培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。目錄上說,Hank's平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么?Hank's平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles(2.2g/L)中比在Hanks(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagles液,。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,用Hanks液就可以了。二價離子YZ胰蛋白酶活性嗎?使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么?二價離子的確YZ胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持YZ胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前,用EDTA清洗細胞,以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。我SYSF900II時,細胞生長良好,但是我的蛋白產(chǎn)物不如使用Graces液和10%胎牛血清時效果好。如果目的蛋白是一個后期蛋白,它將與蛋白酶一起表達,這些蛋白酶將會作用于目的蛋白。在加有血清的培養(yǎng)基中,這些蛋白酶將作用到血清中的蛋白,從而使目的蛋白產(chǎn)品保持完好。在無血清配方中,蛋白酶作用的**底物是你的目的蛋白。為了避免這一問題,加入一些蛋白酶YZ劑或加入少量的血清(少于1%),讓血清給蛋白酶提供作用底物。20°C下配制的緩沖液,在較高或較低的溫度下PH值會改變嗎?對于普通使用的緩沖液,PH值隨溫度變化而變化。下表列出溫度改變10℃時,PH值的變化情況:例如20℃下配制PH7.4Tris緩沖液,40℃時PH值為7.4-(2x0.310)=6.78緩沖系統(tǒng)pKa/20℃[Delta]pKa/10℃Mes6.15-0.110Ada6.60-0.110Pipes6.80-0.08ces6.90-0.200Bes7.15-0.160Mops7.20-0.013Tes7.50-0.200Hepes7.55-0.140Tricine8.15-0.210Tris8.30-0.310Bicine8.35-0.180Glycylglycine8.40-0.280室溫下(25)配制的Tris-HCl溶液,在37℃使用時PH值是多少?緩沖液的PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mMTris-HC溶液在4℃,25℃,37℃時,不同的PH值。4°C25°C37°C8.17.57.28.27.67.38.37.77.48.47.87.58.57.97.68.68.07.78.78.17.88.88.27.98.98.38.09.08.48.19.18.58.29.28.68.39.38.78.49.48.88.5昆蟲細胞培養(yǎng)的Z適PH值和滲透壓是多少?生長培養(yǎng)基的PH值對細胞的增殖和病毒或重組蛋白的生產(chǎn)均會產(chǎn)生影響。對于大部分鱗翅類昆蟲細胞系,在PH值6.0~6.4范圍的大部分應用效果良好。培養(yǎng)鱗翅類昆蟲細胞系時,培養(yǎng)基的Z適滲透壓是345-380mOsm/kg.。為保證可靠和持久的細胞培養(yǎng)方式,減少技術問題,保持PH值和滲透壓在以上所列的范圍之內(nèi)。HighFive細胞有任何其它名稱嗎?HighFive細胞也被稱為Trichoplasiani5B1-4和BTI-TN-5B1-4。PFHM-II和HYBRIDOMA-SFM之間有什么差別PFHM-II(Protein-freeHybridomaMedium)是不包含有蛋白質(zhì)的單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。如果作為雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基使用,PFHM-II可能需要補充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM既是雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基,也是單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。它包含低水平的蛋白質(zhì)。在HighFive無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度是多少?HighFive無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度:0.025g/LTween-80,1.0g/LPluronicPoly-all。HighFive細胞用多大的密度凍存?3.0x10E6cells/ml。在我的果蠅培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)形成白色沉淀,加熱后溶解。它是什么?對我的細胞有害嗎?可能是谷氨酰胺沉淀,但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的濃度比在RPMI1640中高25倍,而且比谷氨酰胺更加難以溶解。沉淀也可能是不止一種成分的復合物。它可能是由于貯存在局部溫度較低的地方引起。只要沉淀在培養(yǎng)條件下可以溶解,對實驗不會有不利的影響。如何從T25瓶中轉(zhuǎn)移sf9細胞?能用胰蛋白酶消化嗎?我們QL推薦使用脫落細胞的方法,因為這項技術破壞性Z小,生活力Z高。正如手冊上所顯示,通過使用巴斯德吸液管,讓細胞上培養(yǎng)基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶。只有在必要的情況下,才使用胰酶消化細胞。胰酶消化一個T25瓶的sf9細胞:1.去除培養(yǎng)基。2.用2ml1xPBS(足以覆蓋細胞表面)洗滌細胞,去除PBS。3.加入2ml1x胰酶EDTA(恰好覆蓋細胞表面)。4.37℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動。5.向細胞中加入2ml細胞培養(yǎng)液,移入錐形管,用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁,移入同一錐形管中。(培養(yǎng)基中的FBS終止了胰酶的活性。)6.離心(1100rpm)沉淀細胞。去除培養(yǎng)基。7.用新的培養(yǎng)基重新懸浮細胞。傳代。在Sf9,Sf21,和highFive細胞懸浮培養(yǎng)時,肝素的使用量是多少?為了防止懸浮培養(yǎng)細胞聚集的形成,使用肝素濃度為10單位/毫升細胞懸液。在重新凍存sf9細胞前,它可以傳多少代?隨著傳代的次數(shù)的增加,它的感染能力會降低嗎?通常情況當細胞經(jīng)過30次傳代后,應該返回凍存。無論什么時候計數(shù)時,都應該檢查細胞活力。