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• 細胞培養(yǎng)常見問題及其解決方法

  細胞培養(yǎng)常見問題及其解決1.如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始。2.何時須更換培養(yǎng)基？視細胞生長密度而定，或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時間，按時更換培養(yǎng)基即可。3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細胞大都無法立即適應，造成細胞無法存活。4可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源，所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。5何謂FBS,FCS,CS,HS?FBS（fetalbovineserum）和FCS（fetalcalfserum）是相同的意思，兩者都是指胎牛血清，F(xiàn)CS乃錯誤的使用字眼，請不要再使用。CS（calfserum）則是指小牛血清。HS（horseserum）則是指馬血清。6培養(yǎng)細胞時應使用5%或10%CO2？或根本沒有影響？一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細胞培養(yǎng)時應使用的CO2濃度。當培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時，細胞培養(yǎng)時應使用10%CO2；當培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時，則應使用5%CO2培養(yǎng)細胞。7.Hank's平衡鹽溶液（HBS）要在空氣中使用，不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么？Hank's平衡鹽溶液（HBS）和Earle's平衡鹽溶液（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別？HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles（2.2g/L）中比在Hanks（0.35g/L）中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。8.細胞之接種密度為何？依照細胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。更多常見問題及解決方法請見附件.........[詳細]

  2024-09-29 22:57

  產(chǎn)品樣冊

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• ELISA操作常見問題及其解決方法

  ELISA操作常見問題ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術要求，在檢測過程中除正常反應外，有時常見到一些錯誤的結果。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應是一種敏感性很高的反應，如果血清不稀釋，不可避免會產(chǎn)生很強的非特異性反應，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定，以保證試驗的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應取10μl樣品進行稀釋，個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準確，檢測結果出現(xiàn)問題。2．試劑盒平衡試劑盒中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠，樣品孵育時間相對縮短，ELISA反應不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。3．樣品和試劑的混勻稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗的均一性。4．加樣在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應液界面有差異。所以，有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。5．溫育溫育是ELISA測定中影響測定成敗Z為關鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結合反應在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結合，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。Z為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改變說明書操作，使用自己喜歡的溫育時間和溫育溫度，這樣造成一些不必要的麻煩。因為，不同試劑盒有不同的溫育時間和溫育溫度的選擇，隨意更改溫育時間或者溫育溫度將導致試驗結果出現(xiàn)偏差。6．洗板固相免疫測定技術是一種非均相免疫測定技術，需以洗滌操作將特異結合于固相的抗原或抗體與反應溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測定的特異性。洗板對于ELISA測定來說，也是極其關鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及時更換吸水紙，尤其是拍過酶標記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗結果。更多ELISA操作常見問題及其解決方法請見附件......[詳細]

