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活體細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒
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本文由 上海哈靈生物科技有限公司 整理匯編
2024-09-28 00:27 410閱讀次數(shù)
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活體細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒
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活體細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒
- 活體細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒[詳細]
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2024-09-28 00:27
報價單
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活體細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒產品說明書(中文版)
- 主要用途活體細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑是一種旨在通過長波長的熒光染料特異性地聚集在線粒體,并呈現(xiàn)紅色,用于分析和觀察線粒體活性與形態(tài)以及雙重染色或重疊染色定位的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種線粒體(動物、人體、昆蟲等)的形態(tài)觀察、活性探測和定位標記。產品嚴格無菌,即到即用,活體檢測,分辨率高,操作簡捷,性能穩(wěn)定,滯留持久。技術背景線粒體是細胞中重要的細胞器,其主要功能是提供細胞內各種物質代謝所需要的能量。線粒體大量存在于代謝旺盛的細胞中,如動物的心肌,肝,腎等器官和組織的細胞中。大量制備線粒體就是從這些器官組織中提取,或從組織培養(yǎng)細胞中提取。在光學顯微鏡下線粒體呈現(xiàn)為顆粒狀、棒狀或彎曲細線。線粒體熒光探針MitoTrackerRED,是一種含有硫醇(Thiol)氯甲基基團的熒光染料,自由通過細胞膜,選擇性地聚集在線粒體。它可以對活細胞進行直接染色,在580nm波長可以清晰看到被染成紅色的線狀或顆粒小體的線粒體。并可以分析線粒體膜電位,以檢測線粒體活性。[詳細]
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2018-11-18 10:00
產品樣冊
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活體細胞溶酶體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒
- 主要用途活體細胞溶酶體形態(tài)/活性熒光染色試劑是一種旨在通過長波長的熒光染料特異性地聚集在溶酶體,并呈現(xiàn)紅色,用于分析和觀察溶酶體形態(tài)以及雙重染色或重疊染色定位的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種溶酶體(動物、人體、昆蟲等)的形態(tài)觀察、活性探測和定位標記。產品嚴格無菌,即到即用,活體檢測,分辨率高,操作簡捷,性能穩(wěn)定,滯留持久。技術背景溶酶體(lysosome)是一種普遍存在于真核細胞中的細胞器,含有酸性水解酶,例如酯酶、淀粉酶、蛋白酶、核酶等,分解各種細胞殘渣和廢棄物質,包括過多的或破損的其它細胞器、食物顆粒、吞噬的細菌和病毒等。其大小為0.5至1.5微米,球圓形,溶酶體內pH為5.0左右。溶酶體功能異常會引起溶酶體貯積癥(1ysosomalstoragedisorders;LSDs),例如家族性白癡?。═ay-sachsdisease)和龐貝氏癥(Pompe’sdisease)。溶酶體熒光探針LysoTrackerRED,是一種向酸性(acidotropic)探針,含有熒光基團在弱堿上,高度選擇性地染色酸性細胞器溶酶體。探針自由通過細胞膜,選擇性地聚集在溶酶體內。它可以對活細胞進行直接染色,在590nm波長可以清晰看到被染成紅色的溶酶體。[詳細]
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2018-11-18 10:00
產品樣冊
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真菌/酵母細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒產品說明書
- 真菌/酵母細胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒產品說明書[詳細]
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2015-05-04 00:00
標準
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活體細胞線粒體損傷/氧化熒光測定試劑盒