如果超過95%的細胞保持有活力和在大約30小時左右加倍,細胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降,它們的感染力將不在是有效的。Techtips●貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基,可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時,碳酸氫納導致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口,在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘,來校正溶液的pH值(確定松開瓶口以保證氣體交換)?!袢绻毎囵B(yǎng)基偶然被凍,您應該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生,培養(yǎng)基可以正常使用,如果出現(xiàn)沉淀,只能丟棄這些培養(yǎng)基?!衲檎遗囵B(yǎng)基成分表嗎?您可以在GIBCO目錄**章的后面或在我們網(wǎng)站的技術資源部分找到。●當在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時,降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下,抗生素不被滅活,可能對于細胞達到毒性水平?!褚坏┠谛迈r培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。●總之,大部分添加物和試劑Z多可以凍融3次,如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,將會影響它的性能?!裨谶M行傳代培養(yǎng)時,我們強烈推薦進行臺盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個簡單的稀釋(1∶4或1∶2)進行傳代,不進行活性檢測,您可能接種比你認為的低的多的濃度的細胞,這常??赡軐е律L緩慢或培養(yǎng)物根本不生長?!裨谌芙獾囊恢軆?nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在4℃就可能開始降解,如果在室溫下放置超過30分鐘,就會變得不穩(wěn)定?!馟IBCO產(chǎn)品的貯存期立足于實時穩(wěn)定性研究結果。產(chǎn)品說明在超過指定的貯存期的一段時間內(nèi),產(chǎn)品仍然在可接受的范圍內(nèi),但是由于在超過指定的效期后,產(chǎn)品的性能和穩(wěn)定性沒有檢測,我們不推薦使用過了效期的產(chǎn)品。
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細胞培養(yǎng)常見的問題和解決方法
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細胞培養(yǎng)常見問題及回答如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基?培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長??傊?,MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始,各種目的無血清培養(yǎng)**AIMV(12005)培養(yǎng)基(SFM)。L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有Z終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩(wěn)定?GlutaMAX-I二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I二肽溶液有Z小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎完全降解。什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞?用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200~2000個/毫升,在0.1毫升的細胞懸液中加入0.1毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻,數(shù)分鐘后,用血球計數(shù)板計數(shù)細胞?;罴毎懦馀_盼蘭,因而染成藍色的細胞是死細胞。如何消除組織培養(yǎng)的污染?當重要的培養(yǎng)污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。1.在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞,稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。2.分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0mg/ml。3.每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。4.確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2~3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2~3代。5.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。6.重復步驟4。7.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4~6代,確定污染是否以已被消除。培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。目錄上說,Hank's平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么?Hank's平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles(2.2g/L)中比在Hanks(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagles液,。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,用Hanks液就可以了。二價離子YZ胰蛋白酶活性嗎?使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么?二價離子的確YZ胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,以便保持YZ胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前,用EDTA清洗細胞,以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。