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應(yīng)用方案

儀器網(wǎng)/ 應(yīng)用方案/ 19種氨基酸UPLC分析方法(異硫氰酸苯酯柱前衍生法)

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方法:
HPLC
基質(zhì):
標準溶液
應(yīng)用編號:
103087
化合物:
Asp(天冬氨酸)Glu(谷氨酸)Ser(絲氨酸)Gly(甘氨酸)His(組氨酸)Arg(精氨酸)Thr(蘇氨酸)Ala(丙氨酸)Pro(脯氨酸)Tyr(酪氨酸)Val(纈氨酸)Met(蛋氨酸)Cys(胱氨酸)IIe(異亮氨酸)Leu(亮氨酸)Nle(正亮氨酸)Phe(苯丙氨酸)Trp(色氨酸)Lys(賴氨酸)
色譜柱:
Endeavorsil C18 1.8μm 100 x 2.1mm
樣品前處理:

1 溶液配制: 氨基酸儲備液:稱取一定量氨基酸標準品,用0.1 mol/l HCl水溶液溶解,配成氨基酸單標濃度為0.05 mol/l 氨基酸使用液:將儲備液用0.1 mol/l HCl水溶液稀釋,得到濃度為0.002 mol/l的氨基酸單標和混標,待衍生 0.1 mol/l HCl水溶液:量取8.3 ml濃鹽酸,然后用純水定容至1000 ml 異硫氰酸苯酯(PITC)溶液:將250 μl異硫氰酸苯酯用乙腈定容至10 ml,得到0.2 mol/L異硫氰酸苯酯溶液 三乙胺溶液:將1.4 ml三乙胺用乙腈定容至10 ml,得到1.0 mol/L三乙胺溶液 0.1 mol/l HCl水溶液:量取8.3 ml濃鹽酸,然后用純水定容至1000 ml

2 標準溶液衍生化: 量取200 μl氨基酸混合使用液,置于1.5 ml塑料離心管中,準確加100 μl 1 mol/l三乙胺乙腈溶液和100 μl 0.2 mol/l異硫氰酸苯酯乙腈溶液,混勻,室溫反應(yīng)1小時,然后加入正己烷400 μl,旋緊蓋子后劇烈振蕩5~10 s,靜置分層,取200 μl下層溶液與800 μl水混合,0.22 μm針式過濾器過濾,待分析。

色譜條件:

色譜柱:Endeavorsil C18,100×2.1 mm,1.8 μm (Cat#:87003)

流動相: A:0.05 mol/L乙酸鈉水溶液(冰乙酸調(diào)節(jié)pH至6.50±0.05) B:甲醇:乙腈:水=20:60:20(V:V:V)

流速:0.3 mL/min

柱溫:35 ℃

檢測器:UV 254 nm

進樣體積:2.0 μL

文章出處:
天津應(yīng)用實驗室
關(guān)鍵字:
天然氨基酸、Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(絲氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(組氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(蘇氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(纈氨酸)、Met(蛋氨酸)、Cys(胱氨酸)、IIe(異亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Nle(正亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(賴氨酸)、UPLC、奮進、Endeavorsil C18、異硫氰酸苯酯、柱前衍生、PITC
圖譜:


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