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細(xì)胞培養(yǎng)問題
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本文由 上海索寶生物科技有限公司 整理匯編
2018-09-02 10:00 1561閱讀次數(shù)
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細(xì)胞培養(yǎng)問題- false[詳細(xì)]
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2018-09-02 10:00
產(chǎn)品樣冊
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- 細(xì)胞培養(yǎng)常見的問題和解決方法
- 細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及回答如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊?，MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個好的開始，各種目的無血清培養(yǎng)**AIMV（12005）培養(yǎng)基（SFM）。L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有Z終定論。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。GlutaMAX-I是什么？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I？這個二肽有多穩(wěn)定？GlutaMAX-I二肽是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I二肽溶液有Z小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是哺乳類細(xì)胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，（特別是雌激素）。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是哺乳類細(xì)胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。如何用臺盼蘭計數(shù)活細(xì)胞？用無血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到200～2000個/毫升，在0.1毫升的細(xì)胞懸液中加入0.1毫升的0.4％的臺盼蘭溶液。輕輕混勻，數(shù)分鐘后，用血球計數(shù)板計數(shù)細(xì)胞?；罴?xì)胞排斥臺盼蘭，因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞。如何消除組織培養(yǎng)的污染？當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗步驟。1.在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。2.分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)板中，或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi)，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0mg/ml。3.每天觀測細(xì)胞毒性指標(biāo)，如脫落，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓。4.確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2～3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞2～3代。5.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。6.重復(fù)步驟4。7.在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4～6代，確定污染是否以已被消除。培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。目錄上說，Hank's平衡鹽溶液（HBS）要在空氣中使用，不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么？Hank's平衡鹽溶液（HBS）和Earle's平衡鹽溶液（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別？HBS和EBS的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles（2.2g/L）中比在Hanks（0.35g/L）中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2中，溶液會變堿，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液，。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲存的組織，用Hanks液就可以了。二價離子YZ胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么？二價離子的確YZ胰蛋白酶活性。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持YZ胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。