我SYSF900II時,細胞生長良好,但是我的蛋白產(chǎn)物不如使用Graces液和10%胎牛血清時效果好。如果目的蛋白是一個后期蛋白,它將與蛋白酶一起表達,這些蛋白酶將會作用于目的蛋白。在加有血清的培養(yǎng)基中,這些蛋白酶將作用到血清中的蛋白,從而使目的蛋白產(chǎn)品保持完好。在無血清配方中,蛋白酶作用的**底物是你的目的蛋白。為了避免這一問題,加入一些蛋白酶YZ劑或加入少量的血清(少于1%),讓血清給蛋白酶提供作用底物。20°C下配制的緩沖液,在較高或較低的溫度下PH值會改變嗎?對于普通使用的緩沖液,PH值隨溫度變化而變化。下表列出溫度改變10℃時,PH值的變化情況:例如20℃下配制PH7.4Tris緩沖液,40℃時PH值為7.4-(2x0.310)=6.78緩沖系統(tǒng)pKa/20℃[Delta]pKa/10℃Mes6.15-0.110Ada6.60-0.110Pipes6.80-0.08ces6.90-0.200Bes7.15-0.160Mops7.20-0.013Tes7.50-0.200Hepes7.55-0.140Tricine8.15-0.210Tris8.30-0.310Bicine8.35-0.180Glycylglycine8.40-0.280室溫下(25)配制的Tris-HCl溶液,在37℃使用時PH值是多少?緩沖液的PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mMTris-HC溶液在4℃,25℃,37℃時,不同的PH值。4°C25°C37°C8.17.57.28.27.67.38.37.77.48.47.87.58.57.97.68.68.07.78.78.17.88.88.27.98.98.38.09.08.48.19.18.58.29.28.68.39.38.78.49.48.88.5昆蟲細胞培養(yǎng)的Z適PH值和滲透壓是多少?生長培養(yǎng)基的PH值對細胞的增殖和病毒或重組蛋白的生產(chǎn)均會產(chǎn)生影響。對于大部分鱗翅類昆蟲細胞系,在PH值6.0~6.4范圍的大部分應用效果良好。培養(yǎng)鱗翅類昆蟲細胞系時,培養(yǎng)基的Z適滲透壓是345-380mOsm/kg.。為保證可靠和持久的細胞培養(yǎng)方式,減少技術問題,保持PH值和滲透壓在以上所列的范圍之內(nèi)。HighFive細胞有任何其它名稱嗎?HighFive細胞也被稱為Trichoplasiani5B1-4和BTI-TN-5B1-4。PFHM-II和HYBRIDOMA-SFM之間有什么差別PFHM-II(Protein-freeHybridomaMedium)是不包含有蛋白質(zhì)的單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。如果作為雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基使用,PFHM-II可能需要補充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM既是雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基,也是單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。它包含低水平的蛋白質(zhì)。在HighFive無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度是多少?HighFive無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度:0.025g/LTween-80,1.0g/LPluronicPoly-all。HighFive細胞用多大的密度凍存?3.0x10E6cells/ml。在我的果蠅培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)形成白色沉淀,加熱后溶解。它是什么?對我的細胞有害嗎?可能是谷氨酰胺沉淀,但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的濃度比在RPMI1640中高25倍,而且比谷氨酰胺更加難以溶解。沉淀也可能是不止一種成分的復合物。它可能是由于貯存在局部溫度較低的地方引起。只要沉淀在培養(yǎng)條件下可以溶解,對實驗不會有不利的影響。如何從T25瓶中轉(zhuǎn)移sf9細胞?能用胰蛋白酶消化嗎?我們QL推薦使用脫落細胞的方法,因為這項技術破壞性Z小,生活力Z高。正如手冊上所顯示,通過使用巴斯德吸液管,讓細胞上培養(yǎng)基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶。只有在必要的情況下,才使用胰酶消化細胞。胰酶消化一個T25瓶的sf9細胞:1.去除培養(yǎng)基。2.用2ml1xPBS(足以覆蓋細胞表面)洗滌細胞,去除PBS。3.加入2ml1x胰酶EDTA(恰好覆蓋細胞表面)。4.37℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動。5.向細胞中加入2ml細胞培養(yǎng)液,移入錐形管,用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁,移入同一錐形管中。(培養(yǎng)基中的FBS終止了胰酶的活性。)6.離心(1100rpm)沉淀細胞。去除培養(yǎng)基。7.用新的培養(yǎng)基重新懸浮細胞。傳代。在Sf9,Sf21,和highFive細胞懸浮培養(yǎng)時,肝素的使用量是多少?為了防止懸浮培養(yǎng)細胞聚集的形成,使用肝素濃度為10單位/毫升細胞懸液。在重新凍存sf9細胞前,它可以傳多少代?隨著傳代的次數(shù)的增加,它的感染能力會降低嗎?通常情況當細胞經(jīng)過30次傳代后,應該返回凍存。無論什么時候計數(shù)時,都應該檢查細胞活力。如果超過95%的細胞保持有活力和在大約30小時左右加倍,細胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降,它們的感染力將不在是有效的。Techtips●貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基,可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時,碳酸氫納導致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口,在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘,來校正溶液的pH值(確定松開瓶口以保證氣體交換)?!袢绻毎囵B(yǎng)基偶然被凍,您應該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生,培養(yǎng)基可以正常使用,如果出現(xiàn)沉淀,只能丟棄這些培養(yǎng)基?!衲檎遗囵B(yǎng)基成分表嗎?您可以在GIBCO目錄**章的后面或在我們網(wǎng)站的技術資源部分找到?!