  2024-09-30 14:23

  產(chǎn)品樣冊

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• 恒溫恒濕試驗箱常見問題及其解決方法

  恒溫恒濕試驗箱常見問題及其解決方法1、在高溫試驗中，如溫度變化達不到試驗溫度值時，可以檢查電器系統(tǒng)，逐一排除故障。如恒溫恒濕試驗箱溫度升得很慢，就要查看風循環(huán)系統(tǒng)，看一下風循環(huán)的調(diào)節(jié)擋板是否開啟正常，反之，就檢查風循環(huán)的電機運轉是否正常。如溫度過沖厲害那么就需要整定PID的設置參數(shù)。如果溫度直接上升，過溫保護，那么，控制器出故障，須更換控制儀表。2、當恒溫恒濕試驗箱低溫達不到試驗的指標，那你就要觀察溫度的變化，是溫度降的很慢，還是溫度到一定值后溫度有回升的趨勢，前者就要檢查一下，做低溫試驗前是否將工作室烘干，使工作室保持干燥后再將試驗樣品放入工作室內(nèi)再做試驗，工作室內(nèi)的試驗樣品是否放置的過多，使工作室內(nèi)的風不能充分循環(huán)，在排除上述原因后，就要考慮是否是制冷系統(tǒng)中的故障了，這樣就要請廠家的專業(yè)人員進行檢修。后者的現(xiàn)象是恒溫恒濕試驗箱設備的使用環(huán)境不好所致，設備放置的環(huán)境溫度，放置的位置（箱體后與墻的距離）要滿足要求（在設備操作使用說明中都有規(guī)定）。3、恒溫恒濕試驗箱在做濕熱試驗中，出現(xiàn)實際濕度會達到1**%或者實際濕度與目標濕度相差很大，數(shù)值低得很多，前者的現(xiàn)象：可能是濕球傳感器上的紗布干燥引起，那就要檢查濕球傳感器的水槽中是否缺水，水槽中的水位是由一水位控制器自動控制的，查水位控制器供水系統(tǒng)是否供水正常，水位控制器工作是否正常。另一種可能就是濕球紗布因使用時間長，或供水水質(zhì)純凈度的原因，會使紗布變硬，使紗布無法吸收水份而干燥，只要更換或清洗紗布即可排除以上現(xiàn)象。后者的現(xiàn)象主要是恒溫恒濕試驗箱的加濕系統(tǒng)不工作，查看加濕系統(tǒng)的供水系統(tǒng)，供水系統(tǒng)內(nèi)是否有一定的水量，控制加濕鍋爐水位的水位控制是否正常，加濕鍋爐內(nèi)的水位是否正常。如以上一切都正常，那就要檢查電器控制系統(tǒng)，這要請專業(yè)維修人員進行檢修。4、恒溫恒濕試驗箱設備在試驗運行過程中突然出現(xiàn)故障時，控制儀表上出現(xiàn)對應的故障顯示提示并有聲訊報警提示。操作人員可以對照設備的操作使用中的故障排除一章中快速檢查出屬于哪一類故障，即可請專業(yè)人員快速排除故障，以確保試驗的正常進行。其它環(huán)境試驗設備在使用中還會有其它的現(xiàn)象，那就要具體現(xiàn)象，具體分析和排除。[詳細]

  2018-09-03 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 電站常見問題解決方法

  電站常見問題解決方法[詳細]

  2024-09-15 08:36

  報價單

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• 如何解決細胞培養(yǎng)常見問題

  如何解決細胞培養(yǎng)常見問題[詳細]

  2013-11-01 00:00

  安裝說明

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• 細胞培養(yǎng)常見問題及解答

  細胞培養(yǎng)常見問題及解答[詳細]

  2016-09-13 00:00

  期刊論文

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• 溫度試驗箱常見問題解決方法

  溫度試驗箱常見問題解決方法[詳細]

  2010-03-04 00:00

  應用文章

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• 移液器常見問題和解決方法

  移液器常見問題和解決方法[詳細]

  2013-12-10 00:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 電子汽車衡常見問題解決方法

  電子汽車衡這款產(chǎn)品是我們現(xiàn)在Z常見的一款產(chǎn)品了，我們上海恒剛儀器儀表有限公司專業(yè)生產(chǎn)銷售電子汽車衡，我司的電子汽車衡現(xiàn)在已經(jīng)銷往全國各地了哦，大家也就能想到我司的這款電子汽車衡有多受歡迎了吧，有感興趣的朋友歡迎大家前來我司咨詢！今天，小編就來給大家說說關于電子汽車衡的一些相關知識，電子汽車衡使用時間久了可能就會出現(xiàn)一些問題，那大家在面對電子汽車衡出現(xiàn)問題時**不要驚慌，首先要知道出現(xiàn)問題的原因，那樣我們才能對癥下藥。下面，小編就來給大家說說關于電子汽車衡常見的問題以及解決方法吧，希望大家能夠認真閱讀，相信大家讀完本文后一定會有所收獲的。想了解電子汽車衡常見的問題以及解決方法詳細信息請點擊，文件純屬于免費下載，大家可以放心使用！感謝您的大力支持！本文由上海恒剛儀器儀表有限公司整理提供。[詳細]

  2018-10-11 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 金相顯微鏡常見問題的解決方法

  金相顯微鏡常見問題的解決方法[詳細]