我SYSF900II時，細(xì)胞生長良好，但是我的蛋白產(chǎn)物不如使用Graces液和10%胎牛血清時效果好。如果目的蛋白是一個后期蛋白，它將與蛋白酶一起表達(dá)，這些蛋白酶將會作用于目的蛋白。在加有血清的培養(yǎng)基中，這些蛋白酶將作用到血清中的蛋白，從而使目的蛋白產(chǎn)品保持完好。在無血清配方中，蛋白酶作用的**底物是你的目的蛋白。為了避免這一問題，加入一些蛋白酶YZ劑或加入少量的血清（少于1％），讓血清給蛋白酶提供作用底物。20°C下配制的緩沖液，在較高或較低的溫度下PH值會改變嗎？對于普通使用的緩沖液，PH值隨溫度變化而變化。下表列出溫度改變10℃時，PH值的變化情況：例如20℃下配制PH7.4Tris緩沖液,40℃時PH值為7.4-（2x0.310）＝6.78緩沖系統(tǒng)pKa/20℃[Delta]pKa/10℃Mes6.15-0.110Ada6.60-0.110Pipes6.80-0.08ces6.90-0.200Bes7.15-0.160Mops7.20-0.013Tes7.50-0.200Hepes7.55-0.140Tricine8.15-0.210Tris8.30-0.310Bicine8.35-0.180Glycylglycine8.40-0.280室溫下（25）配制的Tris-HCl溶液，在37℃使用時PH值是多少？緩沖液的PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mMTris-HC溶液在4℃，25℃，37℃時，不同的PH值。4°C25°C37°C8.17.57.28.27.67.38.37.77.48.47.87.58.57.97.68.68.07.78.78.17.88.88.27.98.98.38.09.08.48.19.18.58.29.28.68.39.38.78.49.48.88.5昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的Z適PH值和滲透壓是多少？生長培養(yǎng)基的PH值對細(xì)胞的增殖和病毒或重組蛋白的生產(chǎn)均會產(chǎn)生影響。對于大部分鱗翅類昆蟲細(xì)胞系，在PH值6.0～6.4范圍的大部分應(yīng)用效果良好。培養(yǎng)鱗翅類昆蟲細(xì)胞系時，培養(yǎng)基的Z適滲透壓是345-380mOsm/kg.。為保證可靠和持久的細(xì)胞培養(yǎng)方式，減少技術(shù)問題，保持PH值和滲透壓在以上所列的范圍之內(nèi)。HighFive細(xì)胞有任何其它名稱嗎？HighFive細(xì)胞也被稱為Trichoplasiani5B1-4和BTI-TN-5B1-4。PFHM-II和HYBRIDOMA-SFM之間有什么差別PFHM-II（Protein-freeHybridomaMedium）是不包含有蛋白質(zhì)的單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。如果作為雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基使用，PFHM-II可能需要補(bǔ)充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM既是雜交瘤生產(chǎn)培養(yǎng)基，也是單克隆抗體生產(chǎn)培養(yǎng)基。它包含低水平的蛋白質(zhì)。在HighFive無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度是多少？HighFive無血清培養(yǎng)基中去污劑的濃度：0.025g/LTween-80，1.0g/LPluronicPoly-all。HighFive細(xì)胞用多大的密度凍存？3.0x10E6cells/ml。在我的果蠅培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)形成白色沉淀，加熱后溶解。它是什么？對我的細(xì)胞有害嗎？可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培養(yǎng)基中谷氨酰胺的濃度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的濃度比在RPMI1640中高25倍，而且比谷氨酰胺更加難以溶解。沉淀也可能是不止一種成分的復(fù)合物。它可能是由于貯存在局部溫度較低的地方引起。只要沉淀在培養(yǎng)條件下可以溶解，對實(shí)驗不會有不利的影響。如何從T25瓶中轉(zhuǎn)移sf9細(xì)胞？能用胰蛋白酶消化嗎？我們QL推薦使用脫落細(xì)胞的方法，因為這項技術(shù)破壞性Z小，生活力Z高。正如手冊上所顯示，通過使用巴斯德吸液管，讓細(xì)胞上培養(yǎng)基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶。只有在必要的情況下，才使用胰酶消化細(xì)胞。胰酶消化一個T25瓶的sf9細(xì)胞：1.去除培養(yǎng)基。2.用2ml1xPBS（足以覆蓋細(xì)胞表面）洗滌細(xì)胞，去除PBS。3.加入2ml1x胰酶EDTA（恰好覆蓋細(xì)胞表面）。4.37℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動。5.向細(xì)胞中加入2ml細(xì)胞培養(yǎng)液，移入錐形管，用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁，移入同一錐形管中。（培養(yǎng)基中的FBS終止了胰酶的活性。）6.離心（1100rpm）沉淀細(xì)胞。去除培養(yǎng)基。7.用新的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。傳代。在Sf9,Sf21,和highFive細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時，肝素的使用量是多少？為了防止懸浮培養(yǎng)細(xì)胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細(xì)胞懸液。