癞斣跓o血清培養(yǎng)基中添加抗生素時,降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下,抗生素不被滅活,可能對于細胞達到毒性水平?!褚坏┠谛迈r培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解?!窨傊?,大部分添加物和試劑Z多可以凍融3次,如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,將會影響它的性能。●在進行傳代培養(yǎng)時,我們強烈推薦進行臺盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個簡單的稀釋(1∶4或1∶2)進行傳代,不進行活性檢測,您可能接種比你認為的低的多的濃度的細胞,這常??赡軐е律L緩慢或培養(yǎng)物根本不生長?!裨谌芙獾囊恢軆?nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在4℃就可能開始降解,如果在室溫下放置超過30分鐘,就會變得不穩(wěn)定?!馟IBCO產(chǎn)品的貯存期立足于實時穩(wěn)定性研究結果。產(chǎn)品說明在超過指定的貯存期的一段時間內(nèi),產(chǎn)品仍然在可接受的范圍內(nèi),但是由于在超過指定的效期后,產(chǎn)品的性能和穩(wěn)定性沒有檢測,我們不推薦使用過了效期的產(chǎn)品。[詳細]
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2018-09-02 10:00
產(chǎn)品樣冊
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氣相色譜儀/液相色譜儀常見使用問題解決方法
- 氣相色譜儀/液相色譜儀常見使用問題解決方法[詳細]
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2011-12-16 00:00
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細胞培養(yǎng)問題
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2018-09-02 10:00
產(chǎn)品樣冊
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氮氣發(fā)生器常出現(xiàn)的問題和解決方法
- 氮氣發(fā)生器常出現(xiàn)的故障和解決方法氮氣發(fā)生器是一套能提取氮氣的設備,它主要應用領域為:航空航天、核電核能、食品醫(yī)藥、石油化工、電子工業(yè)、材料工業(yè)科學實驗等領域。它利用恒定電位電解法,采用微孔膜(例如石棉膜)作為兩電極的分隔板,多孔氣體擴散型氧電極為陰極,鎳網(wǎng)為陽極,且電極安裝是采用硬支撐結構。1,氮氣發(fā)生器運行中有響聲解決措施:用14的扳手對電磁閥上螺母適當調(diào)整松緊度,不要太緊;若不行需拆開電磁閥對內(nèi)部進行清洗(響主要是因電磁閥內(nèi)臟有雜質(zhì)),若清洗完還不行,須更換新的。2.開機不工作顯示板無顯示解決措施:檢查電源是否有電;檢查保險是否燒掉,保險位于儀器后面電線插座內(nèi)(有保險圖案),用小“一”字改錐或尖的金屬工具向外撬即可取出,保險為;看儀器內(nèi)電路板指示燈是否亮,若不亮,檢查電路板上保險是否燒掉,若燒掉須換保險3A,換后仍不顯示,須換電源等。3.氮氣發(fā)生器開機即有氣體輸出解決措施:當剛開機壓力上升時須按一下前面的紅色延時開關,然后輸出壓力從輸出放掉等待10分鐘后方可使用上海么能分析儀器有限公司專業(yè)生產(chǎn)氫氣發(fā)生器、氮氣發(fā)生器、空氣發(fā)生器、氫空一體機、氮氫空一體機[詳細]
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2018-08-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細胞培養(yǎng)常見問題及其解決方法
- 細胞培養(yǎng)常見問題及其解決1.如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基?培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長??傊?,MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始。2.何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活。4可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。5何謂FBS,FCS,CS,HS?FBS(fetalbovineserum)和FCS(fetalcalfserum)是相同的意思,兩者都是指胎牛血清,F(xiàn)CS乃錯誤的使用字眼,請不要再使用。CS(calfserum)則是指小牛血清。HS(horseserum)則是指馬血清。6培養(yǎng)細胞時應使用5%或10%CO2?或根本沒有影響?一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng),而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時,細胞培養(yǎng)時應使用10%CO2;當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時,則應使用5%CO2培養(yǎng)細胞。7.Hank's平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么?Hank's平衡鹽溶液(HBS)和Earle's平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles(2.2g/L)中比在Hanks(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagles液,。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,用Hanks液就可以了。8.細胞之接種密度為何?依照細胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。更多常見問題及解決方法請見附件.........[詳細]
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2024-09-29 22:57
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2012-11-01 00:00
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2024-09-28 16:01
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固相萃取常見的問題
- 下面是關于固相萃取儀的常見問題:
一、固相萃取儀采用哪種上樣方式Z適合?
