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細(xì)胞凍存及復(fù)蘇

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2024-09-29 06:32 4123閱讀次數(shù)

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細(xì)胞凍存及復(fù)蘇細(xì)胞凍存及復(fù)蘇（慢凍快融）細(xì)胞凍存及復(fù)蘇（慢凍快融）一、材料：材料：、0.胰酶。1、試劑：凍存液（90%FBS+10%DMSO）2、用品：凍存用：吸管（直、彎）、凍存管、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、顯微鏡、-80℃冰箱。復(fù)蘇用：燒杯、溫度計(jì)，細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)試劑及器材。25%二、方法：二、方法：1、凍存：取細(xì)胞90%融合的培養(yǎng)瓶，棄去培養(yǎng)液，加入0.胰酶0.消化2～3min，鏡下觀察，待細(xì)胞皺縮變圓后倒去胰酶，以凍存液1.～2ml中和以中止消化。吹打瓶底的每一個(gè)角落，注意不要產(chǎn)生氣泡。待細(xì)胞基本全部吹打下來后，將吸管插入液面下，反復(fù)吹打20～30次，以制成單細(xì)胞懸液。將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至凍存管中，在4℃放置30min，-20℃放置2h預(yù)凍，以多層脫脂棉充分包裹后放入-80℃冰箱中保存。2w后可去掉包裹繼續(xù)凍存。注意：細(xì)胞濃度細(xì)胞凍在一管中。注意：細(xì)胞濃度>106/支，可將2瓶75ml細(xì)胞凍在一管中。支2、復(fù)蘇：取凍存管，立即投入39℃水中使之融化。放入無菌室后，外壁消毒，吸出凍存液以十倍培養(yǎng)液稀釋，接種于培養(yǎng)瓶中。加培養(yǎng)液的時(shí)候要緩慢的加入，以減少滲透壓的急劇變化造成細(xì)胞的死亡。如離心：先將培養(yǎng)基加入離心管大約8ml，然后將細(xì)胞凍存液滴在培養(yǎng)基液面上，然后離心，因?yàn)榧?xì)胞重，被離心到底部了，而DMSO都還是在上清液里面，棄上清，重懸細(xì)胞加入培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。55ml25%三、三、注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：1、細(xì)胞凍存：、細(xì)胞凍存：（1）**時(shí)機(jī)：細(xì)胞增殖旺盛，情況穩(wěn)定，試驗(yàn)效果良好。不要選擇細(xì)胞狀態(tài)不好時(shí)凍存（長(zhǎng)的太過了，培養(yǎng)液已經(jīng)很黃；細(xì)胞可疑污染；細(xì)胞已經(jīng)開始凋亡或崩解；連續(xù)培養(yǎng)超過二個(gè)月，細(xì)胞性狀已有改變）。6（2）細(xì)胞濃度：凍存時(shí)細(xì)胞濃度低于1～5×10/ml時(shí)復(fù)蘇很難成功?？梢噪x心后調(diào)整細(xì)胞濃度。（不要重新洗細(xì)胞）（3）蓋子要緊：凍存管的蓋子一定要擰緊，否則復(fù)蘇水浴時(shí)會(huì)滲水，造成污染。（4）選擇厚壁泡沫塑料盒，或塞入大量干棉花。單薄的凍存盒因壁太薄，細(xì)胞會(huì)被迅速降溫。（5）不要在-80℃放置太久，時(shí)間不宜超過半年。（冰箱的溫度難以恒定：開門/關(guān)門，電壓不穩(wěn)等），應(yīng)盡快轉(zhuǎn)入液氮。（6）應(yīng)保證細(xì)胞全部浸在液氮液面下。（7）每支凍存管都標(biāo)上細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間，并記錄在冊(cè)。2、復(fù)蘇：、復(fù)蘇：（1）核查記錄冊(cè)及凍存管上細(xì)胞的名稱、時(shí)間是否一致。（2）水浴時(shí)間不可太長(zhǎng)：適當(dāng)提高水浴溫度（37度～40度），要是冬天，就選用保溫盒。（3）冰盒內(nèi)時(shí)間不宜太長(zhǎng)：復(fù)蘇1h內(nèi)應(yīng)加入新的培養(yǎng)液。（高濃度DMSO防止胞內(nèi)形成冰晶，凍存時(shí)保護(hù)細(xì)胞，但復(fù)蘇融解后，浸泡時(shí)間太久會(huì)，對(duì)細(xì)胞有毒性）。（4）有些細(xì)胞復(fù)蘇后一星期才有起色，不要換液，耐心等待兩周后再做決定

