本文由 上海研生實業(yè)有限公司 整理匯編

2024-10-03 20:15 1477閱讀次數(shù)

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• 污染是細胞培養(yǎng)的大敵常見的污染類型

  污染是細胞培養(yǎng)的大敵常見的污染類型細胞培養(yǎng)過程中的污染不僅僅指微生物，而且還包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質(zhì)，包括生物和化學(xué)物質(zhì)。1、細菌污染細菌污染是實驗室細胞培養(yǎng)中常見的污染，即使在細胞培養(yǎng)液中加入了KJ素，也可能因為操作不慎而引起污染。Z常見的有革蘭氏陽性菌，如枯草桿菌以及大腸桿菌、假單胞菌等革蘭氏陰性菌，其中又以白色葡萄球菌較常見。培養(yǎng)細胞受細菌污染后，會出現(xiàn)培養(yǎng)液變混濁，pH改變。污染后細胞發(fā)生病理改變，胞內(nèi)顆粒增多、增粗，Z后變圓脫落死亡。2、支原體污染支原體是介于細菌與病毒之間能獨立生活的Z小微生物，Z小直徑0.2μm，一般過濾CJ無法去除它，光鏡下難以看清它的形態(tài)結(jié)構(gòu)。開始不易發(fā)現(xiàn)，能在偏堿條件下生存，對青霉素有抗藥性。多吸附于細胞表面或散在于細胞之間。培養(yǎng)細胞受支原體污染后，部分敏感細胞可見細胞生長增殖變慢，部分細胞變圓，從瓶壁脫落。但多數(shù)細胞污染后無明顯變化，或略有變化，若不及時處理，還會產(chǎn)生交叉污染。3、病毒污染組織細胞培養(yǎng)過程中，如果沒有除去潛在的病毒，就會產(chǎn)生病毒污染。目前，從原代猴腎細胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng)，但生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，潛在病毒是細胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。4、真菌污染真菌污染是細胞培養(yǎng)過程中Z常見的一種，Z常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。培養(yǎng)細胞受真菌污染后，可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點，有的散在生長，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁;倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲縱橫交錯在細胞之間或培養(yǎng)基中，有的呈鏈狀排列。真菌污染后，細胞生長變慢，但Z后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細胞脫落死亡。5、非同種細胞污染由于細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開，往往會使一種細胞被另一種細胞污染。目前，世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染，致使許多實驗宣告無效。非細胞培養(yǎng)物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生，大多是由于細胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不徹底而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致。[詳細]

  2024-10-03 20:15

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• 細胞培養(yǎng)的污染類型

  細胞培養(yǎng)的污染類型[詳細]

  2024-09-22 21:11

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• 細胞培養(yǎng)減少污染的方法

  細胞培養(yǎng)減少污染的方法●很多實驗者都不bother自己洗手，酒精一噴就去實驗了，這極端錯誤。個人經(jīng)驗：你仔細洗手比噴酒精效果還好。**的是肥皂/香皂仔仔細細的洗手，一直到手腕，指甲縫都要洗。洗兩遍是一個不錯的選擇。然后手上噴酒精。●有人穿半截袖白大褂去做實驗，白大褂袖口要長，**是袖口扎緊的那種，如果不能的話，把袖口窩向手臂。裸露的手腕部分一定也要噴酒精。戴上手套后手請避免接觸工作臺外面，如果不得已接觸，那再噴酒精。寧可手套酒精味多一些?！衲门囵B(yǎng)瓶和培養(yǎng)液時候請托下面拿，切忌不要拿瓶頸部位。●每天實驗開始時候，超凈臺/實驗間照20分鐘紫外是不錯的選擇。●有一點要注意的是，超凈臺里面的東西一定要盡量少放。放的越多越容易污染?！癖M量避免操作時候說話，尤其是嚴禁細胞房打鬧說笑?！衩刻煊^察細胞狀態(tài)，不要總想著save，而是發(fā)現(xiàn)細胞不對勁（比如生長緩慢）就立即扔掉。有些（比如支原體）污染，鏡檢是看不到的，但是細胞的生長異常。所以如果細胞生長異常，那么請扔掉，同時由于支原體空氣傳播，請檢查自己的培養(yǎng)液和培養(yǎng)箱是不是污染。[詳細]

