簡(jiǎn)介
快速、準(zhǔn)確和常用的分子水平檢測(cè)技術(shù)對(duì)于應(yīng)對(duì) SARS-CoV-2(COVID-19) 的大流行發(fā)揮著重要作用。為了加深我們對(duì)感染和免疫之間關(guān)系的理解，檢測(cè)感染和檢測(cè)抗體都尤為重要。重要的挑戰(zhàn)是要探索出能夠滿足這些檢測(cè)需求的靈敏、一致的和易用的檢測(cè)方法，并且這些檢測(cè)方法的成本是在合理范圍內(nèi)。目前市面上針對(duì)感染Z準(zhǔn)確的檢測(cè)方法是針對(duì)病 毒mRNA 的定量 RT-PCR，然而，它并不能夠反映出免疫反應(yīng)的過(guò)程。鑒于目前重點(diǎn)仍然是放在開發(fā)更有效的方法以識(shí)別病癥，而在抗體檢測(cè)的分析方法的開發(fā)層面的進(jìn)展仍然不足。目前市場(chǎng)上的抗體測(cè)試有很多假陽(yáng)性結(jié)果，因此他們都不是了解SARS-CoV-21 免疫反應(yīng)細(xì)微差別的可靠方法 1。因此，對(duì)于研究 COVID-19 免疫和抗體應(yīng)答來(lái)說(shuō)，一種可靠的、高通量的方法亟需開發(fā)。
Enzo 開發(fā)了一種更先進(jìn)的基于酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn) (ELISA) 方法，針對(duì)性的優(yōu)化了檢測(cè)人血清和血漿樣本中抗 SARS-CoV-2核衣殼蛋白的 IgG 抗體 (ENZ-KIT193)。SARS-CoV-2 核衣殼IgG 是人類對(duì) SARS-CoV-2 病毒核衣殼蛋白的適應(yīng)性免疫反應(yīng)所產(chǎn)生的抗體。核衣殼蛋白在 RNA 包裹和病毒顆粒釋放中起重要作用，核衣殼蛋白抗體的存在表明Z近或之前有過(guò)感染。核衣殼蛋白高度保守，不易隨時(shí)間發(fā)生突變，是長(zhǎng)期研究 COVID-19 免疫的Z佳靶標(biāo) 2。此外，Enzo 還開發(fā)了一種附加的 ELISA 試劑盒——SARS-CoV-2 刺突蛋白 IgG 的 ELISA試劑盒 (RUO) (ENZ-KIT190)，能夠檢測(cè) 人血清中抗 SARSCoV-2 刺突蛋白的特異性抗體。SARS-CoV-2 刺突蛋白 IgG是人類對(duì) SARS-CoV-2 病毒刺突蛋白的適應(yīng)性免疫反應(yīng)產(chǎn)生的一種抗體。刺突蛋白對(duì)于病毒與人類細(xì)胞表面的 ACE2 受體結(jié)合并進(jìn)入細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制是必不可少的，因此它成為了目前一些疫苗研究理想的靶標(biāo)。Enzo’s SARS-CoV-2 核衣殼IgG ELISA 試 劑盒 和 SARS-CoV-2 刺突蛋白 IgG ELISA 試 劑盒是目前和未來(lái)研究來(lái)確定對(duì) COVID-19 感染的抗體應(yīng)答和免疫以及疫苗研究的關(guān)鍵工具。
優(yōu)勢(shì)
? 對(duì)核衣殼蛋白和刺突蛋白 IgG 抗體的特異性 >95%
? 每試劑盒可檢測(cè) 86 個(gè)樣品，采用高通量定性免疫分析
? 獲得優(yōu)越的檢測(cè)間 / 內(nèi)精度的比色讀數(shù)

兩種 ELISA 試劑盒組合能夠拓展檢測(cè)范圍，提高靈敏度，特異性達(dá)到 95%，針對(duì)其目標(biāo)分析物， 核衣殼 IgG 抗體和刺突蛋白 IgG 抗體，分別在 30 分鐘或 2 小時(shí)內(nèi)可測(cè)多達(dá) 86 個(gè)樣本。因此，這套試劑盒組合超過(guò)了我們對(duì)準(zhǔn)確性和速度的要求，并有著推進(jìn)研究進(jìn)展的潛力。對(duì) SARS-CoV-2 感染后抗體行為的深入了解，將有助于研究人員揭示感染后 SARSCoV-2 免疫應(yīng)答的特征，也可助于理解這種高傳染性病毒免疫的基本問(wèn)題。
材料
? SARS-CoV-2 刺 突 蛋 白 IgG ELISA 試 劑 盒 (RUO) (Enzo cat.#ENZ-KIT190-0001)
? SARS-CoV-2 核 衣 殼 IgG ELISA 試 劑 盒 (RUO) (Enzo cat.#ENZ-KIT193-0001)
? COVID-19 陽(yáng)性人血清 (BioIVT cat. #HMSRM-COVIDIGG):
? Lot#HMN368394-SR1
? Lot #HMN368436-SR1
? Lot#HMN368437-SR1

