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脂肪酸β氧化速率比色法檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
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2018-11-18 10:00 1243閱讀次數(shù)
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脂肪酸β氧化速率比色法檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途脂肪酸β氧化速率(βoxidationrate)比色法檢測(cè)試劑是一種旨在通過棕櫚酰肉堿氧化依賴性鐵氰化物還原,即單位時(shí)間還原產(chǎn)物的峰值降低,即采用比色法來測(cè)定線粒體裂解樣品中脂肪酸β氧化速率的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞、組織中線粒體裂解懸液樣品(動(dòng)物、人體等)脂肪酸β氧化速率的檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景脂肪酸β氧化過程(β-oxidation)在動(dòng)物組織的線粒體發(fā)生的脂肪酸代謝通路,可概括為活化、轉(zhuǎn)移、β氧化及Z后經(jīng)三羧酸循環(huán)被徹底氧化生成CO2和H2O,并釋放能量等四個(gè)階段,是體內(nèi),尤其是組織器官,例如肝臟、心臟和骨骼肌等能量內(nèi)平衡的關(guān)鍵代謝通路。食物中甘油三酯提供體內(nèi)三分之一的能量供給,骨骼肌和心臟消耗80%的總能量。脂肪酸代謝異常,將導(dǎo)致脂質(zhì)聚集在非脂肪組織內(nèi),產(chǎn)生慢性病的病理基礎(chǔ),例如糖尿病、心衰、肥胖癥等。其中β氧化,包括脫氫、水合、二次脫氫和硫解,是將活化的各種長度脂酰輔酶酯(acylCoAesters)不斷縮短為乙酰輔酶A(acetylCoA)單位,Z后經(jīng)過三羧酸循環(huán)和呼吸鏈氧化成CO2和水。脂?;o酶A脫氫酶(acylCoAdehydrogenase;AD;EC.1.3.99.3)是脂肪酸代謝進(jìn)入β-氧化后工作的重要酶之一。通過底物棕櫚酰肉堿(palmitoylcarnitine)的氧化產(chǎn)生的電子,由鐵氰化物(ferricyanide)捕獲而還原,其還原速率的檢測(cè),來評(píng)價(jià)β氧化的速率,即吸光值(420nm波長)的下降與時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系。產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)20毫升反應(yīng)液(ReagentB)2毫升底物液A(ReagentC)1毫升底物液B(ReagentD)1毫升陰性液(ReagentE)1毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存反應(yīng)液(ReagentB)、底物液A(ReagentC)和底物液B(ReagentD)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;底物液A(ReagentC)和底物液B(ReagentD)避免光照;有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于反應(yīng)操作的容器比色皿:用于比色的容器分光光度儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如純化線粒體),至于冰槽里備用開啟并設(shè)定好分光光度儀(溫度為25℃):波長420nm和470nm,間隔1分鐘,讀數(shù)6次(共5分鐘),并置零從-20℃冰箱里取出試劑,置于冰槽里融化;底物液A(ReagentC)和底物液B(ReagentD)避免光照緩沖液(ReagentA)室溫下均衡溫度背景對(duì)照測(cè)定移取750微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入50微升底物液A(ReagentC)加入50微升底物液B(ReagentD)上下傾倒數(shù)次,混勻在25℃溫度下孵育3分鐘加入50微升陰性液(ReagentE)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照【(OD420OD470)0分鐘-(OD420OD470)5分鐘】樣品測(cè)定移取750微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入50微升底物液A(ReagentC)加入50微升底物液B(ReagentD)上下傾倒數(shù)次,混勻在25℃溫度下孵育3分鐘加入50微升待測(cè)樣品(500微克線粒體蛋白)(注意:樣品須清澈)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品讀數(shù)【(OD420OD470)0分鐘-(OD420OD470)5分鐘】四、計(jì)算氧化速率[(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X1(體系容量;毫升)X樣品稀釋倍數(shù)]÷[0.5(樣品質(zhì)量;毫克)X105(毫摩爾吸光系數(shù))X5(反應(yīng)時(shí)間;分鐘)]=微摩爾鐵氰化物還原/分鐘/毫克注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為20次操作,包括背景對(duì)照操作時(shí),須戴手套系統(tǒng)操作過程中,背景測(cè)定只需1次樣品須澄清,至關(guān)重要加樣后3秒內(nèi)比色測(cè)定測(cè)定值由高到低變化;測(cè)定可持續(xù)5分鐘比色測(cè)定后,比色皿須清洗徹底樣本測(cè)定0分鐘讀數(shù)高于5分鐘讀數(shù)表明具有氧化功能建議待測(cè)樣本線粒體蛋白濃度為500微克/50微升(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-30030.1)如果待測(cè)樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度本公司提供系列脂肪酸代謝檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感
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脂肪酸β氧化速率比色法檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 脂肪酸β氧化速率比色法檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途脂肪酸β氧化速率(βoxidationrate)比色法檢測(cè)試劑是一種旨在通過棕櫚酰肉堿氧化依賴性鐵氰化物還原,即單位時(shí)間還原產(chǎn)物的峰值降低,即采用比色法來測(cè)定線粒體裂解樣品中脂肪酸β氧化速率的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞、組織中線粒體裂解懸液樣品(動(dòng)物、人體等)脂肪酸β氧化速率的檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景脂肪酸β氧化過程(β-oxidation)在動(dòng)物組織的線粒體發(fā)生的脂肪酸代謝通路,可概括為活化、轉(zhuǎn)移、β氧化及Z后經(jīng)三羧酸循環(huán)被徹底氧化生成CO2和H2O,并釋放能量等四個(gè)階段,是體內(nèi),尤其是組織器官,例如肝臟、心臟和骨骼肌等能量內(nèi)平衡的關(guān)鍵代謝通路。食物中甘油三酯提供體內(nèi)三分之一的能量供給,骨骼肌和心臟消耗80%的總能量。脂肪酸代謝異常,將導(dǎo)致脂質(zhì)聚集在非脂肪組織內(nèi),產(chǎn)生慢性病的病理基礎(chǔ),例如糖尿病、心衰、肥胖癥等。其中β氧化,包括脫氫、水合、二次脫氫和硫解,是將活化的各種長度脂酰輔酶酯(acylCoAesters)不斷縮短為乙酰輔酶A(acetylCoA)單位,Z后經(jīng)過三羧酸循環(huán)和呼吸鏈氧化成CO2和水。脂?;o酶A脫氫酶(acylCoAdehydrogenase;AD;EC.1.3.99.3)是脂肪酸代謝進(jìn)入β-氧化后工作的重要酶之一。通過底物棕櫚酰肉堿(palmitoylcarnitine)的氧化產(chǎn)生的電子,由鐵氰化物(ferricyanide)捕獲而還原,其還原速率的檢測(cè),來評(píng)價(jià)β氧化的速率,即吸光值(420nm波長)的下降與時(shí)間的對(duì)應(yīng)關(guān)系。