  2018-09-02 10:00

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• 如何解決細胞培養(yǎng)中的污染問題

  如何解決細胞培養(yǎng)中的污染問題[詳細]

  2013-10-31 00:00

  課件

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• Whitepaper_如何避免細胞培養(yǎng)過程中的污染

  Whitepaper_如何避免細胞培養(yǎng)過程中的污染[詳細]

  2024-09-28 21:39

  應(yīng)用文章

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• 細胞培養(yǎng)常見的問題和解決方法

  細胞培養(yǎng)常見問題及回答如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊?，MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始，各種目的無血清培養(yǎng)**AIMV（12005）培養(yǎng)基（SFM）。L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有Z終定論。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I？這個二肽有多穩(wěn)定？GlutaMAX-I二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有Z小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞？用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200～2000個/毫升，在0.1毫升的細胞懸液中加入0.1毫升的0.4％的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，數(shù)分鐘后，用血球計數(shù)板計數(shù)細胞。活細胞排斥臺盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。如何消除組織培養(yǎng)的污染？當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。1.在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞，稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。2.分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0mg/ml。3.每天觀測細胞毒性指標，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。4.確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2～3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2～3代。5.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。6.重復(fù)步驟4。7.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4～6代，確定污染是否以已被消除。培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。目錄上說，Hank's平衡鹽溶液（HBS）要在空氣中使用，不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么？Hank's平衡鹽溶液（HBS）和Earle's平衡鹽溶液（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別？HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles（2.2g/L）中比在Hanks（0.35g/L）中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。二價離子YZ胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么？二價離子的確YZ胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持YZ胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用EDTA清洗細胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。我SYSF900II時，細胞生長良好，但是我的蛋白產(chǎn)物不如使用Graces液和10%胎牛血清時效果好。如果目的蛋白是一個后期蛋白，它將與蛋白酶一起表達，這些蛋白酶將會作用于目的蛋白。在加有血清的培養(yǎng)基中，這些蛋白酶將作用到血清中的蛋白，從而使目的蛋白產(chǎn)品保持完好。在無血清配方中，蛋白酶作用的**底物是你的目的蛋白。為了避免這一問題，加入一些蛋白酶YZ劑或加入少量的血清（少于1％），讓血清給蛋白酶提供作用底物。20°C下配制的緩沖液，在較高或較低的溫度下PH值會改變嗎？對于普通使用的緩沖液，PH值隨溫度變化而變化。下表列出溫度改變10℃時，PH值的變化情況：例如20℃下配制PH7.4Tris緩沖液,40℃時PH值為7.4-（2x0.310）＝6.78緩沖系統(tǒng)pKa/20℃[Delta]pKa/10℃Mes6.15-0.110Ada6.60-0.110Pipes6.80-0.08ces6.90-0.200Bes7.15-0.160Mops7.20-0.013Tes7.50-0.200Hepes7.55-0.140Tricine8.15-0.210Tris8.30-0.310Bicine8.35-0.180Glycylglycine8.40-0.280室溫下（25）配制的Tris-HCl溶液，在37℃使用時PH值是多少？緩沖液的PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mMTris-HC溶液在4℃，25℃，37℃時，不同的PH值。4°C25°C37°C8.17.57.28.27.67.38.37.77.48.47.87.58.57.97.68.68.07.78.78.17.88.88.27.98.98.38.09.08.48.19.18.58.29.28.68.39.38.78.49.48.88.5昆蟲細胞培養(yǎng)的Z適PH值和滲透壓是多少？