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雞活性氧簇(ROS)ELISA試劑盒說明書
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本文由 上海恒遠ELISA試劑盒供應商 整理匯編
2018-11-16 10:01 235閱讀次數(shù)
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l本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中雞活性氧簇(ROS)的含量。l有效期:6個月l保存條件:2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被雞活性氧簇(ROS)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞活性氧簇(ROS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。3.組織勻漿:用預冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。4.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。注:標本溶血會影響Z后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。標本處理1.本公司只對試劑盒本身負責,不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預留充足的樣本。2.實驗前應預測標本含量,如果標本濃度過高,應對標本進行稀釋,使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。4.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結果偏差。5.若樣本為細胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。7.建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結果偏差。需要而未提供的試劑和器材酶標儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱蒸餾水或去離子水備注:1.標準品濃度依次為:800、400、200、100、50、0IU/mL2.經(jīng)過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過Zda標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。注意事項嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。在儲存和溫育時避免強光直接照射。平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。不能使用過期產(chǎn)品。如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。實驗結果計算以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。試劑盒性能1.檢測范圍:25IU/mL800IU/mL。2.靈敏度:Zdi檢測濃度小于1.0IU/mL。3.特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4.重復性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。說明1.由于現(xiàn)有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術風險。2.Z終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關,請務必準備充足的標本備份。3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到**的檢測結果。
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雞活性氧簇(ROS)ELISA試劑盒說明書
- l本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關液體樣本中雞活性氧簇(ROS)的含量。l有效期:6個月l保存條件:2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被雞活性氧簇(ROS)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞活性氧簇(ROS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。3.組織勻漿:用預冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。4.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。注:標本溶血會影響Z后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。標本處理1.本公司只對試劑盒本身負責,不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預留充足的樣本。2.實驗前應預測標本含量,如果標本濃度過高,應對標本進行稀釋,使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。4.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結果偏差。5.若樣本為細胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。7.建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結果偏差。需要而未提供的試劑和器材酶標儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱蒸餾水或去離子水備注:1.標準品濃度依次為:800、400、200、100、50、0IU/mL2.經(jīng)過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過Zda標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。注意事項嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。在儲存和溫育時避免強光直接照射。平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。不能使用過期產(chǎn)品。如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。實驗結果計算以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。試劑盒性能1.檢測范圍:25IU/mL800IU/mL。2.靈敏度:Zdi檢測濃度小于1.0IU/mL。3.特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。4.重復性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。說明1.由于現(xiàn)有條件及科學技術水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術風險。2.Z終的實驗結果與試劑的有效性、實驗者的相關操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關,請務必準備充足的標本備份。3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到**的檢測結果。[詳細]
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2018-11-16 10:01
產(chǎn)品樣冊
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人活性氧簇(ROS)ELISA檢測試劑盒說明書