? Lot#HMN373782-SR1
? Lot#HMN373791-SR1
? Lot #HMN374206-SR1
? 去掉凝塊的人血清 ( 陰性 ) (Amsbio cat. #HSER-2mL):
? Lot #122019A
? SpectraMax ABS Plus 酶標(biāo)儀
方法
實(shí)驗(yàn)設(shè)置
使用前先將兩個(gè)試劑盒中的材料放置于室溫中，包括每個(gè)試劑盒中進(jìn)行檢測(cè)對(duì)照和重復(fù)血清樣本的足夠的酶標(biāo)條，將 20x的洗滌液稀釋至 1x。從 SARS-CoV-2 檢測(cè)呈陽(yáng)性的患者或大流行前收集的正常血清中分別提取血清樣本，用每種試劑盒的產(chǎn)品手冊(cè)中的樣品稀釋液稀釋制備。
Elisa 試劑盒的操作步驟見表 1

SARS-CoV-2 核衣殼 IgG ELISA 結(jié)果計(jì)算
Z終的 OD 值由所有孔的檢測(cè) OD 值減去空白孔的平均 OD 值計(jì)算獲得，包括標(biāo)準(zhǔn)品和血清樣本。
Z終的 OD = 樣品孔 OD - 空白孔平均 OD
使用 SoftMax?Pro 軟件擬合的 4 參數(shù) logistic 曲線繪制了每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的平均 OD 值與其濃度的關(guān)系 ( 圖 2 )。然后通過(guò)校正曲線外插半定量計(jì)算結(jié)果。當(dāng)內(nèi)插濃度≤ 2000ng/mL 時(shí)，表 示不 存 在 SARS-CoV-2 IgG；>2000ng /mL 提 示存在 SARS-CoV-2 IgG。

SARS-CoV-2 刺突蛋白 IgG ELISA 結(jié)果計(jì)算
Z終的 OD 值由所有孔的 OD 值 減去空白孔的平均 OD 值計(jì)算，包括陰性對(duì)照、低陽(yáng)性對(duì)照、高陽(yáng)性對(duì)照和血清樣本 :
Z終的 OD = 樣品 OD - 平均空白 OD

計(jì)算每個(gè)樣本的指標(biāo)值

產(chǎn)品手冊(cè)中給出了 0.08 的 cut-off 值并用于計(jì)算結(jié)果。指標(biāo)值 ≥ 1 表示結(jié)果為陽(yáng)性，指標(biāo)值為 < 1 表示陰性結(jié)果。所有計(jì)算都在 SoftMax Pro 軟件中建立分組表，讀取 ELISA 板時(shí)自動(dòng)計(jì)算結(jié)果。
結(jié)果
對(duì)于這兩種 ELSA 試劑盒，COVID-19 陽(yáng)性患者的血清樣本均呈陽(yáng)性，這意味著所有這些樣本都含有核衣殼蛋白 IgG 和刺突蛋白 IgG。正常血清樣本兩種檢測(cè)均為陰性。SoftMax Pro軟件根據(jù)數(shù)據(jù)自動(dòng)計(jì)算出的結(jié)果分組表見表 2 ( 核衣殼蛋白IgG ELISA 試劑盒 ) 和表 3 ( 刺突蛋白 IgG ELISA 試劑盒 )。

結(jié)論
總之，這些數(shù)據(jù)表明——Enzo 試劑盒，針對(duì) SARS-CoV-2 核衣殼蛋白 IgG 的 ELISA Kit (RUO) (ENZ-KIT193) 和 SARSCoV-2 刺突蛋白 IgG 的 ELISA Kit (RUO) (ENZ-KIT190)，是一種準(zhǔn)確度及通量高的檢測(cè)方法，可以同時(shí)快速檢測(cè)人類樣本核衣殼蛋白 IgG 抗體和刺突蛋白 IgG 抗體的解決方案。
此外，這 2 個(gè)試劑盒 在 SpectraMax ABS Plus 上運(yùn)行方便，并用 SoftMax Pro 軟件生成一致和高效的結(jié)果。
這些定量和半定量數(shù)據(jù)為單個(gè)患者樣本的特異性 IgG 分析提供了有價(jià)值的指標(biāo)，也為人群監(jiān)測(cè)研究提供了準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。因此，他們?yōu)樵谂R床中實(shí)施這些解決方案提供了新的機(jī)會(huì)，以便進(jìn)一步調(diào)查了解 SARS-CoV-2 感染和免疫應(yīng)答人群研究中的免疫原性反應(yīng)、免疫持續(xù)時(shí)間和模式的細(xì)微差別。這兩個(gè)試劑盒的應(yīng)用可以在預(yù)防和管理未來(lái)的大流行病方面發(fā)揮重要作用。