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細(xì)胞凍存及復(fù)蘇

細(xì)胞凍存及復(fù)蘇細(xì)胞凍存及復(fù)蘇（慢凍快融）細(xì)胞凍存及復(fù)蘇（慢凍快融）一、材料：材料：、0.胰酶。1、試劑：凍存液（90%FBS+10%DMSO）2、用品：凍存用：吸管（直、彎）、凍存管、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、顯微鏡、-80℃冰箱。復(fù)蘇用：燒杯、溫度計(jì)，細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)試劑及器材。25%二、方法：二、方法：1、凍存：取細(xì)胞90%融合的培養(yǎng)瓶，棄去培養(yǎng)液，加入0.胰酶0.消化2～3min，鏡下觀察，待細(xì)胞皺縮變圓后倒去胰酶，以凍存液1.～2ml中和以中止消化。吹打瓶底的每一個(gè)角落，注意不要產(chǎn)生氣泡。待細(xì)胞基本全部吹打下來后，將吸管插入液面下，反復(fù)吹打20～30次，以制成單細(xì)胞懸液。將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至凍存管中，在4℃放置30min，-20℃放置2h預(yù)凍，以多層脫脂棉充分包裹后放入-80℃冰箱中保存。2w后可去掉包裹繼續(xù)凍存。注意：細(xì)胞濃度細(xì)胞凍在一管中。注意：細(xì)胞濃度>106/支，可將2瓶75ml細(xì)胞凍在一管中。支2、復(fù)蘇：取凍存管，立即投入39℃水中使之融化。放入無菌室后，外壁消毒，吸出凍存液以十倍培養(yǎng)液稀釋，接種于培養(yǎng)瓶中。加培養(yǎng)液的時(shí)候要緩慢的加入，以減少滲透壓的急劇變化造成細(xì)胞的死亡。如離心：先將培養(yǎng)基加入離心管大約8ml，然后將細(xì)胞凍存液滴在培養(yǎng)基液面上，然后離心，因?yàn)榧?xì)胞重，被離心到底部了，而DMSO都還是在上清液里面，棄上清，重懸細(xì)胞加入培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。55ml25%三、三、注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)：1、細(xì)胞凍存：、細(xì)胞凍存：（1）**時(shí)機(jī)：細(xì)胞增殖旺盛，情況穩(wěn)定，試驗(yàn)效果良好。不要選擇細(xì)胞狀態(tài)不好時(shí)凍存（長(zhǎng)的太過了，培養(yǎng)液已經(jīng)很黃；細(xì)胞可疑污染；細(xì)胞已經(jīng)開始凋亡或崩解；連續(xù)培養(yǎng)超過二個(gè)月，細(xì)胞性狀已有改變）。6（2）細(xì)胞濃度：凍存時(shí)細(xì)胞濃度低于1～5×10/ml時(shí)復(fù)蘇很難成功?？梢噪x心后調(diào)整細(xì)胞濃度。（不要重新洗細(xì)胞）（3）蓋子要緊：凍存管的蓋子一定要擰緊，否則復(fù)蘇水浴時(shí)會(huì)滲水，造成污染。（4）選擇厚壁泡沫塑料盒，或塞入大量干棉花。單薄的凍存盒因壁太薄，細(xì)胞會(huì)被迅速降溫。（5）不要在-80℃放置太久，時(shí)間不宜超過半年。（冰箱的溫度難以恒定：開門/關(guān)門，電壓不穩(wěn)等），應(yīng)盡快轉(zhuǎn)入液氮。（6）應(yīng)保證細(xì)胞全部浸在液氮液面下。（7）每支凍存管都標(biāo)上細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間，并記錄在冊(cè)。2、復(fù)蘇：、復(fù)蘇：（1）核查記錄冊(cè)及凍存管上細(xì)胞的名稱、時(shí)間是否一致。（2）水浴時(shí)間不可太長(zhǎng)：適當(dāng)提高水浴溫度（37度～40度），要是冬天，就選用保溫盒。（3）冰盒內(nèi)時(shí)間不宜太長(zhǎng)：復(fù)蘇1h內(nèi)應(yīng)加入新的培養(yǎng)液。（高濃度DMSO防止胞內(nèi)形成冰晶，凍存時(shí)保護(hù)細(xì)胞，但復(fù)蘇融解后，浸泡時(shí)間太久會(huì)，對(duì)細(xì)胞有毒性）。（4）有些細(xì)胞復(fù)蘇后一星期才有起色，不要換液，耐心等待兩周后再做決定[詳細(xì)]
2024-09-29 06:32
產(chǎn)品樣冊(cè)
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動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞凍存與復(fù)蘇

