1、提取 5.0 g 樣品中加入2 g 氯化鈉和15 mL 乙腈，10000 rpm 下均質(zhì)2 min，6000 rpm 下離心5 min，收集上層的乙腈提取液，15 mL 乙腈重復(fù)提取一次，合并乙腈提取液。乙腈提取液經(jīng)ProElut Na2SO43 g/6 mL(Cat.#65513) 干燥后，在35 oC 下減壓蒸餾至約3 mL，待凈化。

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2、凈化

a 活化：向ProElut Al-B 500 mg/3 mL (Cat.#65204) 中加入3 mL 乙腈，流出液棄去；

b 上樣： 將提取液加入柱中，用具塞試管收集流出液；

c 淋洗： 用6 mL 乙腈分兩次洗滌濃縮瓶，洗滌液加入小柱，流出液并入具塞試管；

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收集的凈化液可進(jìn)行兩種不同處理，以便適合兩種不同的分析方法：

重新溶解： 50 oC 下將凈化液氮氣吹干，1 mL 乙腈溶解殘渣，微孔濾膜過濾后，LC-MS/MS 分析；

衍生化處理：50 oC 下將凈化液氮氣吹干，加入100 μL N- 甲基咪唑- 乙腈溶液（1/1），渦旋混合30 s，然后加入150 μL 三氟乙酸酐- 乙腈溶液（1/1），渦旋混合30 s，然后加入750 μL 甲醇，靜置15 min，微孔濾膜過濾后HPLC 分析

方法1，HPLC 色譜柱：Diamonsil C18(2) 150 x 4.6 mm ID, 5 μm (Cat. #99601)

流動相：甲醇/ 水=92/8 (V/V)

流速：1.0 mL/min

進(jìn)樣量：20 μL

柱溫：25 oC

檢測器：熒光檢測器，激發(fā)波長：365 nm ；發(fā)射波長：475 nm

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方法2，LC-MS/MS 色譜柱：Diamonsil C18(2) 150 x 2.1 mm ID, 3 μm (Cat. #99613)

流動相：乙腈/ 0.1% 乙酸水溶液=75/25

流速：0.2 mL/min

進(jìn)樣量：10 μL

柱溫：30 oC

檢測器：串聯(lián)質(zhì)譜，APCI 負(fù)離子模式

適合蔬菜、水果樣品中阿維菌素的檢測。

1. 阿維菌素