產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)20毫升反應(yīng)液(ReagentB)2毫升底物液A(ReagentC)1毫升底物液B(ReagentD)1毫升陰性液(ReagentE)1毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存反應(yīng)液(ReagentB)、底物液A(ReagentC)和底物液B(ReagentD)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;底物液A(ReagentC)和底物液B(ReagentD)避免光照;有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于反應(yīng)操作的容器比色皿:用于比色的容器分光光度儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如純化線粒體),至于冰槽里備用開啟并設(shè)定好分光光度儀(溫度為25℃):波長420nm和470nm,間隔1分鐘,讀數(shù)6次(共5分鐘),并置零從-20℃冰箱里取出試劑,置于冰槽里融化;底物液A(ReagentC)和底物液B(ReagentD)避免光照緩沖液(ReagentA)室溫下均衡溫度背景對(duì)照測(cè)定移取750微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入50微升底物液A(ReagentC)加入50微升底物液B(ReagentD)上下傾倒數(shù)次,混勻在25℃溫度下孵育3分鐘加入50微升陰性液(ReagentE)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照【(OD420OD470)0分鐘-(OD420OD470)5分鐘】樣品測(cè)定移取750微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿加入100微升反應(yīng)液(ReagentB)加入50微升底物液A(ReagentC)加入50微升底物液B(ReagentD)上下傾倒數(shù)次,混勻在25℃溫度下孵育3分鐘加入50微升待測(cè)樣品(500微克線粒體蛋白)(注意:樣品須清澈)上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品讀數(shù)【(OD420OD470)0分鐘-(OD420OD470)5分鐘】四、計(jì)算氧化速率[(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X1(體系容量;毫升)X樣品稀釋倍數(shù)]÷[0.5(樣品質(zhì)量;毫克)X105(毫摩爾吸光系數(shù))X5(反應(yīng)時(shí)間;分鐘)]=微摩爾鐵氰化物還原/分鐘/毫克注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為20次操作,包括背景對(duì)照操作時(shí),須戴手套系統(tǒng)操作過程中,背景測(cè)定只需1次樣品須澄清,至關(guān)重要加樣后3秒內(nèi)比色測(cè)定測(cè)定值由高到低變化;測(cè)定可持續(xù)5分鐘比色測(cè)定后,比色皿須清洗徹底樣本測(cè)定0分鐘讀數(shù)高于5分鐘讀數(shù)表明具有氧化功能建議待測(cè)樣本線粒體蛋白濃度為500微克/50微升(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-30030.1)如果待測(cè)樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度本公司提供系列脂肪酸代謝檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
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2016-03-10 00:00
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- Ca-ATP酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途ATP酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上,是生物膜上的一種蛋白酶,機(jī)體在缺氧及等狀態(tài)下,ATP酶受到損傷,活力下降。ATP酶活力的大小是各種細(xì)胞能量代謝及功能有無損傷的重要指標(biāo)。本測(cè)試盒可測(cè)鈉鉀ATP酶、鈣鎂ATP酶的活性。樣品為各種組織及紅細(xì)胞等,本法的Zda特點(diǎn)是樣品前處理不需要高速離心機(jī),方法簡便、快速。產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)6毫升反應(yīng)液(ReagentB)6毫升底物液(ReagentC)6毫升陰性液(ReagentD)6毫升標(biāo)準(zhǔn)品(reagentE)6微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存反應(yīng)液(ReagentB)和底物液(ReagentC)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;底物液(ReagentC)避免光照,有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于反應(yīng)液配制的容器微型臺(tái)式離心機(jī):用于樣品制備比色皿或酶標(biāo)板:用于比色的容器分光光度儀:用于比色分析酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的反應(yīng)液(ReagentB)和底物液(ReagentC)置入冰槽里融化。底物液(ReagentC)避免光照。然后進(jìn)行下列操作。樣品準(zhǔn)備選擇一:血漿樣品1.準(zhǔn)備好ACD抗凝管(注意:避免使用肝素或EDTA抗凝管)2.抽取2毫升血液,置于抗凝管里3.放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為5000g4.小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分(注意:避免觸碰白色液體層)5.即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存6.(選擇步驟)移取50微升進(jìn)行蛋白定量測(cè)定選擇二:血清樣品1.準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲(chǔ)存管2.抽取2毫升血液,置于儲(chǔ)存管里3.室溫下,靜置30分鐘,直至血液凝結(jié)4.放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為5000g5.小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分(注意:避免觸碰白色液體層)6.即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存7.(選擇步驟)移取50微升進(jìn)行蛋白定量測(cè)定選擇三:組織樣本準(zhǔn)確稱取組織重量,按照重量(g):體積(ml)=1:9的比例,加入9倍的是PBS或者生理鹽水,冰水浴條件下機(jī)械勻漿,2500轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,去上清液待測(cè)。二、測(cè)定準(zhǔn)備1.準(zhǔn)備好上述待測(cè)樣品,置于冰槽里2.設(shè)定好分光光度儀(溫度為37℃):波長440nm三、樣本測(cè)定1.在96孔酶標(biāo)板上做好相應(yīng)標(biāo)記:背景對(duì)照,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔2.分別移取50微升緩沖液(ReagentA)到相應(yīng)孔中3.設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)品孔(加入50微升標(biāo)準(zhǔn)品),樣本孔(加入50微升樣本)陰性液孔(加入50微升陰性液(ReagentD)4.分別加入50微升反應(yīng)液(ReagentB)5.輕輕搖動(dòng)96孔酶標(biāo)板6.在37℃溫度下孵育2分鐘7.放進(jìn)酶標(biāo)儀,置零8.取出酶標(biāo)板,分別加入50微升底物液(ReagentC)9.輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板10.即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè),包括(0分鐘初始讀數(shù)和5分鐘讀數(shù))四,樣本計(jì)算樣本活性=樣本OD值/標(biāo)準(zhǔn)OD值*標(biāo)品濃度[詳細(xì)]
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細(xì)胞彈性蛋白含量比色法(TPPS)定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 細(xì)胞彈性蛋白含量比色法(TPPS)定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途細(xì)胞彈性蛋白含量比色法(TPPS)定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過酸性加熱萃取并轉(zhuǎn)化為可溶性彈性蛋白,與四苯基卟吩四磺酸染料結(jié)合,在堿性條件下,釋放棕紅色染料,酸性處理后,由分光光度儀比色分析,定量檢測(cè)細(xì)胞樣品中彈性蛋白含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的??梢杂糜跈z測(cè)各種彈性蛋白,包括原彈性蛋白(tropoelastin)、致山黧豆中毒彈性蛋白(lathyrogenic)、α彈性蛋白、k-彈性蛋白等。適用于各種細(xì)胞(動(dòng)物、人體等)或培養(yǎng)上清彈性蛋白水平檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,檢測(cè)準(zhǔn)確。技術(shù)背景彈性蛋白(elastin)是一種不溶性的非極性的堿性蛋白,具有高度抗拉能力(tensilestrength),存在于大動(dòng)脈、氣管、支氣管、韌帶等結(jié)締組織細(xì)胞間。彈性蛋白由多肽二價(jià)交聯(lián)隨機(jī)扭絞(randomlykinked)組成,通過鎖鏈素(desmosine)和異鎖鏈素(isodesmosine)相連。