- 主要用途活體細胞線粒體損傷/氧化熒光測定試劑是一種旨在通過特異性染色劑分析線粒體膜心磷脂的變化來定性或定量測定線粒體內含質量以及自由基、氧化物等對細胞線粒體的毒性與損傷作用的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的??梢员挥糜诩毎蛲?、信號傳遞、衰老、代謝和營養(yǎng)學等的研究。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡易,活體檢測,性能穩(wěn)定。技術背景心磷脂(Cardiolipin)是線粒體膜上的主要成分之一。它對細胞氧化特別敏感。線粒體脂類分解,致使心磷脂顯著減少,Z終造成線粒體的嚴重損害。Nonyl-AcrydineOrange(NAO)是一種可自由通過細胞膜的染色劑,特異性地染色線粒體上的心磷脂,并發(fā)出熒光。一旦線粒體膜質量減少或受到損害以及被氧化,其熒光顯著減弱。[詳細]
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2018-11-18 10:00
產品樣冊
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活體細胞線粒體損傷/氧化熒光測定試劑盒產品說明書(中文版)
- 主要用途活體細胞線粒體損傷/氧化熒光測定試劑是一種旨在通過特異性染色劑分析線粒體膜心磷脂的變化來定性或定量測定線粒體內含質量以及自由基、氧化物等對細胞線粒體的毒性與損傷作用的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的??梢员挥糜诩毎蛲?、信號傳遞、衰老、代謝和營養(yǎng)學等的研究。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡易,活體檢測,性能穩(wěn)定。技術背景心磷脂(Cardiolipin)是線粒體膜上的主要成分之一。它對細胞氧化特別敏感。線粒體脂類分解,致使心磷脂顯著減少,Z終造成線粒體的嚴重損害。Nonyl-AcrydineOrange(NAO)是一種可自由通過細胞膜的染色劑,特異性地染色線粒體上的心磷脂,并發(fā)出熒光。一旦線粒體膜質量減少或受到損害以及被氧化,其熒光顯著減弱。[詳細]
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2018-11-18 10:00
產品樣冊
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細胞活體染色的原理和技術
- 細胞活體染色的原理和技術實驗原理活體染色是指對生命有機體的細胞或者組織能著色,但又無毒害的一種染色方法。目的在于顯示生活細胞內的某些天然結構,同時不會影響細胞的正常生命活動和引起細胞死亡?;铙w染色技術可以用來研究生活狀態(tài)下的細胞結構和生理、病理狀態(tài)變化。液泡是細胞內濃縮產物的主要場所,具有重要的功能。中性紅(neutralred)是液泡的特殊染色劑,只將液泡染成紅色。對于活細胞,細胞質和細胞核不會被染色。實驗儀器、材料和試劑1)儀器和用具:顯微鏡、鑷子、小燒杯、吸水紙、載玻片、蓋玻片2)材料:洋蔥鱗莖3)試劑①Ringer溶液:NaCl8.5g、CaCl20.12g、NaHCO30.20g、KCl0.14g、Na2HPO40.01g、葡萄糖2.0g,加蒸餾水至1000mL。②1%和1/3000中性紅溶液:稱取0.5g中性紅溶于50mLRinger溶液,稍加熱使之很快溶解,用濾紙過濾,裝入棕色瓶暗處保存,防止氧化沉淀失去染色能力。臨用前取1%中性紅溶液1mL,加入29mLRinger溶液混勻,裝入棕色瓶備用。③0.85%的生理鹽水。④聯(lián)苯胺溶液:在0.85%的鹽水中加入聯(lián)苯胺至飽和為止,臨用前加入20%H2O2,1滴/2mL。⑤鉬酸銨溶液:稱取0.1g鉬酸銨溶于100mL0.85%生理鹽水。實驗步驟1.植物細胞液泡的活體染色洋蔥內表皮:撕取洋蔥鱗莖內表皮,放在加有一滴1/3000的中性紅染液的載波片上,染色10min,用吸水紙吸去中性紅染液,換上蒸餾水,蓋上蓋玻片,顯微鏡觀察,可見到被染成磚紅色的ZY大液泡。黃豆根尖:1)取一干凈載玻片,滴一滴1/3000中性紅染液;2)用刀片將初生的黃豆根尖(約1-2cm長)切一縱薄片,置染液中,染8分鐘;3)用吸管吸蒸餾水滴在染液周圍,使染液沖淡,吸去再換水使染液近無色;4)用蓋玻片蓋在樣品上,吸去多余水分;5)觀察:在高倍鏡下,先觀察分生區(qū)細胞,尋找染成紅色的圓形液泡,這是初生的幼小液泡;由分生區(qū)向伸長區(qū)觀察,在長方形細胞中尋找染色較淺,體積增大的液泡;在根毛區(qū)尋找體積更大的液泡,有的占據(jù)胞質大部分,將細胞核擠至一側。[詳細]
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2018-11-26 10:00
產品樣冊
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精子頂體形態(tài)花生凝集素熒光標記(PNA-FITC)染色試劑盒