- 人活性氧簇(ROS)ELISA檢測試劑盒說明書本試劑盒僅供研究使用。實驗原理人活性氧簇(ROS)ELISA檢測試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人活性氧簇(ROS)水平。用純化的人活性氧簇(ROS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入活性氧簇(ROS),再與HRP標記的活性氧簇(ROS)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的活性氧簇(ROS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人活性氧簇(ROS)濃度。人活性氧簇(ROS)ELISA檢測試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(16ng/mL)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。人活性氧簇(ROS)ELISA檢測試劑盒操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。8ng/mL5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液4ng/mL4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液2ng/mL3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液1ng/mL2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液0.5ng/mL1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。人活性氧簇(ROS)ELISA檢測試劑盒注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。人活性氧簇(ROS)ELISA檢測試劑盒保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2024-09-30 13:06
產(chǎn)品樣冊
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大鼠活性氧簇(ROS)ELISA試劑盒操作步驟
- 大鼠活性氧簇(ROS)ELISA試劑盒操作步驟使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中活性氧簇(ROS)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠活性氧簇(ROS)水平。用純化的大鼠活性氧簇(ROS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入活性氧簇(ROS),再與HRP標記的活性氧簇(ROS)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的活性氧簇(ROS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠活性氧簇(ROS)濃度。標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。360IU/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液180IU/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液90IU/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液45IU/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液22.5IU/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-10-01 10:00
產(chǎn)品樣冊
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小鼠活性氧(ROS)ELISA試劑盒說明書
- 小鼠活性氧(ROS)ELISA試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關液體樣本中小鼠活性氧(ROS)的含量。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠活性氧(ROS)水平。用純化的小鼠活性氧(ROS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入活性氧(ROS),再與HRP標記的活性氧(ROS)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的活性氧(ROS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠活性氧(ROS)含量。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品:540U/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為360U/ml,240U/ml,120U/ml,60U/ml,30U/ml)。加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批間應分別小于9%和11%檢測范圍:20U/ml-400U/ml保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-11-07 14:16
產(chǎn)品樣冊
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兔活性氧(ROS)ELISA試劑盒使用說明書
- 兔活性氧(ROS)ELISA試劑盒使用說明書[詳細]
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2015-03-23 00:00
期刊論文
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魚活性氧(ROS)ELISA試劑盒使用說明書
- 魚活性氧(ROS)ELISA試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中魚活性氧(ROS)水平。用純化的魚活性氧(ROS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入活性氧(ROS),再與HRP標記的活性氧(ROS)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的活性氧(ROS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中魚活性氧(ROS)濃度。魚活性氧(ROS)ELISA試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(720IU/ml)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。魚活性氧(ROS)ELISA試劑盒操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。360IU/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液180IU/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液90IU/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液45IU/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液22.5IU/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結:計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。魚活性氧(ROS)ELISA試劑盒注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。魚活性氧(ROS)ELISA試劑盒保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2024-09-30 18:44
產(chǎn)品樣冊