動(dòng)物細(xì)胞上的原彈性蛋白(tropoelastin)為單體,可溶性,分子量為62至72Kd。與微纖絲(microfibril)糖蛋白結(jié)合,形成彈性基質(zhì)(matrix)或彈性組織筏(raft),構(gòu)成細(xì)胞膜表面。通過酸性加熱萃取彈性蛋白,并轉(zhuǎn)化為可溶性衍生物,α彈性蛋白、k-彈性蛋白等,進(jìn)而使用四苯基卟吩四磺酸(5,10,15,20-tetraphenylporphin-21H,23H-tetra-sulfonate;TPPS)染料與彈性蛋白發(fā)生溫克爾曼反應(yīng)(Winkelmanreaction)結(jié)合,然后在堿性條件下釋放出棕紅色染料,酸性處理后,呈現(xiàn)綠色,通過分光光度儀(445nm波長)測(cè)定,分析彈性蛋白的含量。產(chǎn)品內(nèi)容萃取液(ReagentA)毫升沉淀液(ReagentB)毫升清理液(ReagentC)毫升染色液(ReagentD)毫升濃縮液(ReagentE)毫升解離液(ReagentF)毫升強(qiáng)化液(ReagentG)毫升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)毫升稀釋液(ReagentI)毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;染色液(ReagentD)避免光照;試劑具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于標(biāo)準(zhǔn)液配制和樣品制備的容器15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器細(xì)胞刮脫棒:用于細(xì)胞脫離平式搖蕩儀:用于樣品操作干式恒溫儀:用于樣品孵育微型臺(tái)式離心機(jī):用于樣品操作200微升1厘米光徑比色皿或96孔板:用于比色分析的容器分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟一、樣品預(yù)處理1)細(xì)胞上清處理移取300微升細(xì)胞培養(yǎng)上清到1.5毫升離心管加入xx微升萃取液(ReagentA)渦旋振蕩15秒放進(jìn)100℃干式恒溫儀孵育60分鐘置于室溫下15分鐘冷卻放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心移取400微升上清液到新的1.5毫升離心管加入xx微升4℃預(yù)冷的沉淀液(ReagentB)在冰槽里孵育30分鐘,期間每隔10分鐘渦旋振蕩15秒放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心抽去上清液,確保無液體殘留;沉淀顆粒透明且肉眼難以看見置于冰槽里備用2)細(xì)胞處理準(zhǔn)備好25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶或60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿的待測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞(1至5X106細(xì)胞)小心抽去培養(yǎng)液小心加入xx毫升清理液(ReagentC),覆蓋生長表面小心抽去清理液使用細(xì)胞刮脫棒輕柔刮脫細(xì)胞(注意:可以使用胰酶消化)加入xx毫升清理液(ReagentC),混勻細(xì)胞移入到預(yù)冷的15毫升錐形離心管(注意:懸浮細(xì)胞從這一步驟開始)放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液,但保留300微升,混勻細(xì)胞顆粒群轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管加入xx微升萃取液(ReagentA)渦旋振蕩15秒放進(jìn)100℃干式恒溫儀孵育60分鐘置于室溫下15分鐘冷卻放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心移取400微升上清液到新的1.5毫升離心管(注意:上清液可能會(huì)呈現(xiàn)黃色)加入xx微升4℃預(yù)冷的沉淀液(ReagentB)在冰槽里孵育30分鐘,期間每隔10分鐘渦旋振蕩15秒放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心抽去上清液(注意:確保無液體殘留;沉淀顆粒透明且肉眼難以看見)置于冰槽里備用二、標(biāo)準(zhǔn)樣品配制準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管,標(biāo)記為1至4號(hào)管分別加入xx微升稀釋液(ReagentI)到1至4號(hào)管移取xx微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)到1號(hào)管,混勻小心移取xx微升1號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)到2號(hào)管,混勻小心移取xx微升2號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)到3號(hào)管,混勻小心抽去xx微升3號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)將1至4號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表管號(hào)稀釋液(ReagentI)標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)標(biāo)準(zhǔn)彈性蛋白含量1xx微升xx微升xx微克2xx微升xx微升1號(hào)管xx微克3xx微升xx微升2號(hào)管xx微克4xx微升背景讀數(shù)0分別加入xx微升4℃預(yù)冷的沉淀液(ReagentB)到上述標(biāo)準(zhǔn)管里在冰槽里孵育30分鐘,期間每隔10分鐘渦旋振蕩15秒放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心抽去上清液(注意:確保無液體殘留;沉淀顆粒透明且肉眼難以看見)置于冰槽里備用標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定分別加入xx微升染色液(ReagentD)到上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)里(注意:用槍頭抽打使沉淀顆粒溶解)分別加入xx微升濃縮液(ReagentE)渦旋振蕩混勻室溫下,孵育60分鐘,期間每隔15分鐘渦旋振蕩15秒放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心抽去上清液(注意:確保沒有液體殘留)加入xx微升解離液(ReagentF)用槍頭抽打使沉淀顆粒溶解,并輔以渦旋震蕩(注意:確保充分溶解)加入xx微升強(qiáng)化液(ReagentG),混勻(注意:呈現(xiàn)綠色)轉(zhuǎn)移到新的200微升1厘米光徑的比色皿或96孔板即刻放進(jìn)分光光度儀或酶標(biāo)儀檢測(cè)(波長445nm):獲得標(biāo)準(zhǔn)樣品吸光讀數(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至11四次構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為吸光讀數(shù);橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)彈性蛋白含量(微克)(注意:標(biāo)準(zhǔn)樣品吸光讀數(shù)背景讀數(shù))樣品測(cè)定加入xx微升染色液(ReagentD)到上述配制的待測(cè)樣品管里(注意:用槍頭抽打使沉淀顆粒溶解)分別加入xx微升濃縮液(ReagentE)渦旋振蕩混勻室溫下,孵育60分鐘,期間每隔15分鐘渦旋振蕩15秒放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心抽去上清液(注意:確保沒有液體殘留)加入xx微升解離液(ReagentF)用槍頭抽打使沉淀顆粒溶解,并輔以渦旋震蕩(注意:確保充分溶解)加入xx微升強(qiáng)化液(ReagentG),混勻(注意:呈現(xiàn)綠色)轉(zhuǎn)移到新的200微升1厘米光徑的比色皿或96孔板即刻放進(jìn)分光光度儀或酶標(biāo)儀檢測(cè)(波長445nm):獲得樣品吸光讀數(shù)根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)彈性蛋白含量(微克)(注意:待測(cè)樣品吸光讀數(shù)背景讀數(shù))濃度計(jì)算注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為25次操作,包括標(biāo)準(zhǔn)樣品本產(chǎn)品檢測(cè)范圍為5至100微克彈性蛋白操作時(shí),須戴手套系統(tǒng)操作時(shí),標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定只需1次彈性蛋白沉淀顆粒微小透明,肉眼難以看見操作需要非常細(xì)致,包括避免液體殘留、顆粒溶解等,否則會(huì)產(chǎn)生誤差試劑具有腐蝕性,嚴(yán)格注意操作安全孵育時(shí),避免光照如果樣品彈性蛋白含量過低,可以濃縮樣品或增加樣品量樣品濃度可以表述為:微克彈性蛋白/細(xì)胞量;微克彈性蛋白/細(xì)胞總蛋白等通常1X105細(xì)胞含有40微克彈性蛋白本公司提供系列彈性蛋白檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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植物游離氨基酸含量比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 植物游離氨基酸含量比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途植物游離氨基酸含量比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過顯色染料茚三酮與游離氨基酸的氨基發(fā)生反應(yīng),在熱處理下,產(chǎn)生藍(lán)色復(fù)合物,由分光光度儀比色分析,定量檢測(cè)樣品中游離氨基酸含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心設(shè)計(jì)、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種植物組織,包括種子(seed)、葉片(leaf)、根(root)等裂解懸液樣品的游離氨基酸含量檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,檢測(cè)準(zhǔn)確。