- 主要用途精子頂體形態(tài)花生凝集素熒光標記(PNA-FITC)染色試劑是一種旨在使用熒光素標記的花生凝集素和赫斯特33258雙重熒光染色技術,分析生理性反應性或病理性退行性頂體缺失的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適用于各種動物或人體精子細胞以及凍存精子細胞,以及受精時的精子細胞。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡便,性能穩(wěn)定,熒光清晰。技術背景在男科學(Andrology)中,精子(spermatozoa)分析提供了精子生成(spermatogenesis)、精子壽命、以及生育能力的基礎信息。其中精子的活力(vitality)、運動能力(motility)、授精潛力(fertilizingpotential)、膜結構或染色質結構完整性(integrity)、頂體反應(acrosomalreaction)功能的評價是精子分析的重要指標,也是決定人工受孕或體外授精(invitrofertilization;IVF)的重要參數(shù)。其中頂體反應,是指當精子接近卵子實施授精時,精子頭部前半端的帽狀結構頂體,釋放出溶解酶,以便精子和卵子的膜融合。頂體反應測試是一項穩(wěn)定的精子功能參數(shù),可以用于預測受精成功率。因此頂體的結構完整性(intact)是評價的主要標志,也是不育癥和避孕藥物研究的對象。使用熒光素標記的花生凝集素(Isothiocyano-fluoresceinatedpeanutArachishypogaeaagglutinin;PNA-FITC)和赫斯特33258(Hoechst33258)雙重熒光染色技術,是精子頂體反應分析和授精效率評價的Z常用的方法。首先使用赫斯特33258染色,分析精子活力,基于赫斯特33258具有有限的膜通透性特點,受到活體精子細胞(包括游動性和非游動性精子)的排斥,而容易進入死亡精子細胞。其次使用熒光素標記的花生凝集素染料,與頂體外膜糖蛋白上的半乳糖殘基(β-D-galactosylresidue)的結合,顯示完整性(未反應性unreacted)頂體,同時可以應用于受精時的精卵反應。雙染的作用,以幫助區(qū)分生理性反應性頂體缺失(loss)或病理性退行性頂體缺失。通過常用的熒光顯微鏡(激發(fā)波長488nm,散發(fā)波長530nm)便可清晰觀察到綠色頂體狀態(tài)(status)。[詳細]
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2018-11-18 10:00
產品樣冊
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精子活力和頂體形態(tài)雙重熒光染色試劑盒產品說明書
- 主要用途精子活力和頂體形態(tài)雙重熒光染色試劑是一種旨在使用赫斯特33258和熒光素標記的花生凝集素雙重熒光染色技術,分析精子活力以及頂體狀態(tài)的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適用于各種動物或人體精子細胞以及凍存精子細胞的檢測。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡便,性能穩(wěn)定,熒光清晰。技術背景在男科學(Andrology)中,精子(spermatozoa)分析提供了精子生成(spermatogenesis)、精子壽命、以及生育能力的基礎信息。其中精子的活力(vitality)、運動能力(motility)、授精潛力(fertilizingpotential)、膜結構或染色質結構完整性(integrity)、頂體反應(acrosomalreaction)功能的評價是精子分析的重要指標,也是決定人工受孕或體外授精(invitrofertilization;IVF)的重要參數(shù)。其中頂體反應,是指當精子接近卵子實施授精時,精子頭部前半端的帽狀結構頂體,釋放出溶解酶,以便精子和卵子的膜融合。頂體反應測試是一項穩(wěn)定的精子功能參數(shù),可以用于預測受精成功率。因此頂體的結構完整性(intact)是評價的主要標志,也是不育癥和避孕藥物研究的對象。使用DNA敏感性熒光染料赫斯特33258(Hoechst33258)和熒光素標記的花生凝集素(Isothiocyano-fluoresceinatedpeanutArachishypogaeaagglutinin;PNA-FITC)雙重熒光染色技術,是精子活力,以及精子頭部頂體狀態(tài)分析和授精效率評價的Z常用的方法。首先使用赫斯特33258染色,分析精子活力,基于赫斯特33258具有有限的膜通透性特點,受到活體精子細胞(包括游動性和非游動性精子)的排斥,而容易進入死亡精子細胞。其次使用熒光素標記的花生凝集素染料,與頂體外膜糖蛋白上的半乳糖殘基(β-D-galactosylresidue)的結合,顯示完整性(未反應性unreacted)頂體,同時可以應用于受精時的精卵反應。雙染的作用,以幫助區(qū)分生理性反應性頂體缺失(loss)或病理性退行性頂體缺失。通過常用的熒光顯微鏡(激發(fā)波長488nm,散發(fā)波長530nm)便可清晰觀察到綠色頂體狀態(tài)(status)。[詳細]
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2018-11-18 10:00
產品樣冊
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細胞三磷酸腺苷酶活性堿性法染色試劑盒