在重新凍存sf9細(xì)胞前，它可以傳多少代？隨著傳代的次數(shù)的增加，它的感染能力會降低嗎？通常情況當(dāng)細(xì)胞經(jīng)過30次傳代后，應(yīng)該返回凍存。無論什么時候計數(shù)時，都應(yīng)該檢查細(xì)胞活力。如果超過95％的細(xì)胞保持有活力和在大約30小時左右加倍，細(xì)胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降，它們的感染力將不在是有效的。Techtips●貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基，可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時，碳酸氫納導(dǎo)致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘，來校正溶液的pH值（確定松開瓶口以保證氣體交換）。●如果細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍，您應(yīng)該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基?！衲檎遗囵B(yǎng)基成分表嗎？您可以在GIBCO目錄**章的后面或在我們網(wǎng)站的技術(shù)資源部分找到。●當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結(jié)合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活，可能對于細(xì)胞達(dá)到毒性水平?！褚坏┠谛迈r培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。●總之，大部分添加物和試劑Z多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能?！裨谶M(jìn)行傳代培養(yǎng)時，我們強(qiáng)烈推薦進(jìn)行臺盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個簡單的稀釋（1∶4或1∶2）進(jìn)行傳代，不進(jìn)行活性檢測，您可能接種比你認(rèn)為的低的多的濃度的細(xì)胞，這常常可能導(dǎo)致生長緩慢或培養(yǎng)物根本不生長。●在溶解的一周內(nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過30分鐘，就會變得不穩(wěn)定。●GIBCO產(chǎn)品的貯存期立足于實(shí)時穩(wěn)定性研究結(jié)果。產(chǎn)品說明在超過指定的貯存期的一段時間內(nèi)，產(chǎn)品仍然在可接受的范圍內(nèi)，但是由于在超過指定的效期后，產(chǎn)品的性能和穩(wěn)定性沒有檢測，我們不推薦使用過了效期的產(chǎn)品。[詳細(xì)]
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2018-09-02 10:00
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如何解決細(xì)胞培養(yǎng)中的污染問題- 如何解決細(xì)胞培養(yǎng)中的污染問題[詳細(xì)]
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2013-10-31 00:00
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2013-12-21 00:00
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- 細(xì)胞培養(yǎng)平臺
- 細(xì)胞培養(yǎng)[詳細(xì)]
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2018-09-16 10:00
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細(xì)胞培養(yǎng)目錄- 詳情以及更多優(yōu)惠促銷信息請撥打021-61496710，獲得更多產(chǎn)品資料及彩頁[詳細(xì)]
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2018-10-14 10:00
產(chǎn)品樣冊
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- 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)[詳細(xì)]
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2024-10-01 05:33
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- 細(xì)胞培養(yǎng)基本方法
- 細(xì)胞培養(yǎng)基本方法[詳細(xì)]
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2011-05-13 00:00
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- 細(xì)胞培養(yǎng)專用培養(yǎng)瓶[詳細(xì)]
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2015-01-07 00:00
報價單
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- TubeSpin 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