  2024-09-16 12:39

  其它

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• 彈出式烘箱常見問題解決方法

  1. 彈出式烘箱樣品加熱到時間后后，打開抽屜找不到樣品了 這是因為樣品尺寸過大，樣品不平整或者放置樣品的時候太靠近抽屜的外部，導致抽屜底板打開后，樣品未落入下料口，直接卡在風道內(nèi)了。這時候就需停止加熱，關閉設備。打開儀器后部維護門，拆開風道固定螺絲，移出風道倉，取出掉入的樣品。防止樣品堆積導致抽屜打不來，溫度探頭損壞等故障。 2. 彈出式烘箱樣品抽屜推進去，加熱指示燈不亮，必須手按壓著才工作 烘箱的抽屜左右各有一個定位銷，如果定位銷位置太短，就會導致抽屜無法固定，手松開沒法定位，這時需要手動調(diào)節(jié)定位銷的位置，使得抽屜正好固定且縫隙不大不漏風。另外抽屜里面還有一個到位接觸開關，如抽屜關緊后，烘箱還不工作加熱那就需要調(diào)節(jié)里面的接觸開關，請聯(lián)系我們的售后工程師。 3. 樣板每次卡在底板抽屜中漏不下來 這是因為托盤打開的幅度過小，沒法把樣品落下來，需要調(diào)節(jié)托盤運動氣缸的打開幅度接觸開關，具體方法請聯(lián)系我們的售后工程師。 4. 每次樣品落掉后，抽屜的底板無法還原成閉合狀態(tài)，需抽開手動推上去 這是因為托盤閉合的幅度過小，沒法把托盤頂?shù)轿?，需要調(diào)節(jié)托盤運動氣缸的閉合幅度接觸開關，具體方法請聯(lián)系我們的[詳細]

  2024-09-16 05:41

  操作手冊

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• 雙層玻璃反應釜常見問題及解決方法

  雙層玻璃反應釜常見問題及解決方法[詳細]

  2014-08-28 00:00

  安裝說明

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• BS66系列探測器常見問題解決方法

  BS66系列探測器常見問題解決方法我公司向您推薦的BS66系列(以下簡稱探測器)，是一種可連續(xù)檢測泄漏氣體濃度的本質(zhì)安全型設備。它適用于防爆場所氣體泄漏搶險，地下管道或礦井等場所，能有效保證工作人員的生命安全不受侵害，生產(chǎn)設備不受損失。便攜式氣體探測器采用自然擴散方式檢測氣體，敏感元件采用優(yōu)質(zhì)氣體傳感器，具有極好的靈敏度和出色的重復性；儀器采用嵌入式微機控制，操作簡單，功能齊全，可靠性高，具有多種自適應能力；使用點陣液晶顯示器，直觀清晰；小巧美觀的便攜設計不僅使您愛不釋手更便于您移動使用。便攜式氣體探測器外殼采用高強度工程塑料，復合防滑橡膠而成，強度高、手感好，并且防水、防塵、防爆。由于技術水平有限我們在研制的過程中難免會出現(xiàn)紕漏，如出現(xiàn)問題請您參照如下表格：電路故障請聯(lián)系經(jīng)銷商或制造商維修對檢測氣體無反應電路故障請聯(lián)系經(jīng)銷商或制造商維修顯示不準確傳感器超期請聯(lián)系經(jīng)銷商或制造商更換傳感器長期未標定請及時標定時間顯示錯誤電池電量完全耗盡及時充電并重新設置時間強電磁干擾重新設置時間零點校準功能不可用傳感器漂移過多及時標定或更換傳感器儀器正常檢測界面顯示“-0”傳感器漂移進行零點校準當儀器正常檢測界面顯示滿量程傳感器故障請聯(lián)系經(jīng)銷商或制造商更換傳感器上述方法如仍未解決問題請撥打我公司的客服電話，您的意見就是我們前進的Zda動力。[詳細]

  2018-10-07 10:02

  產(chǎn)品樣冊

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• ELISA中常見問題及解決方法

  下面分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法：1.選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2.加樣可能原因：1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。更多資料請下載文件小鼠elisa試劑盒[詳細]

  2018-10-08 10:01

  產(chǎn)品樣冊

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• 液相常見問題和解決方法

  液相常見問題和解決方法[詳細]