- 主要用途細胞三磷酸腺苷酶(ATP酶)活性堿性法染色試劑是一種旨在使用鈣激活技術,在堿性條件下,由三磷酸腺苷酶催化水解產生的磷酸與鈣離子結合,經過氯化鈷的替換,Z后在硫化銨存在的情況下,呈現(xiàn)細胞樣本中酶活性部位的棕黑色沉淀現(xiàn)象的權威而經典的技術方法。該技術經過精心改良、成功實驗證明的。主要適用于各種動物和人體細胞ATP酶的活性檢測。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,靈敏牢固,顯色清晰。技術背景三磷酸腺苷酶或ATP酶(adenosinetriphosphatase;ATPase)可催化ATP水解生成ADP及無機磷的反應,這一反應放出大量能量,用于運送離子進出細胞,同時供給生物體進行需能生命過程。它存在于生物細胞的多個部位,比如細胞質膜上和葉綠體類囊體膜上等,對整個生命的維持有著重要的作用。膜結合ATP酶存在多種形式:鈉鉀ATP酶、胞膜鈣泵ATP酶(plasmamembranecalciumATPase;PMCA)或肌質網/內質網鈣泵ATP酶(sarcoplasmicorendoplasmicreticulumcalciumATPases;SERCA)、氫鉀ATP酶(hydrogen/potassiumATPase)或胃質子泵(gastricprotonpump)等。[詳細]
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2018-11-18 10:00
產品樣冊
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細胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性染色試劑盒產品說明書
- 細胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性染色試劑盒產品說明書[詳細]
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2024-09-11 17:46
應用文章
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精子活力和頂體形態(tài)雙重熒光染色試劑盒產品說明書(中文版)
- 精子活力和頂體形態(tài)雙重熒光染色試劑盒產品說明書(中文版)[詳細]
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2015-05-07 00:00
專利
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細胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性染色試劑盒產品說明書(中文版)
- 細胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性染色試劑盒產品說明書(中文版)[詳細]
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2015-03-30 00:00
選購指南
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細胞基質金屬蛋白酶原位明膠酶譜法熒光染色試劑盒
- 主要用途細胞基質金屬蛋白酶(MMP)原位明膠酶譜法(insituzymography)熒光染色試劑是一種旨在通過異硫氰酸熒光素標記的明膠作為底物,針對未固定處理的細胞樣品予以染色處理,基質金屬蛋白酶切離底物產生高度綠色熒光,來定位細胞中的基質金屬蛋白酶活性的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物細胞基質金屬蛋白酶-2和9的分析。產品即到即用,性能穩(wěn)定,操作便捷,敏感度高,熒光清晰,重復性好。技術背景基質金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinases;MMPs)是一類結構高度同源的分泌型或膜相關性鋅內肽酶的總稱,因含有金屬(鋅、鈣)離子而得名。迄今為止發(fā)現(xiàn)的MMPs至少有28種,幾乎能降解除多糖以外的全部細胞外基質(extracellularmatrix)成分,同時參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、組織再吸收(tissueresorption)、疾病發(fā)生,例如關節(jié)炎、癌細胞浸入轉移等。根據(jù)降解的底物不同可將MMPs分為4大類:(1)膠原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖;(2)明膠酶(Ⅳ型膠原酶):MMP2、MMP9,又稱明膠酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維;(3)基質溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11,主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金屬蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內絕大多數(shù)細胞并不儲備MMPs,當需要MMPs的信號傳遞到細胞后才臨時合成,合成的MMPs以無活性的酶原(proenzyme)形式分泌到細胞外,隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活,一種激活的MMPs可激活另一種MMPs,形成瀑布效應。原位明膠酶譜法熒光染色(in-situfluorescencezymography)技術在于提高基質金屬蛋白酶檢測的敏感性,使用異硫氰酸熒光素(FITC)標記的明膠作為底物,經過基質金屬蛋白酶水解后產生熒光多肽,據(jù)此在熒光顯微鏡下檢測酶的活性和位置。[詳細]
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2018-11-18 10:00