技術(shù)背景氨基酸(aminoacid或α-aminoacid)是一種含有胺和羧基功能基團(tuán)的分子,為生物體中Z必須的元素。根據(jù)其側(cè)鏈的不同,分成四類(弱酸、弱堿、極性、非極性)和20種各種不同的氨基酸;根據(jù)其光學(xué)異構(gòu)體(opticalisomers),又分成L型和D型。L-氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的主要結(jié)構(gòu)分子。氨基酸是多肽、蛋白質(zhì)和輔酶等的組成單位,具有各種代謝作用和營養(yǎng)價(jià)值?;谟坞x氨基酸的游離氨基與茚三酮(ninhydrin)反應(yīng),產(chǎn)生中間產(chǎn)物酮酸(ketoacid)和氨分子,進(jìn)而在熱處理下,進(jìn)行脫羧基過程(僅發(fā)生于游離氨基酸),同時(shí)產(chǎn)生藍(lán)色復(fù)合物,在分光光度儀(570nm波長)下,呈現(xiàn)吸光峰值的變化,來定量分析游離氨基酸的總含量。其反應(yīng)系統(tǒng)如下:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升萃取液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升反應(yīng)液(ReagentD)毫升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存萃取液(ReagentB)和標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;反應(yīng)液(ReagentD)具有揮發(fā)性,嚴(yán)格密閉瓶蓋,避免光照;有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于標(biāo)準(zhǔn)液配制和樣品操作的容器15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器干式恒溫儀:用于反應(yīng)孵育DOUNCE勻漿器:用于裂解組織微型臺(tái)式離心機(jī):用于樣品操作比色皿:用于比色分析的容器分光光度儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟一、樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好新鮮的植物組織(葉片、谷粒、種子等),并秤重以確定1克組織重量(選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管(選擇步驟)加入xx毫升清理液(ReagentA)清洗1次即刻用刀片切碎組織放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管加入預(yù)冷的xx毫升萃取液(ReagentB)渦旋震蕩5秒,充分混勻即刻放進(jìn)預(yù)冷的DOUNCE勻漿器,在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約80下)將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管,放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為5000g(或7500RPM,例如eppendorf5415)小心移出上清液(注意:不要觸碰沉淀物)到另一個(gè)新的預(yù)冷的1.5毫升離心管(選擇步驟)如果上清液含有肉眼可見的殘?jiān)?,重?fù)離心5分鐘一次,速度為5000g(或7500RPM,例如eppendorf5415)移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-30030.1)放進(jìn)-70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用二、標(biāo)準(zhǔn)樣品配制準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管,標(biāo)記為1至5號(hào)管分別加入xx微升緩沖液(ReagentC)到1至5號(hào)管移取xx微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到1號(hào)管,混勻小心移取xx微升1號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到2號(hào)管,混勻小心移取xx微升2號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到3號(hào)管,混勻小心移取xx微升3號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)到4號(hào)管,混勻?qū)?至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表管號(hào)緩沖液(ReagentC)標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)標(biāo)準(zhǔn)氨基酸濃度1xx微升xx微升xx微摩爾/升2xx微升xx微升1號(hào)管xx微摩爾/升3xx微升xx微升2號(hào)管xx微摩爾/升4xx微升xx微升3號(hào)管xx微摩爾/升5xx微升00微摩爾/升標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定加入xx微升緩沖液(ReagentC)到1.5毫升離心管加入xx微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)加入xx微升反應(yīng)液(ReagentD)渦旋震蕩15秒放進(jìn)90℃干式恒溫儀孵育5分鐘,避免光照放進(jìn)冰槽里1分鐘轉(zhuǎn)移到比色皿即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)(波長570nm):獲得吸光讀數(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至8四次構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為吸光讀數(shù);橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)氨基酸濃度(微摩爾/升)樣品測(cè)定加入xx微升緩沖液(ReagentC)到1.5毫升離心管加入500微升待測(cè)樣品加入xx微升反應(yīng)液(ReagentD)渦旋震蕩15秒放進(jìn)90℃干式恒溫儀孵育5分鐘,避免光照放進(jìn)冰槽里1分鐘轉(zhuǎn)移到比色皿即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)(波長570nm):獲得吸光讀數(shù)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)氨基酸濃度(微摩爾/升)濃度計(jì)算根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)氨基酸濃度(微摩爾/升)X稀釋倍數(shù)=(微摩爾/升)注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為25次操作,包括標(biāo)準(zhǔn)樣品避免使用Tris緩沖液、尿素等胺類物質(zhì)處理樣品操作時(shí),須戴手套系統(tǒng)操作時(shí),標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定只需1次反應(yīng)液(ReagentD)具有揮發(fā)性,嚴(yán)格密閉瓶蓋,避免光照孵育時(shí),避免光照本公司提供系列氨基酸檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感[詳細(xì)]
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2024-09-30 10:02
產(chǎn)品樣冊(cè)
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氧化低密度脂蛋白說明書試劑盒檢測(cè)說明
