摘要： 采用異硫氰酸苯酯（PITC）為柱前衍生試劑進行氨基酸衍生，二元流動相程序洗脫方法分離17種常見氨基酸，分離效果好，無需柱后反應裝置，反應速度快，保留時間重現(xiàn)性好 實驗部分： 儀器與試劑： Labtech LC600GX液相色譜儀；Labtech 氨基酸色譜柱（5um, 250×4.6mm）；17種氨基酸標樣；乙腈（色譜純）；水（超純水）；醋酸鈉（分析純）；醋酸（分析純）；三乙胺；異硫氰酸苯酯 色譜條件： 流動相A：乙腈/B＝1/1（V：V），流動相B：50mmolNaAC緩沖溶液（PH=6.5）流速：1ml/min，進樣1uL（自動進樣方式），檢測波長：254nm，柱溫為40 梯度程序： Time （min） Mobile phase A （V/V） Mobile phase B （V/V） 0 10 90 5 10 90 20 30 70 45 60 40 50 95 5 55 95 5 55:10 10 90 75 10 90 柱前衍生步驟： 1. 17種氨基酸混合標準溶液：分別稱取適量天門東氨酸谷氨酸絲氨酸甘氨酸組氨酸精氨酸蘇氨酸丙氨酸脯氨酸酪氨酸纈氨酸蛋氨酸異亮氨酸亮氨酸苯丙氨酸賴氨酸胱氨酸于容量瓶中，以0.1N鹽酸定容，得到2.5mmol/L混合標準貯備液（其中胱氨酸1.25mmol/L） 2. 1mol/L三乙胺乙腈溶液：取三乙胺139ul，加乙腈860ul 3. 1mol/L異硫氰酸苯酯（PITC）乙腈溶液：取12ulPITC加乙腈988ul 4. 對照品溶液的衍生：取氨基酸溶液800ul置離心管中，加1mol/L異硫氰酸苯酯（PITC）乙腈溶液400ul，1mol/L三乙胺乙腈溶液400ul，混勻，室溫放置1小時，加入正己烷1.6ml，放置10分鐘，取下層溶液進樣 結果與討論： 取衍生好的氨基酸標準溶液樣品，連續(xù)測定10次，因**次進樣系統(tǒng)未完全平衡好，保留時間有漂移，Z后一次進樣由于室內溫度較高，考慮到樣品放置時間長可能會對峰面積有影響，故舍去**與Z后一次進樣，統(tǒng)計8次進樣結果和重疊色譜圖如下， 氨基酸重復性結果（n＝8） Amino Acid Retention time Area RSD% RSD% Asp 0.31 6.97 Glu 0.25 7.19 Ser 0.15 7.08 Gly 0.12 6.59 His 0.11 6.50 Arg 0.11 6.97 Thr 0.11 6.26 Ala 0.13 7.29 Pro 0.11 6.70 Tyr 0.11 6.81 Val 0.15 6.69 Met 0.15 6.75 Cys-Cys 0.19 17.04 Lle 0.19 6.73 Leu 0.20 6.90 Phe 0.17 6.62 Lys 0.15 8.90 8次重復進樣色譜圖 從數(shù)據可得知保留時間有較好的重現(xiàn)性，ZdaRSD0.31%，由于進樣1ul，進樣量較小，所以峰面積的RSD稍大，在實際測定工作當中可以加大進樣量和添加內標的方式改善 萊伯泰科LC600GX液相色譜儀