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細(xì)胞γ分泌酶(γ-SECRETASE)活性熒光共振中文版

本文由 上海銘博生物科技有限公司 整理匯編

2018-11-08 10:00 725閱讀次數(shù)

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細(xì)胞γ分泌酶(γ-SECRETASE)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途細(xì)胞γ分泌酶(γ-SECRETASE)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過熒光探針NMA供體和DNP受體雙重標(biāo)記的多肽底物,在γ分泌酶的水解作用下,釋放出強(qiáng)烈熒光的NMA,而發(fā)生熒光峰值的變化,即采用熒光共振能量轉(zhuǎn)移法來測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或完全純化酶樣品中γ分泌酶活性的定量檢測(cè),以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術(shù)背景γ分泌酶(γ-SECRETASE;EC3.4.24.81),是一種多亞體蛋白酶復(fù)合物(multisubunitproteasecomplex),由4種蛋白組成:早老素蛋白(Presenilin;PS)、呆蛋白(nicastrin)、前咽缺陷蛋白-1(anteriorpharynxdefective1;APH1)和早老素增強(qiáng)蛋白2(presenilinenhancer2)。其為整合性跨膜蛋白,在早期內(nèi)質(zhì)網(wǎng)里組裝和成熟,后期內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行目標(biāo)蛋白切離。γ分泌酶切離由β分泌酶切離淀粉樣前體蛋白(amyloidprecursorprotein;APP)產(chǎn)生C99和α分泌酶切離的C83片段,前者成為具有神經(jīng)毒性的40至42氨基酸長(zhǎng)的淀粉樣β-多肽(amyloid-βpeptide;Aβ),是阿茨罕默疾病(alzheimerdisease;AD)的病理變化(淀粉樣斑;amyloidplaque)的主要成分,由此γ分泌酶成為阿茨罕默疾病ZL的抗淀粉樣多肽藥物靶標(biāo)。γ分泌酶與NOTCH調(diào)節(jié)有關(guān)?;诘孜锒嚯腉ly-Gly-Val-Val-Ile-Ala-Thr-Val(源于淀粉樣淀粉樣β-多肽前體蛋白序列708-715),通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(Fluorescenceresonanceenergytransfer;FRET),即傳遞激發(fā)狀態(tài)的能量由處于較短波長(zhǎng)的供體(donor)到覆蓋供體波長(zhǎng)的受體(acceptor),使得距離依賴性反應(yīng)的供體的散發(fā)光子淬滅(quench),使用2個(gè)熒光探針N-甲基氨茴酰NMA(N-Methyl-anthraniloyl)供體和二硝基苯基DNP(2,4-Dinitrophenyl)受體作為FRET對(duì),來標(biāo)記的γ分泌酶選擇性多肽底物的兩端,在γ分泌酶的水解作用下,在丙氨酰(alaninyl)和蘇氨酰(threoninyl)殘基處切離,釋放出強(qiáng)烈熒光的NMA,在熒光分光光度儀下(激發(fā)波長(zhǎng)340-360nm,散發(fā)波長(zhǎng)440-450nm),來定量測(cè)定γ分泌酶的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升底物液(ReagentD)微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)微升產(chǎn)品說明書1份

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