產品樣冊
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Fungi-Fluor真菌熒光染色檢測試劑盒
- Fungi-Fluor(#17442)Fungi-Fluor試劑盒(用于真菌檢測)用于真菌檢測的Fungi-Fluor試劑盒為各種真菌生物體提供快速熒光染色/復染色流程。本試劑盒可使痰液、皮膚碎屑中的各種真菌得以顯現(xiàn)。Fungi-FluordetectionKit通過熒光染色,可以快速檢測切片(冰凍,石蠟,樹脂包埋)的真菌。其優(yōu)點在于:1.比KOH制劑更準確2.可快速提供比PAS或銀染法更多的形態(tài)學細節(jié)3.通過復染色可大幅減少背景熒光4.一個試劑盒可將500片以上的切片染色5.樣本類型多樣:新鮮或冷凍的臨床樣本經石蠟或塑料(JB4)包埋的組織規(guī)格:一個試劑盒產品目錄編號:#:17442訂貨信息訂貨電話4006551678fige007@163.com17442-1Fungi-Fluor廬KitforFungalDetection(forU.S.&outsideofEuropeorders)28731kitpolysiencesManyopportunisticinfectionsdevelopintheimmunosuppressedpatientsufferingfromAIDS.AnumberofthesearecausedbyvariousfungalspeciesincludingCandida,Aspergillus,Histoplasma,andCoccidioides.TheFungi-FluorKitforFungalDetectionoffersaquickfluorescentstain/counterstainprocedureforvariousfungalorganisms.Thekitcanbeusedtoscreenavarietyofspecimentypesfromsputumtoskinscrapingsforfungaldetection.ProductissoldinEuropeunderCatalog#17442EProductissoldintheU.S.andoutsideofEuropeunderCatalog#17442Advantages:MoreaccuratethanKOHprepsRapidlyoffersgreatermorphologicdetailthanPASorsilverstainsCounterstaingreatlyreducesbackgroundfluorescenceOnekitstainsover500slidesSpecimentypes:FreshorfrozenclinicalspecimenParaffinorGMA-embeddedtissues[詳細]
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2018-09-29 10:03
產品樣冊
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動物細胞/組織活性線粒體分離試劑盒產品說明書
- 動物細胞/組織活性線粒體分離試劑盒產品說明書主要用途動物細胞/組織活性線粒體分離試劑是一種旨在從動物細胞或組織中分離出完整而純化的活性線粒體細胞器的權威而經典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。適合于動物軟組織(肝或腦組織)和培養(yǎng)細胞的活性線粒體的制備。其制備物產量高,活性保證,可以被用于線粒體酶活性、細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。產品不含污染性蛋白水解酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定,分離產量和純度堪稱同類產品**。技術背景線粒體細胞器的分離是現(xiàn)代細胞生物學研究的Z常用的手段之一。從任何組織或細胞分離線粒體的技術方法基本上采用:**,通過機械或化學方法破裂細胞;第二,通過低速差速離心去除殘渣碎屑和巨大細胞器;第三,通過高速差速離心獲得線粒體;甚至,第四,可以通過等密度離心獲得純度更高的線粒體。產品內容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升凈化液(ReagentC)毫升強化液(ReagentD)毫升保存液(ReagentE)毫升活性液(ReagentF)微升產品說明書1份保存方式保存凈化液(ReagentC)和活性液(ReagentF)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備HANK平衡鹽緩沖溶液(12028)或PBS緩沖溶液(12033):用于清理細胞胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(12024):用于細胞脫離完全細胞培養(yǎng)液(12052):用于中和胰蛋白酶的細胞培養(yǎng)基15毫升錐形離心管:用于線粒體初步制備物的存放50毫升錐形離心管:用于細胞或組織收集后離心或清洗1.5毫升離心管:用于保存線粒體4℃臺式離心機:用于沉淀細胞4℃超速離心機:用于分離細胞器成分DOUNCE勻漿器:用于裂解細胞實驗步驟一、動物軟組織線粒體分離(組織勻漿法)實驗開始前,將試劑盒里的活性液(ReagentF)凍融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升凈化液(ReagentC)和4毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升錐形離心管里,混勻后,標記為裂解工作液,放進冰槽里備用。