  2024-09-28 00:15

  安裝說明

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• 細胞培養(yǎng)常見的問題和解決方法

  細胞培養(yǎng)常見問題及回答如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊?，MEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始，各種目的無血清培養(yǎng)**AIMV（12005）培養(yǎng)基（SFM）。L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有Z終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I？這個二肽有多穩(wěn)定？GlutaMAX-I二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有Z小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，培養(yǎng)細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，培養(yǎng)細胞，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。如何用臺盼蘭計數(shù)活細胞？用無血清培養(yǎng)基把細胞懸液稀釋到200～2000個/毫升，在0.1毫升的細胞懸液中加入0.1毫升的0.4％的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，數(shù)分鐘后，用血球計數(shù)板計數(shù)細胞?；罴毎懦馀_盼蘭，因而染成藍色的細胞是死細胞。如何消除組織培養(yǎng)的污染？當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。1.在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞，稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。2.分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0mg/ml。3.每天觀測細胞毒性指標，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。4.確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2～3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2～3代。5.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。6.重復步驟4。7.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4～6代，確定污染是否以已被消除。培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。目錄上說，Hank's平衡鹽溶液（HBS）要在空氣中使用，不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么？Hank's平衡鹽溶液（HBS）和Earle's平衡鹽溶液（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別？HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles（2.2g/L）中比在Hanks（0.35g/L）中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。二價離子YZ胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么？二價離子的確YZ胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持YZ胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用EDTA清洗細胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。我SYSF900II時，細胞生長良好，但是我的蛋白產(chǎn)物不如使用Graces液和10%胎牛血清時效果好。如果目的蛋白是一個后期蛋白，它將與蛋白酶一起表達，這些蛋白酶將會作用于目的蛋白。在加有血清的培養(yǎng)基中，這些蛋白酶將作用到血清中的蛋白，從而使目的蛋白產(chǎn)品保持完好。在無血清配方中，蛋白酶作用的**底物是你的目的蛋白。為了避免這一問題，加入一些蛋白酶YZ劑或加入少量的血清（少于1％），讓血清給蛋白酶提供作用底物。20°C下配制的緩沖液，在較高或較低的溫度下PH值會改變嗎？對于普通使用的緩沖液，PH值隨溫度變化而變化。下表列出溫度改變10℃時，PH值的變化情況：例如20℃下配制PH7.4Tris緩沖液,40℃時PH值為7.4-（2x0.310）＝6.78緩沖系統(tǒng)pKa/20℃[Delta]pKa/10℃Mes6.15-0.110Ada6.60-0.110Pipes6.80-0.08ces6.90-0.200Bes7.15-0.160Mops7.20-0.013Tes7.50-0.200Hepes7.55-0.140Tricine8.15-0.210Tris8.30-0.310Bicine8.35-0.180Glycylglycine8.40-0.280室溫下（25）配制的Tris-HCl溶液，在37℃使用時PH值是多少？緩沖液的PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mMTris-HC溶液在4℃，25℃，37℃時，不同的PH值。4°C25°C37°C8.17.57.28.27.67.38.37.77.48.47.87.58.57.97.68.68.07.78.78.17.88.88.27.98.98.38.09.08.48.19.18.58.29.28.68.39.38.78.49.48.88.5昆蟲細胞培養(yǎng)的Z適PH值和滲透壓是多少？生長培養(yǎng)基的PH值對細胞的增殖和病毒或重組蛋白的生產(chǎn)均會產(chǎn)生影響。對于大部分鱗翅類昆蟲細胞系，在PH值6.0～6.4范圍的大部分應用效果良好。培養(yǎng)鱗翅類昆蟲細胞系時，培養(yǎng)基的Z適滲透壓是345-380mOsm/kg.。為保證可靠和持久的細胞培養(yǎng)方式，減少技術問題，保持PH值和滲透壓在以上所列的范圍之內(nèi)。HighFive細胞有任何其它名稱嗎？HighFive細胞也被稱為Trichoplasiani5B1-4和BTI-TN-5B1-4。PFHM-II和HYBRIDOMA-SFM之間有什么差別PFHM-II（Protein-freeHybridomaMedium）是不包含有蛋白質(zhì)的單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。如果作為雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基使用，PFHM-II可能需要補充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM既是雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基，也是單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。它包含低水平的蛋白質(zhì)。在HighFive無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度是多少？HighFive無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度：0.025g/LTween-80，1.0g/LPluronicPoly-all。HighFive細胞用多大的密度凍存？3.0x10E6cells/ml。在我的果蠅培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)形成白色沉淀，加熱后溶解。它是什么？對我的細胞有害嗎？可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的濃度比在RPMI1640中高25倍，而且比谷氨酰胺更加難以溶解。沉淀也可能是不止一種成分的復合物。它可能是由于貯存在局部溫度較低的地方引起。只要沉淀在培養(yǎng)條件下可以溶解，對實驗不會有不利的影響。如何從T25瓶中轉移sf9細胞？能用胰蛋白酶消化嗎？我們QL推薦使用脫落細胞的方法，因為這項技術破壞性Z小，生活力Z高。正如手冊上所顯示，通過使用巴斯德吸液管，讓細胞上培養(yǎng)基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶。只有在必要的情況下，才使用胰酶消化細胞。胰酶消化一個T25瓶的sf9細胞：1.去除培養(yǎng)基。2.用2ml1xPBS（足以覆蓋細胞表面）洗滌細胞，去除PBS。3.加入2ml1x胰酶EDTA（恰好覆蓋細胞表面）。4.37℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動。5.向細胞中加入2ml細胞培養(yǎng)液，移入錐形管，用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁，移入同一錐形管中。（培養(yǎng)基中的FBS終止了胰酶的活性。）6.離心（1100rpm）沉淀細胞。去除培養(yǎng)基。7.用新的培養(yǎng)基重新懸浮細胞。傳代。在Sf9,Sf21,和highFive細胞懸浮培養(yǎng)時，肝素的使用量是多少？為了防止懸浮培養(yǎng)細胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細胞懸液。在重新凍存sf9細胞前，它可以傳多少代？隨著傳代的次數(shù)的增加，它的感染能力會降低嗎？通常情況當細胞經(jīng)過30次傳代后，應該返回凍存。無論什么時候計數(shù)時，都應該檢查細胞活力。如果超過95％的細胞保持有活力和在大約30小時左右加倍，細胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降，它們的感染力將不在是有效的。Techtips●貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基，可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時，碳酸氫納導致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘，來校正溶液的pH值（確定松開瓶口以保證氣體交換）?！袢绻毎囵B(yǎng)基偶然被凍，您應該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。●您要查找培養(yǎng)基成分表嗎？您可以在GIBCO目錄**章的后面或在我們網(wǎng)站的技術資源部分找到?！癞斣跓o血清培養(yǎng)基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活，可能對于細胞達到毒性水平?！褚坏┠谛迈r培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解?！窨傊?，大部分添加物和試劑Z多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能?！裨谶M行傳代培養(yǎng)時，我們強烈推薦進行臺盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個簡單的稀釋（1∶4或1∶2）進行傳代，不進行活性檢測，您可能接種比你認為的低的多的濃度的細胞，這常?？赡軐е律L緩慢或培養(yǎng)物根本不生長?！裨谌芙獾囊恢軆?nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過30分鐘，就會變得不穩(wěn)定?！馟IBCO產(chǎn)品的貯存期立足于實時穩(wěn)定性研究結果。產(chǎn)品說明在超過指定的貯存期的一段時間內(nèi)，產(chǎn)品仍然在可接受的范圍內(nèi)，但是由于在超過指定的效期后，產(chǎn)品的性能和穩(wěn)定性沒有檢測，我們不推薦使用過了效期的產(chǎn)品。[詳細]

