1、提取

10 g 樣品與3 mL 鹽酸羥胺溶液（0.25 g/mL）、5 mL 對甲苯磺酸溶液（0.05 mol/L）和20 mL 乙酸銨溶液（0.1 mol/L）以及60 mL 乙腈混合，10000 rpm 下均質2 min ；

將混合物在4000 rpm 下離心5 min，上清液轉入分液漏斗，30 mL 乙腈重復提取殘渣，上清液并入分液漏斗。

向分液漏斗加入50 mL 水、2 mL 二甘醇和25 mL 二氯甲烷，振蕩，靜置分層，收集下層液體。再加入25 mL 二氯甲烷重復萃取一次，合并萃取液。

將萃取液在25 oC 下減壓蒸餾至近干，瓶中殘渣待凈化。

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2、凈化

a 活化： 將ProElut SCX 500 mg/3 mL (Cat.#63604) 安裝在固相萃取裝置上，上端連接ProElut Al-N 1 g/6 mL (Cat.#65306)，用5 mL 乙腈活化小柱，流出液棄去；

b 上樣： 6 mL 乙腈分三次洗滌蒸餾瓶，洗滌液過柱，流出液棄去；

c 淋洗： 用5 mL 乙腈淋洗小柱后，棄去中性氧化鋁柱，然后將SCX 柱抽干；

d 洗脫： 5 mL 乙酸乙酯+ 甲醇+ 氨水混合溶液（體積比為50/45/5）洗脫，收集洗脫液；

e 重新溶解：30 oC 下減壓蒸餾至干，用1 mL 流動相定容，微孔濾膜過濾后，HPLC 分析

柱后氧化柱：35 x 4.6 mm

流動相：乙腈/ 乙酸銨溶液 (0.125 mol/L，pH 4.5) =80/20

流速：1 mL/min

進樣量：20 μL

柱溫：35 oC

檢測器：UV 618 nm

適用于魚、蝦、蟹、甲魚等水產(chǎn)品中孔雀石綠和無色孔雀石綠的檢測。

1. 孔雀石綠；2. 無色孔雀石綠