国产三级在线看完整版-内射白嫩大屁股在线播放91-欧美精品国产精品综合-国产精品视频网站一区-一二三四在线观看视频韩国-国产不卡国产不卡国产精品不卡-日本岛国一区二区三区四区-成年人免费在线看片网站-熟女少妇一区二区三区四区

儀器網(wǎng)(yiqi.com)歡迎您!

| 注冊2 登錄
網(wǎng)站首頁-資訊-話題-產(chǎn)品-評測-品牌庫-供應商-展會-招標-采購-知識-技術-社區(qū)-資料-方案-產(chǎn)品庫-視頻

資料庫

儀器網(wǎng)> 資料庫>土壤DNA提取

土壤DNA提取

本文由 上海索寶生物科技有限公司 整理匯編

2024-09-29 06:33 2900閱讀次數(shù)

掃    碼    分   享
文檔僅可預覽首頁內(nèi)容,請下載后查看全文信息!
立即下載
腐殖酸的污染。土壤中,特別是森林,草地土壤含有非常豐富的腐殖酸。腐殖酸是一系列的有機物分子,部分分腐殖酸同核酸分子非常類似,在純化過程中非常難于去除。微量的腐殖酸污染都會導致下游應用,如PCR,酶切的失敗。裂解方法。土壤樣品中含有各種微生物,如細菌和真菌等。革蘭氏陽性細菌和真菌都含有非常厚的細菌壁,讓這些微生物的細胞壁有效破裂是提取高產(chǎn)量宏基因組DNA的關鍵。由于土壤樣品的復雜性,使用酶法(如溶菌酶,破壁酶,蝸牛酶)或液氮研磨都不可行,因為土壤中含有各種金屬離子或YZ因子導致消化酶的活性失活,或土壤中的沙粒等會導致液氮研磨很難進行。土壤DNA提取的解決簡介土壤樣品含有大量的微生物,其中絕大部分的微生物都是無法直接培養(yǎng)進行繁殖和研究。從土壤樣品中提取DNA是研究土壤微生物Z為有效的方法。目前從土壤樣品中提取微生物DNA的方法主要有直接法和間接法。直接法是指把土壤樣品放在裂解液中,經(jīng)過有效的破壁方法使微生物的DNA全部釋放到裂解液中,然后再進行分離提取,如Zhou的方法。間接法是指將土壤放在一種的緩沖液中,如BufferPBS等,把微生物從土壤中分離出來,然后再進行DNA的提取。間接法可大大降低土壤中腐殖酸,重金屬鹽對DNA提取帶來的影響,但是這種方法會丟失許多微生物,得到的DNA并非土壤樣品中的全基因組(宏基因組),目前已經(jīng)很少研究者會采用這種方法。從土壤樣品中直接提取DNA可Zda可能性地獲得全基因組,但是這種方法卻面臨以下幾個問題:1.2.3.DNA得率難于控制。土壤樣品或因肥沃,或因貧瘠,或因含水量豐富,或因干枯,或因取樣的深淺度,都會造成微生物數(shù)量和品種發(fā)生劇烈改變。在一個小范圍的土壤樣品DNA含量往往會差別成千上百倍。此外,某些土壤中含有的化學成分,如重金屬鹽,粘土物質都會造成DNA得率降低。OmegaBiotek公司的E.Z.N.A.SoilDNAKit是目前土壤DNA提取Z為優(yōu)化的試劑盒。該試劑盒采用玻璃珠研磨法和熱激化學破壁法,可不需特殊的珠磨儀,在點動渦旋儀就可進行,適合于廣大的研究室。試劑盒中HTRReagent是OmegaBiotek公司du家開發(fā)的腐殖酸吸附劑,能GX去除各種腐殖酸的污染。此外還采用無醇的硅膠柱純化方式,可GX去除土壤中各種可溶性金屬鹽,以及其它可溶性的YZ因子。該試劑盒已經(jīng)成功地提取如下土壤(部分是客戶反饋):自然保護區(qū)森林的土壤(長達30-40年森林土壤,表層有30-50cm落葉層),紅樹林土壤,草地,耕地,海底泥,污泥,礦石區(qū)泥土,有機物污染的泥土,池塘泥,垃圾泥,空調(diào)管道堆積物等。實驗方法為表明該試劑盒的優(yōu)勢性,我們選擇以下不同組織樣品進行DNA提取實驗,每個樣品重復3次。l森林類樣品:自然保護區(qū)森林土壤(廣東黑石頂自然保護區(qū))和海南島紅樹林保護區(qū)l礦石區(qū)樣品:礦石區(qū)水底土壤(濕)和礦石區(qū)地表土壤(干)l耕地樣品:稻田土壤,菜地土壤l有機物污染地表樣品:污水溝衍泥和生活垃圾堆放區(qū)操作方法(按SoilDNAKit試劑盒進行)簡單描述以下:1.