- 氧化低密度脂蛋白說明書試劑盒檢測(cè)說明本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T3g/L-160g/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平。用純化的人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),再與HRP標(biāo)記的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(320g/L)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。160g/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液80g/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液40g/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20g/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10g/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150l的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50l,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測(cè)樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-10-09 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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組織氧化應(yīng)激活性氧羥自由基比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 組織氧化應(yīng)激活性氧羥自由基比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書[詳細(xì)]
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2015-09-16 00:00
專利
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組織乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-28 00:00
期刊論文
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組織半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織半胱氨酸(cysteine)含量比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-19 00:00
期刊論文
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細(xì)胞糖原硫酸蒽酮比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 細(xì)胞糖原硫酸蒽酮比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書[詳細(xì)]
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2015-04-14 00:00
選購指南
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組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書...
- 組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途組織乙醛脫氫酶2活性比色法定量檢測(cè)試劑盒是一種旨在使用乙醛脫氫酶2敏感性YZ劑,通過檢測(cè)反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)還原后峰值的,即采用比色法來測(cè)定組織裂解萃取液樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織裂解懸液樣品(動(dòng)物、人體等)乙醛脫氫酶2的特異活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景乙醛脫氫酶(aldehydedehydrogenase;ALDH;EC1.2.1.3),又稱為乙醛NAD氧化還原酶(aldehydeNAD-oxidoreductase)是一類NAD(P)依賴性酶,催化廣譜的外源性或內(nèi)源性脂肪族和芳香族乙醛類底物氧化,包括乙醇、氨基酸、生物胺(biogenicamine)、維生素、固醇類、脂質(zhì)、藥物和環(huán)境分子等代謝產(chǎn)物。乙醛脫氫酶是乙醇在體內(nèi)分解代謝過程中兩種主要酶之一。乙醛脫氫酶把乙醛中的兩個(gè)氫原子脫掉,使乙醛轉(zhuǎn)化為乙酸,生成的乙酸進(jìn)入脂肪酸氧化途徑,Z終被氧化成二氧化碳和水。乙醛脫氫酶主要有兩種同工酶:ALDH1和ALDH2。ALDH1存在于胞液中,ALDH2存在于線粒體中,ALDH2比ALDH1的活性高。乙醛脫氫酶的缺少,使酒精不能被完全分解為水和二氧化碳,而是以乙醛繼續(xù)留在體內(nèi),使人喝酒后產(chǎn)生惡心欲吐、昏迷不適等醉酒癥狀?;趤碜杂谝掖即x產(chǎn)生的乙醛(acetaldehyde),在7-羥基-3-(4-羥苯基)-異黃酮-7-糖苷(Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside;Daidzin)存在與否的情況下,由乙醛脫氫酶2的催化作用,轉(zhuǎn)化為乙酸(aceticacid)產(chǎn)物后,通過測(cè)定反應(yīng)體系中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizedreducednicotinamideadeninedinucleotide;NAD)轉(zhuǎn)化為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)的變化(340nm波長),來定量分析乙醛脫氫酶2的特異活性。乙醛脫氫酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升反應(yīng)液(ReagentD)毫升底物液(ReagentE)毫升陰性液(ReagentF)毫升專性液(ReagentG)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存緩沖液(ReagentC)、反應(yīng)液(ReagentD)、底物液(ReagentE)和專性液(ReagentG)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;反應(yīng)液(ReagentD)和底物液(ReagentE)避免光照;有效保證6月[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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組織基質(zhì)金屬蛋白酶2活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途組織基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過含硫多肽底物以及特定YZ劑存在與否的情況下,受到MMP2的水解,釋放出巰基,進(jìn)而使用Ellman試劑,產(chǎn)生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物吸光峰值的變化,即采用比色法來測(cè)定組織裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或完全純化酶樣品中基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性定量檢測(cè),以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術(shù)背景基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinases;MMPs)是一類結(jié)構(gòu)高度同源的分泌型或膜相關(guān)性鋅內(nèi)肽酶的總稱,因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。其功能在于分解細(xì)胞外基質(zhì)成分。迄今為止發(fā)現(xiàn)的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix)成分,同時(shí)參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、組織再吸收(tissueresorption)、疾病發(fā)生,例如關(guān)節(jié)炎、癌細(xì)胞浸入轉(zhuǎn)移等。根據(jù)降解的底物不同可將MMPs分為4大類:(1)膠原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖;(2)明膠酶(Ⅳ型膠原酶):MMP2、MMP9,又稱明膠酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維;(3)基質(zhì)溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金屬蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內(nèi)絕大多數(shù)細(xì)胞并不儲(chǔ)備MMPs,當(dāng)需要MMPs的信號(hào)傳遞到細(xì)胞后才臨時(shí)合成,合成的MMPs以無活性的酶原(proenzyme)形式分泌到細(xì)胞外,隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活,一種激活的MMPs可激活另一種MMPs,形成瀑布效應(yīng)。