目前市面上常用正壓上樣和負壓上樣兩種方式萃取,但負壓上樣因不能有效控制流速而造成回收率不穩(wěn)定和儀器重復性差等原因,所以主流廠家一般采用正壓上樣方式,全自動固相萃取儀采用高精度注射泵正壓上樣洗脫樣品,更加極ng確地控制液體流速,從而顯著提高了儀器重復性并確保了樣品回收率。
二、全自動固相萃取樣品處理速度有什么要求?
單個樣品的固相萃取裝置循環(huán)一般為20分鐘左右,一般廠家的固相萃取儀都差不多。所以,一般來說,儀器同步處理的樣品數(shù)越多,處理速度就越快。全自動固相萃取采用6通道+3種模式靈活萃取,Z*程度提高了樣品處理速度。
三、全自動固相萃取儀能否有效避免萃取過程中流路的堵塞?
自動固相萃取儀應用過程中常遇到的問題:流路堵塞造成儀器故障。
在發(fā)生柱堵塞時,大部分固相萃取儀不能自動檢測,使樣品和溶劑泄露,造成嚴重損失和交叉污染。全自動固相萃取儀流路內(nèi)置高靈敏壓力傳感器,當流路壓力>0.6Mpa時,系統(tǒng)會自動報警,從而有效保護裝置。
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2018-03-05 16:36
安裝說明
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氣體報警器的應用中的問題和解決方法
- 氣體報警器就是氣體泄露檢測報警儀器。當工業(yè)環(huán)境中可燃或有毒氣體泄露時,當氣體報警器檢測到氣體濃度達到爆炸或中毒報警器設置的臨界點時,報警器就會發(fā)出報警信號,以提醒工作采取安全措施,并驅(qū)動排風、切斷、噴淋系統(tǒng),防止發(fā)生爆炸、火災、中毒事故,從而保障安全生產(chǎn)。[詳細]
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2024-09-28 01:18
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- 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 問題分析 解決方法[詳細]
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2012-12-13 00:00
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如何解決細胞培養(yǎng)中的污染問題
- 如何解決細胞培養(yǎng)中的污染問題[詳細]
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TURCK磁性位移傳感器常見的問題
- TURCK磁性位移傳感器常見的問題,TURCK磁性位移傳感器又稱為線性傳感器,是一種屬于金屬感應的線性器件,傳感器的作用是把各種被測物理量轉(zhuǎn)換為電量。在生產(chǎn)過程中,位移的測量一般分為測量實物尺寸和機械位移兩種。按被測變量變換的形式不同,位移傳感器可分為模擬式和數(shù)字式兩種。模擬式又可分為物性型和結構型兩種。常用TURCK磁性位移傳感器以模擬式結構型居多,包括電位器式位移傳感器、電感式位移傳感器、自整角機、電容式位移傳感器、電渦流式位移傳感器、霍爾式位移傳感器等。數(shù)字式位移傳感器的一個重要優(yōu)點是便于將信號直接送入計算機系統(tǒng)。這種傳感器發(fā)展迅速,應用日益廣泛。TURCK磁性位移傳感器常見問題直線的工作原理是跟滑動變阻器一樣的,它作為分壓器使用的,它是以相對的輸出電壓來呈現(xiàn)出所測量位置的實際上的位置。對這個裝置的工作有下面幾點要求:1、如果電子尺已經(jīng)使用很長時間了,而且密封已經(jīng)老化,同時夾雜著很多雜質(zhì),而且水混合物和油會嚴重影響電刷的接觸電阻的,這樣會使顯示的數(shù)字不停地跳動。這個時候可以說直線位移傳感器的電子尺已經(jīng)損壞了,需要更換。2、若電源的容量很小,就會出現(xiàn)很多情況的,所以,供電電源需要有充分的容量。