然后進行下列操作。1.手術取出動物組織,并秤重以確定組織重量(注意:實驗前**使動物空腹12至24小時)2.(選擇步驟)放進預冷的50毫升錐形離心管3.(選擇步驟)加入適量的(1克組織需要xx毫升)清理液(ReagentA)清洗1次4.即刻用刀片切碎組織5.放進一個預冷的15毫升錐形離心管6.加入預冷的xx毫升裂解工作液7.渦旋震蕩5秒,充分混勻8.即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器,在冰槽里用研磨棒勻化組織(約80下)(注意:參見注意事項8)9.將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管,10.放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1500g11.小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管此步驟去除細胞核和未溶解的細胞12.放進4℃超速離心機離心10分鐘,速度為10000g13.小心抽去上清液,保留沉淀顆粒此步驟獲得線粒體沉淀物14.(選擇步驟)加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE)15.(選擇步驟)放進4℃超速離心機再次離心5分鐘,速度為10000g16.(選擇步驟)小心抽去上清液17.加xx毫升保存液(ReagentE),充分混勻18.即刻移入1.5毫升離心管,放進-70℃冰箱里二、動物軟組織線粒體分離(化學處理法)實驗開始前,將試劑盒里的活性液(ReagentF)凍融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升凈化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升錐形離心管里,混勻后,標記為裂解工作液,放進冰槽里備用。然后進行下列操作。1.手術取出動物組織,并秤重以確定組織重量(注意:實驗前**使動物空腹12至24小時)2.(選擇步驟)放進預冷的50毫升錐形離心管3.(選擇步驟)加入適量的(1克組織需要xx毫升)清理液(ReagentA)清洗1次4.移入一個液氮凍存管5.即刻放進液氮罐過夜6.次日從液氮罐里取出,即刻(Z快速度)碾碎組織(注意:切莫使組織凍融)7.放進一個15毫升錐形離心管8.加入預冷的xx毫升裂解工作液9.渦旋震蕩5秒,充分混勻10.在冰槽里孵育2分鐘,其中每間隔一分鐘渦旋震蕩5秒11.加入預冷的xx微升強化液(ReagentD)12.渦旋震蕩5秒,充分混勻13.在冰槽里孵育5分鐘,其中每間隔一分鐘渦旋震蕩5秒(注意:參見注意事項9)14.加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE),用手混勻15.放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1500g16.小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管此步驟去除細胞核和未溶解的細胞17.放進4℃超速離心機離心10分鐘,速度為10000g18.小心抽去上清液,保留沉淀顆粒此步驟獲得線粒體沉淀物19.(選擇步驟)加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE)20.(選擇步驟)放進4℃超速離心機再次離心5分鐘,速度為10000g21.(選擇步驟)小心抽去上清液22.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混勻23.即刻移入1.5毫升離心管,放進-70℃冰箱里三、動物細胞線粒體分離(細胞勻漿法)實驗開始前,將試劑盒里的活性液(ReagentF)凍融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升凈化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升錐形離心管里,混勻后,標記為裂解工作液,放進冰槽里備用。然后進行下列操作。1.準備5至10瓶75cm2細胞培養(yǎng)瓶的細胞(5X107),直至細胞生長鋪滿整個培養(yǎng)表面2.分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到每個細胞培養(yǎng)瓶,覆蓋培養(yǎng)瓶表面,3.小心抽去清洗液4.重復實驗步驟2至3一次5.加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿整個培養(yǎng)平面6.放進37℃培養(yǎng)箱孵育3分種7.手擊震動培養(yǎng)瓶,使細胞脫落8.分別加入10毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液9.全部移入到一個50毫升錐形離心管10.放進臺式離心機離心10分鐘,速度為200g11.小心抽去上清液12.加入xx毫升預冷的清理液(ReagentA),混勻細胞13.放進臺式離心機離心10分鐘,速度為300g14.小心抽去上清液15.加入預冷的xx毫升裂解工作液16.渦旋震蕩5秒,充分混勻細胞顆粒群17.即刻放進預冷的DOUNCE勻漿器,在冰槽里用研磨棒勻化細胞(約80下)(注意:參見注意事項8)18.