生長培養(yǎng)基的PH值對細胞的增殖和病毒或重組蛋白的生產(chǎn)均會產(chǎn)生影響。對于大部分鱗翅類昆蟲細胞系，在PH值6.0～6.4范圍的大部分應(yīng)用效果良好。培養(yǎng)鱗翅類昆蟲細胞系時，培養(yǎng)基的Z適滲透壓是345-380mOsm/kg.。為保證可靠和持久的細胞培養(yǎng)方式，減少技術(shù)問題，保持PH值和滲透壓在以上所列的范圍之內(nèi)。HighFive細胞有任何其它名稱嗎？HighFive細胞也被稱為Trichoplasiani5B1-4和BTI-TN-5B1-4。PFHM-II和HYBRIDOMA-SFM之間有什么差別PFHM-II（Protein-freeHybridomaMedium）是不包含有蛋白質(zhì)的單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。如果作為雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基使用，PFHM-II可能需要補充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM既是雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基，也是單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。它包含低水平的蛋白質(zhì)。在HighFive無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度是多少？HighFive無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度：0.025g/LTween-80，1.0g/LPluronicPoly-all。HighFive細胞用多大的密度凍存？3.0x10E6cells/ml。在我的果蠅培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)形成白色沉淀，加熱后溶解。它是什么？對我的細胞有害嗎？可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的濃度比在RPMI1640中高25倍，而且比谷氨酰胺更加難以溶解。沉淀也可能是不止一種成分的復(fù)合物。它可能是由于貯存在局部溫度較低的地方引起。只要沉淀在培養(yǎng)條件下可以溶解，對實驗不會有不利的影響。如何從T25瓶中轉(zhuǎn)移sf9細胞？能用胰蛋白酶消化嗎？我們QL推薦使用脫落細胞的方法，因為這項技術(shù)破壞性Z小，生活力Z高。正如手冊上所顯示，通過使用巴斯德吸液管，讓細胞上培養(yǎng)基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶。只有在必要的情況下，才使用胰酶消化細胞。胰酶消化一個T25瓶的sf9細胞：1.去除培養(yǎng)基。2.用2ml1xPBS（足以覆蓋細胞表面）洗滌細胞，去除PBS。3.加入2ml1x胰酶EDTA（恰好覆蓋細胞表面）。4.37℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動。5.向細胞中加入2ml細胞培養(yǎng)液，移入錐形管，用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁，移入同一錐形管中。（培養(yǎng)基中的FBS終止了胰酶的活性。）6.離心（1100rpm）沉淀細胞。去除培養(yǎng)基。7.用新的培養(yǎng)基重新懸浮細胞。傳代。在Sf9,Sf21,和highFive細胞懸浮培養(yǎng)時，肝素的使用量是多少？為了防止懸浮培養(yǎng)細胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細胞懸液。在重新凍存sf9細胞前，它可以傳多少代？隨著傳代的次數(shù)的增加，它的感染能力會降低嗎？通常情況當細胞經(jīng)過30次傳代后，應(yīng)該返回凍存。無論什么時候計數(shù)時，都應(yīng)該檢查細胞活力。如果超過95％的細胞保持有活力和在大約30小時左右加倍，細胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降，它們的感染力將不在是有效的。Techtips●貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基，可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時，碳酸氫納導(dǎo)致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘，來校正溶液的pH值（確定松開瓶口以保證氣體交換）?！袢绻毎囵B(yǎng)基偶然被凍，您應(yīng)該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。●您要查找培養(yǎng)基成分表嗎？您可以在GIBCO目錄**章的后面或在我們網(wǎng)站的技術(shù)資源部分找到?！癞斣跓o血清培養(yǎng)基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結(jié)合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活，可能對于細胞達到毒性水平?！褚坏┠谛迈r培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解?！窨傊蟛糠痔砑游锖驮噭㈱多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能?！裨谶M行傳代培養(yǎng)時，我們強烈推薦進行臺盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個簡單的稀釋（1∶4或1∶2）進行傳代，不進行活性檢測，您可能接種比你認為的低的多的濃度的細胞，這常常可能導(dǎo)致生長緩慢或培養(yǎng)物根本不生長。●在溶解的一周內(nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過30分鐘，就會變得不穩(wěn)定。●GIBCO產(chǎn)品的貯存期立足于實時穩(wěn)定性研究結(jié)果。產(chǎn)品說明在超過指定的貯存期的一段時間內(nèi)，產(chǎn)品仍然在可接受的范圍內(nèi)，但是由于在超過指定的效期后，產(chǎn)品的性能和穩(wěn)定性沒有檢測，我們不推薦使用過了效期的產(chǎn)品。[詳細]