那么,容量不足,就會造成如下的情況:熔膠的運動會使合模電子尺的顯示變換,有波動,或者合模的運動會使射膠電子尺的顯示波動,造成測量結果誤差很大。如果電磁閥的驅(qū)動電源于圖爾克直線位移傳感器供電電源同時在一起的時候,更容易出現(xiàn)以上的情況,情況嚴重時用萬用表的電壓檔甚至可以測量到電壓的有關波動。如果情況不是因為高頻干擾、靜電干擾或者是中性不夠好的造成的,那么就有可能是電源的功率太小造成的。3、調(diào)頻干擾和靜電干擾都有可能讓直線位移傳感器的電子尺的顯示數(shù)字跳動的。電子尺的信號線與設備的強電線路要分開線槽。電子尺必須要強制性地使用接地支架,而且同時讓電子尺的外殼跟地面良好地接觸。信號線需要使用屏蔽線,而且電箱的一段應該跟屏蔽線接地的。如果有高頻干擾的時候,通常使用萬用表的電壓測量就會顯示正常,但是顯示數(shù)字就是會跳動不停的;而出現(xiàn)靜電干擾時,出現(xiàn)的情況也是跟高頻干擾一樣的。要證明看是否是靜電干擾時,可以先使用一段電源線把電子尺的封蓋螺絲跟機器上的某一些的金屬短接起來就可以了,只要一短接起來,靜電干擾就會馬上消除掉的。但是如果要消除掉高頻干擾就很難用上面的方法了,變頻節(jié)電器和機器手都經(jīng)常出現(xiàn)高頻干擾的,所以可以試一下用停止高頻節(jié)電器或者機械手的方法來驗證是不是高頻干擾的。TURCK磁性位移傳感器常見的故障4、如果圖爾克直線位移傳感器的電子尺在工作的過程當中,在某一點的顯示數(shù)據(jù)有規(guī)律地跳動,或者是沒有顯示數(shù)據(jù)的時候,出現(xiàn)這種情況就需要檢查連接線絕緣是不是出現(xiàn)破損的現(xiàn)象,并且跟機器的外殼很有規(guī)律地接觸而導致的對地短路。5、供電的電壓一定要穩(wěn)定,工業(yè)的電壓需要符合±0.1[%]的穩(wěn)定性,例如,基準電壓是10V的話,就可以允許有±0.01V的波動變化,如果不是的話,就會引起顯示的圈套波動這樣的情況。但是如果這個時候的顯示波動的幅度沒有超過波動電壓的波動的幅度的話,那么電子尺就是正常的了。6、安裝直線位移傳感器的對中性需要很好,但是平行度可以允許有±0.5mm的誤差,角度可以允許有±12°的誤差。但是如果平行度誤差和角度誤差都是偏大的話,這樣會出現(xiàn)顯示數(shù)字跳動的情況。那么出現(xiàn)這樣的情況的時候,必須要對平行度和角度進行調(diào)整了。7、在連接的過程當中,一定要多加注意,電子尺的三條線是不可以接錯的,電源線和輸出線是不可以調(diào)換的。如果上面的線接錯的話,就會出現(xiàn)線性誤差很大的情況,要控制的話是很難的,控制的精度也會變得很差,而顯示很容易出現(xiàn)跳動的現(xiàn)象等等。TURCK磁性位移傳感器信號處理辨向原理在實際應用中,位移具有兩個方向,即選定一個方向后,位移有正負之分,因此用一個光電元件測定莫爾條紋信號確定不了位移方向。為了辨向,需要有π/2相位差的兩個莫爾條紋信號。如圖2,在相距1/4條紋間距的位置上安放兩個光電元件,得到兩個相位差π/2的電信號u01和u02,經(jīng)過整形后得到兩個方波信號u01’和u02’。光柵正向移動時u01超前u0290度,反向移動時u02超前u0190度,故通過電路辨相可確定光柵運動方向。細分技術隨著對測量精度要求的提高,以柵距為單位已不能滿足要求,需要采取適當?shù)拇胧δ獱枟l紋進行細分。所謂細分就是在莫爾條紋信號變化一個周期內(nèi),發(fā)出若干個脈沖,以減少脈沖當量。如一個周期內(nèi)發(fā)出n個脈沖,則可使測量精度提高n備,而每個脈沖相當于原來柵距的1/n。由于細分后計數(shù)脈沖頻率提高了n倍,因此也稱n倍頻。通常用的有兩種細分方法:其一:直接細分。在相差1/4莫爾條紋間距的位置上安放兩個光電元件,可得到兩個相位差90o的電信號,用反相器反相后就得到四個依次相差90o的交流信號。同樣,在兩莫爾條紋間放置四個依次相距1/4條紋間距的光電元件,也可獲得四個相位差90o的交流信號,實現(xiàn)四倍頻細分。其二:電路細分。TURCK磁性位移傳感器常見的問題[詳細]
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