  2018-09-02 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 振動試驗臺常見故障及其解決方法

  振動試驗臺常見故障及其解決方法[詳細]

  2024-09-30 21:30

  實驗操作

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  離子色譜儀常見問題之原因及解決方法[詳細]

  2014-02-21 00:00

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  電熱真空干燥箱常見問題及解決方法[詳細]

  2011-10-13 00:00

  實驗操作

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• ELISA實驗中常見問題及解決方法

  ELISA中常見問題及解決方法ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我公司將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。下面分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法1選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2加樣可能原因：a.血清或血漿標本分離不好即進行加樣；b.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；c.加完標本再加酶試劑時酶液濺出孔外。解決辦法：a.標本為血清：**將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10T，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。b.加樣后及時放入孵箱。c.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。d.如果采用AT或其他全自動加樣，**選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。e.標本較多時，請分批操作。3孵育可能原因：a.孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；b.孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法：a.貼封片或加蓋；b.按說明步驟嚴格控制操作時間。4洗板可能原因：a.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。b.采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。c.反應板過多造成洗板等待時間長。解決辦法：a.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后**在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；b.合理安排，或多用幾臺洗板機。5顯色可能原因：a.顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；b.加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法：a.顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用；b.加樣時保持顯色劑不外流；c.A、B液應避免接觸金屬器械。6終止可能原因：如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。7讀板如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質(zhì)量。在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本，才能保證檢測質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。[詳細]

  2018-09-02 10:00

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