  2018-09-02 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 食品中常見重金屬污染的現(xiàn)狀與防控措施

  食品中常見重金屬污染的現(xiàn)狀與防控措施[詳細]

  2014-12-15 00:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 淺談食品中常見的重金屬污染途徑及檢測方法

  淺談食品中常見的重金屬污染途徑及檢測方法[詳細]

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• 陽離子交換樹脂鐵污染的處理

  陽離子交換樹脂鐵污染的處理[詳細]

  2013-12-21 00:00

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• 自來水中的污染物質(zhì)

  自來水中的污染物質(zhì)[詳細]

  2013-07-03 00:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 重金屬的污染與FZ

  重金屬制品在我們生活中隨處可見，且與我們的生活息息相關(guān)，然而不合理的處理方式，導(dǎo)致的環(huán)境污染也成為詬病。本文首先介紹了重金屬的定義，以及它們在元素周期表中的分布，接著介紹了它們的毒性和危害，隨后介紹了重金屬的防護與治理，Z后展望了未來重金屬的可持續(xù)發(fā)展。[詳細]

  2018-08-23 11:40

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• 實驗室的污染與FZ

  實驗室的污染與FZ[詳細]

  2024-09-18 02:54

  實驗操作

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• CO2培養(yǎng)箱的污染控制

  CO2培養(yǎng)箱的污染控制[詳細]

  2024-09-16 02:50

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• 有機物對陽離子交換樹脂的污染

  有機物對陽離子交換樹脂的污染[詳細]

  2024-09-27 23:18

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  2024-09-18 02:39

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• 油液污染度檢測儀 污染度監(jiān)測儀

  油液污染度檢測儀 污染度監(jiān)測儀[詳細]

  2015-03-21 00:00

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  電磁閥的常見類型與安裝注意事項1、安裝時應(yīng)注意閥體上箭頭應(yīng)與介質(zhì)流向一致。不可裝在有直接滴水或濺水的地方。電磁閥應(yīng)垂直向上安裝；2、電磁閥應(yīng)保證在電源電壓為額定電壓的15%-10%波動范圍內(nèi)正常工作；3、電磁閥安裝后，管道中不得有反向壓差。并需通電數(shù)次，使之適溫后方可正式投入使用；4、電磁閥安裝前應(yīng)徹底清洗管道。通入的介質(zhì)應(yīng)無雜質(zhì)。閥前裝過濾器；5、當電磁閥發(fā)生故障或清洗時，為保證系統(tǒng)繼續(xù)運行，應(yīng)安裝旁路裝置。常見類型1、2位2通通用型閥2、熱水/蒸汽閥3、2位3通閥4、2位4通閥5、2位5通閥6、本安型防爆電磁閥7、低功耗電磁閥8、手動復(fù)位電磁閥9、精密微型閥10、閥位指示器電磁閥的常見類型與安裝注意事項[詳細]

  2018-10-14 10:00

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  防止?jié)崈羰医徊嫖廴镜闹匾胧?a href="/doc/detail_2ef9e8717d301ab4.html" target="_blank">[詳細]

  2013-12-21 00:00

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  說說食品中重金屬的污染.[詳細]

  2024-09-28 09:49

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  PCR反應(yīng)污染的處理方法[詳細]

  2024-09-16 02:11

  標準

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