基質(zhì)金屬蛋白酶-2,又稱明膠酶A(gelatinase-A)或IV型膠原酶(typeIVcollagenase),其前體分子量為72kDa,激活后分子量為62和56kDa。它在血清或細(xì)胞上清中濃度通常為10至200納克/毫升。它的作用目標(biāo)是天然和變性膠原蛋白(collagens)、纖維連接蛋白(fibronectin)、彈性纖維蛋白(elastin)、層粘連蛋白-5(laminin-5)、前體腫瘤壞死因子-α(pro-TNF-α)和神經(jīng)(蛋白)聚糖(neurocan)?;|(zhì)金屬蛋白酶-2與腫瘤發(fā)展與轉(zhuǎn)移、血管形成、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病有關(guān)?;诤蚨嚯模╰hiopeptide)底物Ac-PLG(2-mercapto-4-methyl-pentanoyl)-LG-OC2H5,在特異性YZ劑OA-Hy存在與否的條件下,受到MMP2的水解,釋放出巰基(sulfhydrylgroup),進(jìn)而與Ellman試劑5,5-二硫基-雙(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid);DTNB]反應(yīng)后,產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitrobenzoicacid;TNB),通過其吸收峰值的變化(412nm波長),來定量測(cè)定組織基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性。基質(zhì)金屬蛋白酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過含硫多肽底物以及特定YZ劑存在與否的情況下,受到MMP2的水解,釋放出巰基,進(jìn)而使用Ellman試劑,產(chǎn)生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物吸光峰值的變化,即采用比色法來測(cè)定細(xì)胞裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或完全純化酶樣品中基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性定量檢測(cè),以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術(shù)背景基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinases;MMPs)是一類結(jié)構(gòu)高度同源的分泌型或膜相關(guān)性鋅內(nèi)肽酶的總稱,因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。其功能在于分解細(xì)胞外基質(zhì)成分。迄今為止發(fā)現(xiàn)的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix)成分,同時(shí)參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、組織再吸收(tissueresorption)、疾病發(fā)生,例如關(guān)節(jié)炎、癌細(xì)胞浸入轉(zhuǎn)移等。根據(jù)降解的底物不同可將MMPs分為4大類:(1)膠原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖;(2)明膠酶(Ⅳ型膠原酶):MMP2、MMP9,又稱明膠酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維;(3)基質(zhì)溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金屬蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內(nèi)絕大多數(shù)細(xì)胞并不儲(chǔ)備MMPs,當(dāng)需要MMPs的信號(hào)傳遞到細(xì)胞后才臨時(shí)合成,合成的MMPs以無活性的酶原(proenzyme)形式分泌到細(xì)胞外,隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活,一種激活的MMPs可激活另一種MMPs,形成瀑布效應(yīng)。基質(zhì)金屬蛋白酶-2,又稱明膠酶A(gelatinase-A)或IV型膠原酶(typeIVcollagenase),其前體分子量為72kDa,激活后分子量為62和56kDa。它在血清或細(xì)胞上清中濃度通常為10至200納克/毫升。它的作用目標(biāo)是天然和變性膠原蛋白(collagens)、纖維連接蛋白(fibronectin)、彈性纖維蛋白(elastin)、層粘連蛋白-5(laminin-5)、前體腫瘤壞死因子-α(pro-TNF-α)和神經(jīng)(蛋白)聚糖(neurocan)?;|(zhì)金屬蛋白酶-2與腫瘤發(fā)展與轉(zhuǎn)移、血管形成、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病有關(guān)。基于含硫多肽(thiopeptide)底物Ac-PLG(2-mercapto-4-methyl-pentanoyl)-LG-OC2H5,在特異性YZ劑OA-Hy存在與否的條件下,受到MMP2的水解,釋放出巰基(sulfhydrylgroup),進(jìn)而與Ellman試劑5,5-二硫基-雙(2-硝基苯甲酸)[5,5’-dithiobis-(2-nitrobenzoicacid);DTNB]反應(yīng)后,產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitrobenzoicacid;TNB),通過其吸收峰值的變化(412nm波長),來定量測(cè)定細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性?;|(zhì)金屬蛋白酶2反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶(ISOCITRATEDEHYDROGENASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸酸(NADP)還原后峰值的變化,即采用比色法來測(cè)定細(xì)菌裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)菌細(xì)胞裂解懸液樣品異檸檬酸脫氫酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景異檸檬酸脫氫酶(isocitratedehydrogenase;IDH;EC1.1.1.42)是三羧酸循環(huán)(citricacidcycle)或克雷布斯循環(huán)(Krehescycle)中的酶之一,存在于所有生物體內(nèi)。細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶有2種同工酶:同源雙體,40至45Kd分子量;單體,80至100Kd分子量。在細(xì)菌體內(nèi),氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(oxidizedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate;NADP)依賴性異檸檬酸脫氫酶獲得輔酶NADP和輔助因子錳或鎂離子(Mn)的推動(dòng),脫去底物異檸檬酸的氫和二氧化碳(氧化性脫羧基作用),轉(zhuǎn)化為α-酮戊二酸(α-ketoglutarate),同時(shí)生成還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(reducedβ-Nicotinamideadeninedinucleotidephosphate;NADPH)。一旦磷酸化或在乙酸環(huán)境中,以及有限的葡萄糖條件下,異檸檬酸脫氫酶則失活,從而控制三羧酸循環(huán)和乙醛酸旁路(glyoxylatebypass)之間碳的流動(dòng)?;诋悪幟仕崦摎涿傅腘ADP依賴性,和作用后所產(chǎn)生的NADPH,通過分光光度儀的峰值變化(340nm波長),來定量分析異檸檬酸脫氫酶的活性。異檸檬酸脫氫酶反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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BEIZHUO 純化線粒體膜通道孔(MPTP)比色法檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- BEIZHUO純化線粒體膜通道孔(MPTP)比色法檢測(cè)試劑是一種旨在通過比色法檢測(cè)線粒體的體積(膨脹性)變化,來實(shí)時(shí)分析和觀察線粒體膜通道孔活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種純化線粒體膜通道孔活性的檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,活體檢測(cè),分辨率高,操作簡捷,性能穩(wěn)定。