將所有細胞勻漿物移入15毫升錐形離心管19.放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1500g20.小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管此步驟去除細胞核和未溶解的細胞21.放進4℃超速離心機離心10分鐘,速度為10000g22.小心抽去上清液,保留沉淀顆粒此步驟獲得線粒體沉淀物23.(選擇步驟)加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE)24.(選擇步驟)放進4℃超速離心機再次離心5分鐘,速度為10000g25.(選擇步驟)小心抽去上清液26.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混勻27.即刻移入1.5毫升離心管,放進-70℃冰箱里四、動物細胞線粒體分離(化學處理法)實驗開始前,將試劑盒里的活性液(ReagentF)凍融,然后移出xx微升活性液(ReagentF)、xx毫升凈化液(ReagentC)和xx毫升的裂解液(ReagentB)到15毫升錐形離心管里,混勻后,標記為裂解工作液,放進冰槽里備用。然后進行下列操作。1.準備5至10瓶75cm2細胞培養(yǎng)瓶的細胞(5X107),直至細胞生長鋪滿整個培養(yǎng)表面2.分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽溶液或PBS溶液到每個細胞培養(yǎng)瓶,覆蓋培養(yǎng)瓶表面28.小心抽去清洗液3.重復實驗步驟2至3一次4.加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿整個培養(yǎng)平面5.放進37℃培養(yǎng)箱孵育3分種6.手擊震動培養(yǎng)瓶,使細胞脫落7.分別加入10毫升用戶自備的完全細胞培養(yǎng)液8.全部移入到一個50毫升錐形離心管9.放進臺式離心機離心10分鐘,速度為200g10.小心抽去上清液11.加入xx毫升預冷的清理液(ReagentA)12.放進臺式離心機離心10分鐘,速度為300g13.小心抽去上清液14.加入預冷的xx毫升裂解工作液15.渦旋震蕩5秒,充分混勻16.在冰槽里孵育2分鐘,其中每間隔一分鐘渦旋震蕩5秒17.加入預冷的xx微升強化液(ReagentD)18.渦旋震蕩5秒,充分混勻19.在冰槽里孵育5分鐘,其中每間隔一分鐘渦旋震蕩5秒(注意:參見注意事項9)20.加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE),用手混勻21.放進4℃臺式離心機離心10分鐘,速度為1500g22.小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管此步驟去除細胞核和未溶解的細胞23.放進4℃超速離心機離心10分鐘,速度為10000g24.小心抽去上清液,保留沉淀顆粒此步驟獲得線粒體沉淀物25.(選擇步驟)加入預冷的xx毫升保存液(ReagentE)26.(選擇步驟)放進4℃超速離心機再次離心5分鐘,速度為10000g27.(選擇步驟)小心抽去上清液28.加入xx毫升保存液(ReagentE),充分混勻29.即刻移入1.5毫升離心管,放進-70℃冰箱里注意事項1.本產品為10次(1克動物組織或5X107細胞)或50次(200毫克動物組織或1X107細胞)操作2.實際操作的動物組織重量或細胞量與試劑使用量按比例調整:例如200毫克動物組織:試劑用量是標準用量的五分之一3.所有操作均須在4℃或以下狀態(tài)進行4.操作時,須戴手套5.操作時,須無菌操作,避免污染母液,尤其是裂解液(ReagentB)和保存液(ReagentE)6.建議使用足夠的樣品量7.建議嚴格控制操作時間8.通常勻化次數(shù)為80下達到80%的細胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細胞裂解程度:完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加勻化次數(shù)9.通常孵育5分鐘達到80%的細胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的細胞裂解程度:完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加孵育時間和渦旋震蕩次數(shù)10.對于難以裂解的細胞,例如HeLa細胞,采用物理勻漿法是優(yōu)先推薦的技術處理11.通常5X107細胞或1克動物組織的線粒體含量為50微克以上線粒體蛋白12.如果需要計量線粒體,稀釋后數(shù)分鐘內完成,否則線粒體將分解13.本產品所獲得的線粒體純度和產量Z為理想。通過調整10000g離心速度到3000至8000g,可以提高粗提的線粒體純化程度,但線粒體產量相應減少14.如果需要獲得99%以上純度的線粒體,使用動物細胞/組織高質純化線粒體分離試劑盒-10006.315.線粒體正常活性測定方法是:CITRATESYNTHASE活性、氧化磷酸化、細胞色素吸收峰譜等16.線粒體內外膜完整測定方法是:CYTOCHROMECOXIDASE活性和熒光JC染色17.本公司提供線粒體套餐:ROS、NAO、MitoTRACK、JGB、線粒體溶解等18.本公司提供系列線粒體分析試劑產品質量標準1.本產品經鑒定性能長期穩(wěn)定2.本產品經鑒定分離的線粒體內外膜完整3.本產品經鑒定分離的線粒體維持正?;钚?.本產品經鑒定不含污染性蛋白酶和核酶[詳細]