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞凍存與復(fù)蘇[詳細(xì)]
2013-12-21 00:00
安裝說明
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無血清細(xì)胞凍存液說明書

無血清凍存液為即用型產(chǎn)品，配方成分明確，不含動(dòng)物來源性蛋白，不含血清。不僅降低了各類細(xì) 菌、病毒、支原體等污染風(fēng)險(xiǎn)，保證凍存細(xì)胞的安全，而且減少外源性蛋白對(duì)細(xì)胞正常生長(zhǎng)和分化的影響[詳細(xì)]
2024-09-28 14:28
產(chǎn)品樣冊(cè)
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通用型細(xì)胞凍存試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

通用型細(xì)胞凍存試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）[詳細(xì)]
2024-09-28 00:08
期刊論文
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KGW ARPEGE 生物制品凍存罐

KGW ARPEGE 生物制品凍存罐[詳細(xì)]
2015-01-05 00:00
應(yīng)用文章
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北京索萊寶24800 通用細(xì)胞凍存液說明書

細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中，及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中，雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是必不可少的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊]有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候，細(xì)胞的培養(yǎng)過程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，如果沒有原始細(xì)胞的凍存，則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄。索萊寶公司生產(chǎn)的通用細(xì)胞凍存液以進(jìn)口FBS、DMSO為主要原材料配制，適用于是各種哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞，傳代細(xì)胞系和雜交瘤細(xì)胞等的凍存保種。本產(chǎn)品為即用型試劑，儲(chǔ)存穩(wěn)定，使用方便，細(xì)胞存活率高。[詳細(xì)]
2024-09-29 08:12
產(chǎn)品樣冊(cè)
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WHEATON 低溫凍存管/凍存盒/凍存架

WHEATON 低溫凍存管/凍存盒/凍存架[詳細(xì)]
2015-01-05 00:00
應(yīng)用文章
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WHEATON 低溫凍存管/凍存盒/凍存架

WHEATON 低溫凍存管/凍存盒/凍存架[詳細(xì)]
2015-01-05 00:00
報(bào)價(jià)單
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ARAMUS? 一次性凍存袋的顆粒檢測(cè)

ARAMUS? 一次性凍存袋的顆粒檢測(cè)[詳細(xì)]
2024-09-14 19:11
應(yīng)用文章
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美國(guó)MVEGX凍存罐HE系列產(chǎn)品樣冊(cè)

美國(guó)MVEGX凍存罐HE系列產(chǎn)品樣冊(cè)[詳細(xì)]
2016-10-20 10:06
選購(gòu)指南
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WHEATON Biobanking PluraScan低溫凍存樣品掃描儀

