樣品準(zhǔn)備

提取

1 稱量 煙熏魚等干制品：稱取樣品2.5 g（極ng確到0.01 g）于50 mL 離心管中。 金槍魚等濕制品：稱取樣品5.00 g（極ng確到0.01 g）于50 mL 離心管中。

2 混合提取 向離心管中加入20 mL 組胺提取液*，渦旋混合1 min。60 ℃，100 rpm 恒溫水浴振蕩30 min。4000 rpm 離心10 min。取出6 mL 上清液，用50%磷酸水溶液調(diào)節(jié)pH 在2~3 之間，作為上樣液待凈化。

*組胺提取液：50 mmol/L 磷酸二氫鉀+純甲醇（1+1）

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SPE柱凈化——ProElut PXC 150 mg/6 mL（Cat.#68204）

(1)活化： 依次加入6 mL 甲醇，6 mL 水，流出液棄去。

(2)上樣： 將上樣液加入柱中，流出液棄去。

(3)淋洗： 依次用6 mL 0.1 MHCl 水溶液，6 mL 氨水+甲醇+水（5+5+90） 淋洗，淋洗液棄去。。

(4)洗脫： 6 mL 氨水+甲醇+水（5+60+35）洗脫，收集流出液。

(5)重新溶解： 將收集的洗脫液用氨水+甲醇+水（5+60+35）定容到6mL。上 機(jī)分析。

色譜柱： Diamonsil C18（2），150mm×4.6mm，5μm（Cat.#99603）

流速： 1.0 mL/min

檢測器：* FLD Ex: 345 nm,Em: 445 nm；

柱溫： 30 ℃

進(jìn)樣量： 10 μL

流動相： A．甲醇，B．磷酸-三乙胺緩沖液* A:B= 40:60 進(jìn)樣程序7.5μL OPA+10 μL 樣品+7.5μL OPA*

*磷酸-三乙胺緩沖液配制方法是1L 水溶液中加入12.5mL 三乙胺和25.7mL 磷酸。

*鄰苯二甲醛衍生試劑通過將25.0 mg OPA溶于1.0 mL甲醇，0.1 mL 2-巰基乙醇和10 mL硼酸鉀緩 沖液(pH 10.0)制得。

適用于水產(chǎn)品中組胺的測定。