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2024-09-12 18:27
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- 細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)：植物細(xì)胞[詳細(xì)]
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2024-09-22 18:42
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2024-09-17 20:05
選購指南
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- 細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)檢查
- 細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)檢查(一)一般形態(tài)觀察生長狀態(tài)良好的細(xì)胞在普通顯微鏡下觀察時可見，細(xì)胞透明度大，輪廓不清，只有用相差顯微鏡觀察，才能看清細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)。細(xì)胞內(nèi)顆粒少、無空泡，胞膜清晰，培養(yǎng)上清液清澈透明，看不到懸浮細(xì)胞和碎片；細(xì)胞功能不良時，輪廓增強(qiáng)，胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物，細(xì)胞之間空隙加大，細(xì)胞形態(tài)可變得不規(guī)則，甚至失去原有特點(diǎn)。只有生長狀態(tài)良好的細(xì)胞才能用于實(shí)驗。細(xì)胞生長過程中，CO2積累增多，由于培養(yǎng)液內(nèi)含有pH指示劑，因此其顏色變化可間接反映細(xì)胞的生長狀態(tài)。正常情況下，培養(yǎng)液呈桃紅色；呈橙黃色時，細(xì)胞一般生長狀態(tài)較好；呈淡黃色，則可能是培養(yǎng)時間過長、營養(yǎng)不足、細(xì)胞死亡過多；呈紫紅色，則可能是細(xì)胞生長狀態(tài)不好，或已死亡。（二）細(xì)胞增殖生長狀態(tài)初代或傳代培養(yǎng)時，都有一長短不同的潛伏期。傳代細(xì)胞系、胚胎組織或幼體組織潛伏期短，一般在第二天即可見細(xì)胞生長，一周內(nèi)便可連接成片。成體組織的潛伏期長，老齡組織和癌組織更長，有時可達(dá)一周左右。初代組織塊培養(yǎng)法細(xì)胞生長，Zxian從組織“長”出的為游走細(xì)胞，它們多單獨(dú)活動，形態(tài)不規(guī)則，用縮時逐格顯微攝電影法可顯示出極活躍的變形、游走和吞噬活動。在游走細(xì)胞之后，接著長出的是成纖維細(xì)胞或上皮細(xì)胞。只有當(dāng)出現(xiàn)細(xì)胞分裂、細(xì)胞數(shù)量逐漸增多、形成較大生長暈或連接成片時，細(xì)胞才真正進(jìn)入增殖狀態(tài)。成纖維細(xì)胞是Z易生長細(xì)胞，生長速度較快，低倍鏡下觀察時，前哨部位細(xì)胞似火焰狀或放射形狀向外擴(kuò)展；如接種為游走細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞等細(xì)胞，在密度不大時，可連接成網(wǎng)狀，只有細(xì)胞密度增大時才連接成片。上皮細(xì)胞排列緊密，相互接壤成膜狀；上皮膜邊緣整齊，細(xì)胞很少單獨(dú)活動，生長時整個上皮膜發(fā)生移動。上皮細(xì)胞尤其是外胚層來源的細(xì)胞如表皮細(xì)胞等，生長過程中常產(chǎn)生溶解酶，能使細(xì)胞間質(zhì)發(fā)生液化，導(dǎo)致細(xì)胞相互分離，嚴(yán)重時可導(dǎo)致細(xì)胞脫落，其確切機(jī)制尚不明了．可能與產(chǎn)生透明質(zhì)酸酶有關(guān)。細(xì)胞接種后，經(jīng)過懸浮期、潛伏期和指數(shù)增生期等后，Z終將長滿瓶壁，如不及時做再培養(yǎng)，由于營養(yǎng)物質(zhì)消耗和代謝產(chǎn)物積累，細(xì)胞即進(jìn)入停滯期。此時細(xì)胞輪廓增強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)常出現(xiàn)前述有膨脹線粒體形成的堆積物，細(xì)胞變得粗糙，嚴(yán)重時細(xì)胞從瓶壁脫落，只有及時做傳代，才能使細(xì)胞繼續(xù)生長。(三)微生物污染在長時間反復(fù)培養(yǎng)過程中，即使細(xì)胞培養(yǎng)用品消毒操作嚴(yán)密，也會偶爾發(fā)生細(xì)菌、支原體、真菌、病毒和其他雜質(zhì)細(xì)胞污染，需隨時注意，一旦發(fā)生污染，應(yīng)及時進(jìn)行處理。(四)培養(yǎng)液在正常情況下，培養(yǎng)液pH介于7．2～7．4，呈紅色。用一般培養(yǎng)箱培養(yǎng)時，隨細(xì)胞生長時間延長，CO2積累增多，在超過緩沖范圍之后，營養(yǎng)液酸化逐漸變黃色，這時如不及時調(diào)節(jié)pH，會對細(xì)胞產(chǎn)生不利影響，嚴(yán)重時可使細(xì)胞退變死亡。培養(yǎng)液中加N-(2-羥乙基)N’-2-乙烷磺酸（N-2Hydroxyethylpiperazme-N’-2-ethanesulionicacid，HEPES)或用5％CO2溫箱培養(yǎng)可使pH維持穩(wěn)定。用含磷酸鹽緩沖系統(tǒng)培養(yǎng)液時，可因瓶口漏氣，CO2溢出，也可能由于培養(yǎng)瓶塞洗刷不潔，殘留堿性物質(zhì)所致，使之變?yōu)閴A性而呈紅色。更換營養(yǎng)液的時間，可依據(jù)營養(yǎng)物質(zhì)的消耗而定，細(xì)胞生長旺盛時，2～3d更換一次；生長緩慢時，3～4d更換為宜。需特別注意，各種細(xì)胞對pH的要求不同。[詳細(xì)]
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