[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞PTEN活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 細(xì)胞PTEN活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途細(xì)胞PTEN活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用特異性合成底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3),在PTEN去磷酸化后,釋放出游離磷酸根,與孔雀綠染料發(fā)生顯色反應(yīng)后,采用比色法測(cè)定其峰值的變化,以此進(jìn)行測(cè)算單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)胞裂解懸液樣品的PTEN活性及其YZ劑的檢測(cè)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞凋亡、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景細(xì)胞張力蛋白同源在10號(hào)染色體缺失性磷酸酶(phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosometen;PTEN;EC3.1.3.67),又稱為多發(fā)性晚期腫瘤突變基因1(mutatedinmultipleadvancedcancers1;MMAC1),是一個(gè)腫瘤YZ基因,位于染色體10q23.3,轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物515kb,蛋白產(chǎn)物175氨基酸。PTEN蛋白含有一酪蛋白磷酸酶的功能區(qū)和約175個(gè)氨基酸左右的與骨架蛋白張力蛋白(tenasin)、輔助蛋白(auxilin)同源的區(qū)域,是一種雙重特異性磷酸酶,能使酪氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、磷酯酰肌醇(phosphoinositide)等去磷酸化。PTEN具有調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、防止細(xì)胞過度生長和分開裂解、參與細(xì)胞凋亡、粘附、遷移、浸潤,控制細(xì)胞內(nèi)磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate;PIP3)水平,調(diào)控Akt/PKB信號(hào)通路等功能。PTEN基因突變和缺失將導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移,以及多發(fā)性錯(cuò)構(gòu)瘤綜合征(Cowdensyndrome)等。基于底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸,在PTEN的催化下,水解產(chǎn)生磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2),同時(shí)釋放出游離磷酸根,進(jìn)而與孔雀綠染料發(fā)生顯色反應(yīng)產(chǎn)生其峰值的變化(660nm波長),以此測(cè)算PTEN的活性。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)120毫升裂解液(ReagentB)10毫升緩沖液(ReagentC)1毫升陰性液(ReagentD)1毫升反應(yīng)液(ReagentE)200微升終止液(ReagentF)1毫升顯色液(ReagentG)4毫升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)500微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存裂解液(ReagentB)、緩沖液(ReagentC)、反應(yīng)液(ReagentE)和顯色液(ReagentG)在-20℃冰箱里,避免反復(fù)凍融;其余的保存在4℃冰箱里;終止液(ReagentF)和顯色液(ReagentG)具有腐蝕性,避免直接用手接觸;顯色液(ReagentG)避免光照,有效保證6月用戶自備15毫升離心管:用于樣品處理的容器1.5毫升離心管:用于樣品處理和保存的容器細(xì)胞刮脫棒:用于貼壁細(xì)胞脫離(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品收集培養(yǎng)箱:用于孵育反應(yīng)物比色皿:用于比色的容器分光光度儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液放進(jìn)冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶或60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿的待測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞(5X106細(xì)胞)小心加入3毫升預(yù)冷的清理液(ReagentA),覆蓋生長表面小心抽去清理液使用細(xì)胞刮脫棒輕柔刮脫細(xì)胞加入3毫升清理液(ReagentA),混勻細(xì)胞移入到預(yù)冷的15毫升錐形離心管(注意:懸浮細(xì)胞從這一步驟開始)放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液加入500微升裂解液(ReagentB),充分混勻轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管QL渦旋震蕩15秒置于冰槽里孵育30分鐘放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf5415)小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管移取2微升進(jìn)行蛋白定量測(cè)定(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-HL30030.1)即刻放進(jìn)-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作二、測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如細(xì)胞裂解萃取液等),置于冰槽里(注意:樣品須澄清)設(shè)定好分光光度儀(溫度為30℃):波長為660nm,并置零準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管,標(biāo)記為1至5號(hào)管按下表分別加入陰性液(ReagentD)和標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)到每個(gè)離心管,混勻?qū)?至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表管號(hào)陰性液(ReagentD)標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentH)測(cè)定體系標(biāo)準(zhǔn)磷濃度10100微升20微摩爾/升225微升75微升15微摩爾/升350微升50微升10微摩爾/升475微升25微升5微摩爾/升5100微升00標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定移取20微升陰性液(ReagentD)到新的比色皿加入5微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液在37℃溫度下孵育10分鐘加入8微升終止液(ReagentF),混勻加入100微升顯色液(ReagentG),混勻室溫下靜置15分鐘,避免光照即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè):獲得吸光讀數(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至7四次構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為吸光單位(A);橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)磷濃度(微摩爾/升)樣品背景測(cè)定移取20微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入5微升待測(cè)樣品(總量100微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白)在37℃溫度下孵育10分鐘加入8微升終止液(ReagentF),混勻加入100微升顯色液(ReagentG),混勻室溫下靜置15分鐘,避免光照即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè):獲得吸光讀數(shù)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品背景對(duì)應(yīng)磷濃度樣品活性測(cè)定移取10微升緩沖液(ReagentC)到新的比色皿加入5微升待測(cè)樣品(總量100微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白)在37℃溫度下孵育2分鐘加入10微升反應(yīng)液(ReagentE)在37℃溫度下孵育10分鐘加入8微升終止液(ReagentF),混勻加入100微升顯色液(ReagentG),混勻室溫下靜置15分鐘,避免光照即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè):獲得吸光讀數(shù)