WHEATON Biobanking PluraScan低溫凍存樣品掃描儀[詳細(xì)]
2015-01-05 00:00
報(bào)價(jià)單
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美國(guó)BIOLGOIX巴羅克不銹鋼凍存架產(chǎn)品認(rèn)證證書

PolypropyleneCryogenicStorageBoxesI.APPLICATIONS1.Storageandorganizationofanyrangeof0.5mlto2.0mlmicrotubes/cryogenicvialsII.FEATURES1.Materials:durablepolypropylene2.Chemicallyresistanttoalcoholsandmildorganicsolvents3.Temperaturerange:stablefrom-80Cto121C(Autoclavable)III.BOXDESIGN1.9x9wellstorage(81-wellstotal)or10x10wellstorage(100-wellstotal)or5x5wellstorage(25-wellstotal)2.5assortedcolors:clear,pink,green,blueandyellow3.Holds0.5ml,1.5mlor2.0mlmicrotubes4.81-wellboxfeaturesaremovablelidincludesanumberedgridfororientation5.100-wellboxfeaturesa3-hingedlidwithalphanumericgridfororientation6.25-wellboxfeaturesaremovablelidincludesanumberedgridfororientationIV.PACKAGING1.Bulk,20boxes/case,assortedcolorsV.DESCRIPTIONItemDescriptionPackagingSterile90-9081Polypropylene81-wellCryogenicstorageboxBulk,20boxes/case,assortedcolorsNo90-9100Polypropylene100-wellCryogenicstorageboxBulk,20boxes/case,assortedcolorsNo90-9025Polypropylene25-wellCryogenicstorageboxBulk,20boxes/case,assortedcolorsNoVI.STERILITY1.N/AVII.CERTIFICATIONBiologixproductsaremanufacturedcompletelyaccordingtotheTUVISO9001:2008standard.VIII.RESTRICTIONSRefertotheChemicalResistanceChartinourcatalog,andavailablewithinouronlinecatalog.IX.PRODUCTPARAMETERDimensions=mmCat#DescriptionABCDEFG90-9081Box132.012.235.030.026.016.5132.090-9081CLid132.0132.026.0----Dimensions=mmCat#DescriptionABCDEFGHI90-9100Box14012.214012.254.050.032.090.024Dimensions=mmCat#DescriptionABCDEFG90-9025Box75.712.235.030.026.016.575.790-9025CLid75.775.726.0----Dimensions=mm[詳細(xì)]
2024-09-29 21:08
產(chǎn)品樣冊(cè)
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FH0948-人腎平滑肌瘤復(fù)蘇細(xì)胞；G-402

FH0948-人腎平滑肌瘤復(fù)蘇細(xì)胞；G-402[詳細(xì)]
2024-05-30 09:33
應(yīng)用文章
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高速離心機(jī)在細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用

高速離心機(jī)在細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用[詳細(xì)]
2024-09-16 03:14
其它
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磨料磨具出口步入復(fù)蘇期

磨料磨具出口步入復(fù)蘇期[詳細(xì)]
2024-09-27 22:37
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凍干曲線的制定及優(yōu)化

凍干曲線的制定及優(yōu)化[詳細(xì)]
2015-02-06 00:00
安裝說明
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細(xì)胞培養(yǎng)基種類及適合于何種細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)基種類及適合于何種細(xì)胞[詳細(xì)]
2024-10-10 17:30
期刊論文
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博醫(yī)康凍干技術(shù)之凍干曲線的制定及優(yōu)化

博醫(yī)康凍干技術(shù)之凍干曲線的制定及優(yōu)化[詳細(xì)]
2015-11-16 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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凍干技術(shù)-預(yù)凍階段

凍干技術(shù)-預(yù)凍階段[詳細(xì)]
2015-02-06 00:00
實(shí)驗(yàn)操作
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凍干的概念目的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用

凍干的概念目的優(yōu)點(diǎn)及應(yīng)用[詳細(xì)]
2013-06-05 00:00
課件
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