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人活性氧(ROS)ELISA Kit說明書
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2014-08-21 00:00
安裝說明
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豬活性氧(ROS)ELISA檢測試劑盒
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2015-09-21 00:00
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紅藻活性氧(ROS)酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書
- 紅藻活性氧(ROS)酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說明書[詳細]
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2015-04-03 00:00
標準
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精子細胞氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途精子細胞氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光檢測試劑是一種旨在使用透膜熒光染色劑氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯,在細胞氧化條件下,產(chǎn)生熒光,來定量檢測精子細胞內(nèi)活性氧族的生成和增加的權威而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適用于動物和人體精子細胞的活性氧族的檢測。可以被用于細胞凋亡、衰老、代謝和營養(yǎng)學,以及發(fā)育生物學(男性不育)等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡便,性能穩(wěn)定,熒光清晰。技術背景超氧自由基陰離子(superoxideradical;O2-)、過氧化氫(hydrogenperoxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxylradical;OH-)、過氧化基(peroxylradical;ROO-)、氫過氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxylradical)、氮氧基(nitricOxide;NO-)、過氧亞硝基陰離子(peroxynitriteanion;ONOO-)次氯酸(hypochlorousacid;HOCl)、半醌自由基(semiquinoneradical)、單線態(tài)氧氣(singletoxygen)等細胞內(nèi)活性氧族(ReactiveOxygenSpecies;ROS)的產(chǎn)生和增多,甚而導致諸如男性不育、冠心病、風濕性關節(jié)炎、腫瘤、退行性病變等各種病理狀況。其中精子細胞(spermatozoa)對于活性氧較為敏感:低濃度活性氧可以調(diào)節(jié)正常精子功能、精子獲能、頂體反應、精卵融合等;高濃度活性氧則影響精子細胞的質(zhì)量和功能,因為精子細胞質(zhì)膜含有大量不飽和脂肪酸,胞漿含有少量的祛除活性氧的相關酶蛋白,由此活性氧容易造成精子質(zhì)膜的流動性和DNA完整性受到損害,精子運動能力降低,不能參與授精活動,Z終導致特發(fā)性不育癥(idiopathicinfertility)。氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯(6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluoresceindiacetate,acetylester;CM-H2DCFDA)是取代二氯二氫熒光素二乙酯(2′,7′-dichlorodihydrofluorescindiacetate;DCFH-DA)的升級產(chǎn)品,一種完全自由通過細胞膜,并在細胞內(nèi)長期滯留而不易外漏的染色劑。一旦被過氧化氫、過氧化基、過氧亞硝基陰離子等氧化,便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測定精子細胞內(nèi)活性氧族的濃度。[詳細]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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精子細胞氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光檢測試劑盒
- 精子細胞氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光檢測試劑盒[詳細]
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2015-05-07 00:00
選購指南
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細菌氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒
- 細菌氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途細菌氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒是一種旨在通過透膜熒光染色劑氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯,在細菌氧化條件下,產(chǎn)生熒光,來定量檢測細菌活性氧族的生成和增加的權威而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種實驗用細菌菌株氧化應激活性氧的分析。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡易,活體檢測,性能穩(wěn)定,滯留持久,熒光清晰。技術背景細菌作為模式生物,是環(huán)境化學毒性研究的常用工具。活性氧的檢測可以用于諸如多環(huán)芳烴化合物或重金屬的毒性作用以及修復(remediation)的評價指標。超氧自由基陰離子(superoxideradical;O2-)、過氧化氫(hydrogenperoxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxylradical;OH-)、過氧化基(peroxylradical;ROO-)、氫過氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxylradical)、氮氧基(nitricOxide;NO-)、過氧亞硝基陰離子(peroxynitriteanion;ONOO-)次氯酸(hypochlorousacid;HOCl)、半醌自由基(semiquinoneradical)、單線態(tài)氧氣(singletoxygen)等細胞內(nèi)活性氧族(ReactiveOxygenSpecies;ROS)的產(chǎn)生和增多,將導致細胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯(6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluoresceindiacetate,acetylester;CM-H2DCFDA)是取代二氯二氫熒光素二乙酯(2,7-dichlorodihydrofluorescindiacetate;DCFH-DA)的升級產(chǎn)品,一種完全自由通過細胞膜,并在細胞內(nèi)長期滯留而不易外漏的染色劑。一旦被過氧化氫、羥自由基或氫氧基、過氧化基、次氯酸等氧化,便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測定細菌活性氧族的濃度。[詳細]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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活體組織氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒產(chǎn)品說明書