取▲0.5g森林土壤/耕地土壤,或◆4g礦石區(qū)土壤和有機物污染土壤至15ml離心管中;2.加入▲0.5g酸洗玻璃珠,或◆4g酸洗玻璃珠;3.加入▲1mlBufferSXLMLus,或◆8mlBufferSXLMLus;4.立即在渦旋儀上Z高速渦旋3分鐘。5.加入▲100ul,或◆800ulBufferDS,渦旋15s混勻6.轉移至預熱至70oC水浴鍋中,水浴10-15分鐘。7.3000xg離心3分鐘,轉移▲800ul,或◆7ml上清,并加入▲270ulBufferSP2或◆2.3mlBufferSP2,渦旋混勻;8.▲10,000xg離心5分鐘,或◆5,000xg離心10分鐘;9.把上清液轉稱至新的2ml/15ml離心管中,加入0.7倍的異丙醇。(在處理礦石區(qū)樣品時和有機物污染的樣品中,還加入133ul糖原溶液),渦旋混勻;10.▲10,000xg離心5分鐘,或◆5,000xg離心10分鐘沉淀收集DNA。11.倒棄上清液,并反扣于吸水紙上5分鐘;12.加入200ulElutionBuffer,渦旋5秒。65℃水浴20-60分鐘,讓DNA充分溶液。13.加入50ulHTR,反應2min后,離心,取上清。14.上清加入等體積(約200ul)XP2Buffer,均勻后上柱。15.加入300ulXP2Buffer,洗滌一次。16.加入700ulSPWWashBuffer,洗滌兩次。17.空甩后,加入適當量的ElutionBuffer洗脫即可。實驗結果1.DNA電泳結果取10ul純化的基因組DNA上樣于0.8%瓊脂糖凝膠,80V電泳30分鐘,結果如下。0.5g森林類土壤樣品(前兩個自然保護區(qū)森林土壤,后兩個為紅樹林土壤)0.5g耕地類土壤樣品A:水稻田土壤B:玉米土壤4g有機物污染土壤樣品A:生活垃圾堆放地B:污水溝底泥4g礦石泥1和3是兩個礦石區(qū)水底土壤(濕)2和4礦石區(qū)地表土壤(干)相關附錄【omega】基因組DNA抽提試劑盒系列 Se全血DNA小量提取試劑盒:從小于1ml血液樣品中純化2-30ug淋巴細胞基因組DNAD3471-00SEBloodDNAKit(20)150D3471-01SEBloodDNAKit(50)300D3471-02SEBloodDNAKit(200)1000全血DNA小量提取試劑盒:從小于250ul血液樣品中純化2-30ugDNA,包括寄生的病毒等基因組DNAD3392-00BloodDNAKit(5)108D3392-01BloodDNAKit(50)720D3392-02BloodDNAKit(200)2610全血DNA中/大量提取試劑盒:從小于10ml、20ml血液樣品中純化200-250ug或400-600ug基因組DNAD3494-01BloodDNAMidiKit(10)495D3494-03BloodDNAMidiKit(50)2250D3494-04BloodDNAMidiKit(100)4320D2492-01BloodDNAMaxiKit(5)450D2492-02BloodDNAMaxiKit(20)1710D2492-03BloodDNAMaxiKit(50)3600

參與評論

全部評論(0條)

更多資料

該會員其他資料
merck 默克 現(xiàn)貨 促銷 報價單 2011目錄
spectrum 試劑 目錄 價格 代理 斯佰全 染色劑
大鼠P物質(SP)酶聯(lián)免疫分析 ELISA 試劑盒使用說明書
大鼠白細胞介素1(IL-1)酶聯(lián)免疫 elisa 試劑盒使用說明書
大鼠膽囊收縮素(CCK)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書
移液管相關
基因組DNA提取相關
增加RT-PCR靈敏度的方法
細胞凍存及復蘇
土壤DNA提取

在線留言

換一張?
取消