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品活性對(duì)應(yīng)磷濃度計(jì)算樣品活性{[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品活性對(duì)應(yīng)磷濃度(微摩爾/升)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品背景對(duì)應(yīng)磷濃度(微摩爾/升)]X5(體系倍數(shù))X樣品稀釋倍數(shù)}÷10(反應(yīng)時(shí)間;分鐘)=納摩爾磷/毫升/分鐘÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=納摩爾磷/毫克/分鐘注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為25次操作,包括5次標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定操作時(shí),避免污染母液操作時(shí),須戴手套終止液(ReagentF)和顯色液(ReagentG)具有腐蝕性,避免直接用手接觸樣品切忌使用磷酸緩沖液和脫氧膽酸納處理比色測(cè)定后,比色皿須清洗徹底如果用戶沒有660nm波長,可以使用600至660nm的任一波長替代顯示綠色表明具有較強(qiáng)酶活性空白對(duì)照讀數(shù)應(yīng)小于0.2建議待測(cè)樣本蛋白濃度為100微克/5微升;如果樣本酶活性過低或過高,則可以增加或降低樣本量;(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-HL30030.1)鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶活性單位濃度定義:在37℃溫度下,pH8.0的情況下,每單位酶在單位時(shí)間內(nèi)(每分鐘)釋放1微摩爾的磷本公司提供系列磷酸化酶檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)準(zhǔn)確[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)菌蛋白酶(PROTEASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒說明書
- 細(xì)菌蛋白酶(PROTEASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途細(xì)菌蛋白酶(PROTEASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過底物偶氮酪蛋白受到蛋白酶水解,產(chǎn)生橘紅色產(chǎn)物的吸光峰值的變化,即采用比色法來測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)菌細(xì)胞裂解液以及培養(yǎng)上清樣品蛋白酶的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景蛋白酶(protease)又稱為肽酶(peptidase)或蛋白質(zhì)酶(proteinase),是一類蛋白水解的酶,屬于水解酶(hydrolase)家屬中一員,存在于所有生物體內(nèi)。通過肽鍵的水解,進(jìn)行蛋白質(zhì)的分解代謝,參與體內(nèi)血液凝結(jié)、補(bǔ)體系統(tǒng)、凋亡、細(xì)胞生長和分化等一系列生理活動(dòng)。蛋白酶基本分成6類,包括絲氨酸(serine)、蘇氨酸(threonine)、半胱氨酸(cysteine)、谷氨酸(glutamate)、天冬氨酸(aspartate)、金屬(metalloprotease)蛋白酶等;也可以分成酸性、中性和堿性蛋白酶等;還可以分成內(nèi)切肽酶,例如胰蛋白酶(trypsin),和外切肽酶,例如羧基肽酶A(carboxypeptidase)。細(xì)菌蛋白酶與碳和氮循環(huán)有關(guān);作為外毒素(exotoxin),也是細(xì)菌致病的毒力(virulence)因子;同時(shí)細(xì)菌蛋白酶可以應(yīng)用于食品、制藥、皮革、診斷、水處理、銀回收和潔凈劑工業(yè)等。同時(shí)據(jù)此用以識(shí)別革藍(lán)氏陰性細(xì)菌,例如枯草芽孢桿菌(Bac.Subtilis)等?;诘孜锱嫉业鞍祝╝zocasein或sulfanilamideazocasein),在細(xì)菌蛋白酶的催化水解下,產(chǎn)生橘紅色產(chǎn)物,通過其吸收峰值的變化(440nm波長),來定量分析蛋白酶的總活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容裂解液(ReagentA)毫升反應(yīng)液(ReagentB)毫升終止液(ReagentC)毫升中和液(ReagentD)毫升陰性液(ReagentE)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存反應(yīng)液(ReagentB)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里;終止液(ReagentC)和中和液(ReagentD)具有腐蝕性,注意操作安全;有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器微型臺(tái)式離心機(jī):用于樣品制備恒溫水槽:用于孵育反應(yīng)比色皿:用于比色的容器分光光度儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好500微升待測(cè)細(xì)菌(OD600=0.4至0.8,即1至2X107細(xì)胞/毫升)轉(zhuǎn)移到到1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為1000g(或3500RPM,例如EPPENDORF5415)小心抽去上清液加入xx微升裂解液(ReagentA),充分混勻QL渦旋震蕩15秒置于冰槽里15分鐘放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf5415)小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-30030.1)即刻放進(jìn)-70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如細(xì)菌裂解萃取液或培養(yǎng)上清等),置于冰槽里設(shè)定好分光光度儀(溫度為37℃):波長440nm,并置零實(shí)驗(yàn)開始前,將反應(yīng)液(ReagentB)置于65℃恒溫水槽孵育20分鐘后使用三、背景測(cè)定移取xx微升反應(yīng)液(ReagentB)到新的1.5毫升離心管加入xx微升陰性液(ReagentE)上下傾倒數(shù)次,混勻在37℃溫度下孵育30分鐘加入xx微升終止液(ReagentC)渦旋震蕩5秒在冰槽里孵育15分鐘即刻放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為3000g小心移取500微升上清液到新的1.5毫升離心管加入xx微升中和液(ReagentD),混勻轉(zhuǎn)移到比色皿里即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照樣品活性測(cè)定移取xx微升反應(yīng)液(ReagentB)到新的1.5毫升離心管加入100微升待測(cè)樣品(蛋白總量100微克)(注意:樣品需澄清)上下傾倒數(shù)次,混勻在37℃溫度下孵育30分鐘加入xx微升終止液(ReagentC)渦旋震蕩5秒在冰槽里孵育15分鐘即刻放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為3000g小心移取500微升上清液到新的1.5毫升離心管(注意:沉淀物為橘紅色)加入xx微升中和液(ReagentD),混勻轉(zhuǎn)移到比色皿里即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品讀數(shù)計(jì)算樣品活性注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為20次操作操作時(shí),須戴手套終止液(ReagentC)和中和液(ReagentD)具有腐蝕性,注意操作安全系統(tǒng)檢測(cè)時(shí),背景測(cè)定只需一次樣品須澄清,至關(guān)重要比色測(cè)定后,比色皿須清洗徹底建議待測(cè)樣本的蛋白濃度為100微克/100微升(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒30030.1)如果待測(cè)樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度蛋白酶活性單位濃度定義:在37℃下,pH7.5的情況下,每單位酶在單位時(shí)間內(nèi)(每分鐘)產(chǎn)生0.01吸光值的升高變化本公司提供系列細(xì)菌生理生化檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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食物總抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 食物總抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書[詳細(xì)]
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2015-09-16 00:00
期刊論文
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