- 活體組織氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒產(chǎn)品說明書[詳細]
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2015-09-11 00:00
操作手冊
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活體組織氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 產(chǎn)品說明書
- 活體組織氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 產(chǎn)品說明書[詳細]
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2014-12-18 00:00
實驗操作
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活體組織氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒 產(chǎn)品說明書
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2024-09-29 21:19
標準
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活體組織氧化應激活性氧(ROS)初級熒光測定試劑盒
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2015-08-26 00:00
安裝說明
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冰凍切片氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒
- 冰凍切片氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途冰凍切片氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑是一種旨在通過透膜熒光染色劑氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯,在組織氧化損傷條件下,產(chǎn)生熒光,來定量檢測冰凍組織內(nèi)活性氧族的存在狀況的權威而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適宜于冰凍動物組織的分析??梢员挥糜诩毎蛲觥⑿盘杺鬟f、衰老、代謝和營養(yǎng)學等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡易,定性檢測,性能穩(wěn)定。技術背景超氧自由基陰離子(superoxideradical;O2-)、過氧化氫(hydrogenperoxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxylradical;OH-)、過氧化基(peroxylradical;ROO-)、氫過氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxylradical)、氮氧基(nitricOxide;NO-)、過氧亞硝基陰離子(peroxynitriteanion;ONOO-)次氯酸(hypochlorousacid;HOCl)、半醌自由基(semiquinoneradical)、單線態(tài)氧氣(singletoxygen)等細胞內(nèi)活性氧族(ReactiveOxygenSpecies;ROS)的產(chǎn)生和增多,將導致細胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯(6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluoresceindiacetate,acetylester;CM-H2DCFDA)是取代二氯二氫熒光素二乙酯(2,7-dichlorodihydrofluorescindiacetate;DCFH-DA)的升級產(chǎn)品,一種完全自由通過細胞膜,并在細胞內(nèi)長期滯留而不易外漏的染色劑。一旦被過氧化氫、羥自由基或氫氧基、過氧化基、次氯酸等氧化,便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測定組織細胞內(nèi)活性氧族的濃度。[詳細]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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精子細胞氧化應激活性氧(ROS)細胞流式儀檢測試劑盒
- 精子細胞氧化應激活性氧(ROS)細胞流式儀檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途精子細胞氧化應激活性氧(ROS)細胞流式儀檢測試劑是一種旨在使用透膜熒光染色劑二氯熒光乙酰乙酸鹽,在細胞氧化條件下,產(chǎn)生熒光,來定量檢測精子細胞內(nèi)活性氧族的生成和增加的權威而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適用于動物和人體精子細胞的活性氧族的檢測??梢员挥糜诩毎蛲觥⑺ダ?、代謝和營養(yǎng)學,以及發(fā)育生物學(男性不育)等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡便,性能穩(wěn)定,熒光清晰。技術背景超氧自由基陰離子(superoxideradical;O2-)、過氧化氫(hydrogenperoxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxylradical;OH-)、過氧化基(peroxylradical;ROO-)、氫過氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxylradical)、氮氧基(nitricOxide;NO-)、過氧亞硝基陰離子(peroxynitriteanion;ONOO-)次氯酸(hypochlorousacid;HOCl)、半醌自由基(semiquinoneradical)、單線態(tài)氧氣(singletoxygen)等細胞內(nèi)活性氧族(ReactiveOxygenSpecies;ROS)的產(chǎn)生和增多,甚而導致諸如男性不育、冠心病、風濕性關節(jié)炎、腫瘤、退行性病變等各種病理狀況。2',7'-二氯熒光乙酰乙酸鹽(2',7'-dichlorofluoresceindiacetate,DCFH-DA)一種完全自由通過細胞膜的染色劑。一旦被過氧化氫、過氧化基、過氧亞硝基陰離子等氧化,便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測定精子細胞內(nèi)活性氧族的濃度。[詳細]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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純化線粒體氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒
