一、樣品提取 

準(zhǔn)確稱取牛奶 5.00 g( 精確到 0.01 g)，加入乙酸乙酯 15  mL，渦旋振蕩 1 min，搖床振蕩 10 min；3000 r/min 轉(zhuǎn)速離心 10 min。將上清液轉(zhuǎn)移至試管中，于 45℃氮吹吹干，用 5 mL 乙腈 / 水溶液 (5:95, v/v) 溶解，待凈化。

二、SPE 柱凈化（Copure? C18，500 mg/6 mL） 

活化：C18 固相萃取柱使用前依次使用 5 mL 甲醇和 5 mL 水 活化。 

上樣和洗脫：將待凈化液加入已活化好的固相萃取柱中，以 1 mL/min的流速過柱，棄去濾液。用 4 mL乙腈 /水溶液 (5:95,  v/v) 分兩次淋洗固相萃取柱，棄去淋洗液，抽干小柱。用 8  mL 乙酸乙酯洗脫固相萃取柱，收集洗脫液。 

重新溶解：洗脫液于 45℃氮吹吹干，用 1 mL乙腈 /水溶液 (2:8,  v/v) 定溶，0.22 μm 微孔濾膜過濾，供高效液相色譜測定。

三、儀器條件 

設(shè)備：Waters Alliance 2695 色譜柱：XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) 檢測器：Waters 2487 紫外檢測器 檢測波長：268 nm 流動相：A：水 B：甲醇 洗脫方式：等度洗脫，A: B=40: 60 流速：1.0 mL/min 進(jìn)樣體積：20 μL 

四、實驗結(jié)果 

表 1 牛奶基質(zhì)中氯霉素的 0.5 mg/kg 添加回收結(jié)果