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2018-11-18 10:00
產品樣冊
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真菌/酵母細胞線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒產品說明書
- 真菌/酵母細胞線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒產品說明書[詳細]
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2015-09-15 00:00
報價單
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真菌-酵母細胞線粒體內膜功能-膜電位熒光測定試劑盒中文版說明書
- 真菌-酵母細胞線粒體內膜功能-膜電位熒光測定試劑盒中文版說明書[詳細]
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2018-11-08 10:00
產品樣冊
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細胞γ分泌酶(γ-SECRETASE)活性熒光共振中文版
- 細胞γ分泌酶(γ-SECRETASE)活性熒光共振能量轉移法(FRET)定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)主要用途細胞γ分泌酶(γ-SECRETASE)活性熒光共振能量轉移法(FRET)定量檢測試劑是一種旨在通過熒光探針NMA供體和DNP受體雙重標記的多肽底物,在γ分泌酶的水解作用下,釋放出強烈熒光的NMA,而發(fā)生熒光峰值的變化,即采用熒光共振能量轉移法來測定樣品中酶活性的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞裂解萃取液樣品(動物、人體)、部分或完全純化酶樣品中γ分泌酶活性的定量檢測,以及YZ劑和激活劑的篩選。產品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術背景γ分泌酶(γ-SECRETASE;EC3.4.24.81),是一種多亞體蛋白酶復合物(multisubunitproteasecomplex),由4種蛋白組成:早老素蛋白(Presenilin;PS)、呆蛋白(nicastrin)、前咽缺陷蛋白-1(anteriorpharynxdefective1;APH1)和早老素增強蛋白2(presenilinenhancer2)。其為整合性跨膜蛋白,在早期內質網里組裝和成熟,后期內質網進行目標蛋白切離。γ分泌酶切離由β分泌酶切離淀粉樣前體蛋白(amyloidprecursorprotein;APP)產生C99和α分泌酶切離的C83片段,前者成為具有神經毒性的40至42氨基酸長的淀粉樣β-多肽(amyloid-βpeptide;Aβ),是阿茨罕默疾?。╝lzheimerdisease;AD)的病理變化(淀粉樣斑;amyloidplaque)的主要成分,由此γ分泌酶成為阿茨罕默疾病ZL的抗淀粉樣多肽藥物靶標。γ分泌酶與NOTCH調節(jié)有關。基于底物多肽Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala-Thr-Val(源于淀粉樣淀粉樣β-多肽前體蛋白序列708-715),通過熒光共振能量轉移法(Fluorescenceresonanceenergytransfer;FRET),即傳遞激發(fā)狀態(tài)的能量由處于較短波長的供體(donor)到覆蓋供體波長的受體(acceptor),使得距離依賴性反應的供體的散發(fā)光子淬滅(quench),使用2個熒光探針N-甲基氨茴酰NMA(N-Methyl-anthraniloyl)供體和二硝基苯基DNP(2,4-Dinitrophenyl)受體作為FRET對,來標記的γ分泌酶選擇性多肽底物的兩端,在γ分泌酶的水解作用下,在丙氨酰(alaninyl)和蘇氨酰(threoninyl)殘基處切離,釋放出強烈熒光的NMA,在熒光分光光度儀下(激發(fā)波長340-360nm,散發(fā)波長440-450nm),來定量測定γ分泌酶的活性。其反應系統(tǒng)為:產品內容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升底物液(ReagentD)微升標準液(ReagentE)微升產品說明書1份[詳細]
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2018-11-08 10:00
產品樣冊
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真菌/酵母細胞線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒產品說明書(中文版)
- 真菌/酵母細胞線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測定試劑盒產品說明書(中文版)[詳細]
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2015-02-06 00:00
期刊論文
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