- 主要用途純化線粒體氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑是一種旨在通過透膜熒光染色劑氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯,在線粒體氧化條件下,產(chǎn)生熒光,來定量檢測線粒體內(nèi)活性氧族的生成和增加的權威而經(jīng)典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老、代謝和營養(yǎng)學等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡易,活體檢測,性能穩(wěn)定。技術背景超氧自由基陰離子(superoxideradical;O2-)、過氧化氫(hydrogenperoxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxylradical;OH-)、過氧化基(peroxylradical;ROO-)、氫過氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxylradical)、氮氧基(nitricOxide;NO-)、過氧亞硝基陰離子(peroxynitriteanion;ONOO-)次氯酸(hypochlorousacid;HOCl)、半醌自由基(semiquinoneradical)、單線態(tài)氧氣(singletoxygen)等細胞內(nèi)活性氧族(ReactiveOxygenSpecies;ROS)的產(chǎn)生和增多,將導致細胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二氫熒光素二乙酯(6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluoresceindiacetate,acetylester;CM-H2DCFDA)是取代二氯二氫熒光素二乙酯(2,7-dichlorodihydrofluorescindiacetate;DCFH-DA)的升級產(chǎn)品,一種完全自由通過細胞膜,并在細胞內(nèi)長期滯留而不易外漏的染色劑。一旦被過氧化氫、羥自由基或氫氧基、過氧化基、次氯酸等氧化,便產(chǎn)生熒光。據(jù)此測定線粒體活性氧族的濃度。產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)毫升補充液(ReagentB)毫升染色液(ReagentC)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在-20℃冰箱里,染色液(ReagentC),嚴格避免光照;有效保證12月用戶自備培養(yǎng)箱:用于染色孵育(共聚焦)熒光顯微鏡:用于觀察熒光線粒體熒光酶標儀:用于測定線粒體熒光強度實驗步驟實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑放進冰槽里融化,避免光照;同時從-80℃冰箱里取出待測的線粒體,[詳細]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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精子細胞氧化應激活性氧(ROS)魯米諾化學發(fā)光法定量試劑盒
- 主要用途精子細胞氧化應激活性氧(ROS)魯米諾化學發(fā)光法定量檢測試劑是一種旨在通過自由基探針魯米諾和強化劑的參與下,精子細胞中的活性氧族使發(fā)光物氧化降解并發(fā)光,在化學發(fā)光儀(Luminometer)的幫助下定量檢測精子細胞活性氧族(過氧化氫)的生成和數(shù)量的權威而經(jīng)典的技術方法。該技術由大師級科學家精心研制、成功實驗證明的。適用于動物和人體精子細胞的活性氧族的檢測。可以被用于細胞凋亡、衰老、代謝和營養(yǎng)學,以及發(fā)育生物學(男性不育)等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡易,性能穩(wěn)定,檢測敏感。技術背景超氧自由基陰離子(superoxideradical;O2-)、過氧化氫(hydrogenperoxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxylradical;OH-)、過氧化基(peroxylradical;ROO-)、氫過氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxylradical)、氮氧基(nitricOxide;NO-)、過氧亞硝基陰離子(peroxynitriteanion;ONOO-)次氯酸(hypochlorousacid;HOCl)、半醌自由基(semiquinoneradical)、單線態(tài)氧氣(singletoxygen)等細胞內(nèi)活性氧族(ReactiveOxygenSpecies;ROS)的產(chǎn)生和增多,甚而導致諸如男性不育、冠心病、風濕性關節(jié)炎、腫瘤、退行性病變等各種病理狀況。魯米諾(luminol),又稱氨基鄰苯二甲酰肼(luminol;3-aminophthalichydrazide5-amino-2,3-dihvdro-1,4-phthalazinedione),是一種脂溶性的發(fā)光劑,氧化后生成魯米諾自由基而化學發(fā)光,具有460nm左右峰值的帶狀光譜,肉眼可觀察到鮮明的紫藍色。魯米諾以單價氧化形式與超氧自由基陰離子反應,產(chǎn)生不穩(wěn)定性內(nèi)過氧化物或二氧環(huán)丁烷(Dioxetane),由此分解成電激發(fā)狀態(tài),通過釋放光子,回復到基態(tài)。魯米諾作為探針,可以檢測細胞內(nèi)外過氧化氫、超氧自由基陰離子和羥自由基,其中過氧化氫Z強,其發(fā)光強度與過氧化氫水平成正相關。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升強化液(ReagentB)毫升發(fā)光液(ReagentC)毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存強化液(ReagentB)和GENMED發(fā)光液(ReagentC)在-20℃冰箱里,嚴格避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備15毫升錐形離心管:用于精子細胞操作的容器培養(yǎng)箱:用于精子細胞孵育1血細胞計數(shù)器:用于精子細胞計數(shù)臺式離心機:用于沉淀精子細胞測試管:用于發(fā)光檢測用的專用試管化學發(fā)光儀:用于檢測化學發(fā)光實驗步驟一、樣品預處理1.移取2毫升新鮮收集(1小時內(nèi))的精液到15毫升錐形離心管2.放進37℃培養(yǎng)箱孵育20分鐘3.放進臺式離心機離心7分鐘,速度為300g4.小心抽去上清液5.加入xx毫升清理液(ReagentA),混勻精子細胞顆粒群6.放進臺式離心機離心7分鐘,速度為300g7.小心抽去上清液8.重復實驗步驟5至7一次9.加入適量的清理液(ReagentA)10.充分混勻后,在血細胞計數(shù)器上進行精子細胞計數(shù)11.調(diào)整精子細胞數(shù)為20X106/毫升12.放進37℃培養(yǎng)箱里備用(1小時內(nèi))二、測讀測讀開始前,打開化學發(fā)光儀,設定儀器內(nèi)溫度為37℃預熱和整合測讀10秒或15分鐘;然后關掉實驗室的燈光。將-20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化,嚴格置于暗室里。然后進行下列操作。1.準備好測試管,做好標記:陰性對照、樣品本底和樣品活性2.移取xx微升清理液(ReagentA)到陰性對照測試管3.移取xx微升上述預處理的精子細胞到樣品本底測試管4.移取xx微升上述預處理的精子細胞到樣品活性測試管5.分別加入xx微升強化液(ReagentB)到上述測試管,除樣品本底測試管外6.分別加入xx微升發(fā)光液(ReagentC)到上述測試管,除樣品本底測試管外7.輕輕渦旋混勻8.即刻放進37℃化學發(fā)光儀里測讀9.整合測讀10秒,獲得相對發(fā)光單位(relativelightunit;RLU)10.或者整合測讀15分鐘,獲得光電子讀數(shù):X106CPM(countedphotonperminute)(注意:可以使用液體閃爍儀替代)11.計算ROS水平:(樣品活性-樣品本底)÷6精子細胞=X106CPM/毫升=X106CPM/20X106精子細胞注意事項21.本產(chǎn)品為50次操作2.如果測定體系變化,則試劑用量相應變化3.操作時,須戴手套4.測試前,精子細胞須新鮮收集,1小時內(nèi)為**5.精子細胞懸液制備后即刻測讀,不宜過*保存6.精子細胞懸液須清澈7.如果需要排除白細胞的干擾,建議純化精子細胞:精子細胞高純分離試劑盒(14003)8.如果需要區(qū)分精液各種成分的活性氧生成情況,建議使用精液組分氧化應激活性氧(ROS)魯米諾化學發(fā)光法定量檢測試劑盒(10112.3.2)9.本產(chǎn)品適合凍存的精子細胞檢測10.測讀的所有步驟均須在暗室里進行11.如果是注射式化學發(fā)光儀,建議測試前后使用無離子水沖洗化學發(fā)光儀注射(injector)管道12.正常精子細胞ROS水平是0.1至1.0X106CPM/2X106精子細胞13.本公司提供系列精子細胞分析試劑產(chǎn)品質(zhì)量標準1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感[詳細]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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