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褪黑激素硫酸鹽ELISA Kit使用說明書

本文由 深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司 整理匯編

2018-11-14 10:00 1007閱讀次數(shù)

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Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4褪黑激素硫酸鹽ELISAKit使用說明書(德國IBL:RE54031)1、應(yīng)用范圍此試劑盒可用于人尿液中褪黑激素硫酸鹽(又叫6-羥基褪黑激素硫酸鹽和6-硫酸褪黑激素)的體外定量檢測。2、前言說明松果體因其在光周期現(xiàn)象中的重要作用,已經(jīng)被人們認(rèn)為是神經(jīng)內(nèi)分泌的傳感器。松果體主要分泌的激素是:N-乙酰-5-甲氧色胺和褪黑激素,褪黑激素一般是由色氨酸合成而來的。血漿褪黑激素的濃度可在夜間達(dá)到**。褪黑激素特有的波動(dòng)變化可以反映出一些關(guān)于時(shí)間變化的信息,如夜晚的長短。褪黑激素的分泌會(huì)受到神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。交感神經(jīng)系統(tǒng)在調(diào)節(jié)褪黑激素分泌方面發(fā)揮有重要作用,它主要是通過釋放去甲腎上腺素來調(diào)節(jié)的。據(jù)報(bào)道,褪黑激素分泌方式和水平的變化與人的一些生理狀態(tài)一致,如:失眠、時(shí)差感、情緒低落、壓力大、精神分裂癥、丘腦下部性閉經(jīng)、妊娠、神經(jīng)想食欲缺乏、某些癌癥、免疫系統(tǒng)紊亂和青春期性成熟的影響。大多數(shù)循環(huán)褪黑激素都可在肝內(nèi)代謝成6-羥基褪黑激素,之后變成6-硫酸褪黑激素而隨尿液排除。尿液中6-羥基褪黑激素硫酸鹽的濃度與血液中褪黑激素的總水平有很好的相關(guān)性。3、實(shí)驗(yàn)原理此ELISA試劑盒利用的是競爭法的原理。樣品中未知量的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競爭性結(jié)合到包被在微孔中的抗體結(jié)合位點(diǎn)上。溫育后洗板以終止競爭反應(yīng)。加入底物液后,溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與樣品中抗原的量成反比。樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接獲取。4、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性試劑盒必須在2-8℃的環(huán)境下運(yùn)輸和儲(chǔ)存,避免太陽直射。樣品的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性及試劑準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。如果將包被板密封并儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下時(shí),試劑在有效期內(nèi)穩(wěn)定。5、樣品的采集與儲(chǔ)存尿液實(shí)驗(yàn)必須使用自然產(chǎn)生的尿液,也可使用24小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生的尿液。收集病人24小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生的尿液,將它加入到含10-15ml6NHCl防腐劑的容器中。為了計(jì)算結(jié)果,請確定尿液的總體積。實(shí)驗(yàn)開始前請先將樣品離心。儲(chǔ)存2-8℃2-8℃避免太陽直射,避免反復(fù)凍融穩(wěn)定性4天15年6、試劑盒成分?jǐn)?shù)量標(biāo)記成分1×12×8MTP包被板,可拆,微孔中包被了抗兔IgG(羊,多克?。?。1×5mlANTISERUM褪黑激素硫酸鹽抗血清,即用,內(nèi)含:兔抗血清、Tris緩沖液和0.01%的硫柳汞1×0.2mlENZCONJCONC酶聯(lián)物,40倍濃縮,內(nèi)含過氧酶標(biāo)記的褪黑激素硫酸鹽、Tris緩沖液和1%的硫柳汞。1×7×0.1mlCALA-G標(biāo)準(zhǔn)品A-G,0;1.7;5.2;15.6;46.7;140;420ng/mL0;5.2;15.9;47.6;142;427;1281nmol/L。即用,內(nèi)含褪黑激素硫酸鹽、Tris緩沖液和0.01%的硫柳汞。1×2×0.1mlCONTROL1+2質(zhì)控品1+2,即用,內(nèi)含0.02%的;硫柳汞。具體濃度及可允許范圍請見試劑瓶標(biāo)簽。1×60mlASSAYBUFCONC檢測緩沖液,紅色,即用,內(nèi)含Tris緩沖液、BSA和0.01%的硫柳汞。1×50mlWASHBUFCONC洗滌液,20倍濃縮,內(nèi)含磷酸緩沖液、吐溫和0.1%的硫柳汞。1×0.9mlTMBSUBSCONCTMB底物液,31倍濃縮,內(nèi)含TMB、緩沖液和穩(wěn)定劑。1×27mlTMB緩沖液TMB底物緩沖液,儲(chǔ)存時(shí)避免太陽直射,即用,內(nèi)含H2O2、檸檬酸鹽緩沖液和穩(wěn)定劑。1×12mlTMBSTOPTMB終止液,即用,1M的H2SO4。3×FOIL粘性金屬板7、實(shí)驗(yàn)所需器材但試劑盒不提供1)移液器,體積:10;50;100;1000ul2)試管(12×75mm)3)試管架4)振蕩器(500rpm)5)旋渦混合器(500rpm)6)帶儲(chǔ)器的8道移液器7)洗滌瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)8)酶標(biāo)儀(參考波長:600-650nm)9)蒸餾水或去離子水10)吸水紙、取樣吸頭和計(jì)時(shí)器8、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明8.1凍干或濃縮成分的準(zhǔn)備稀釋/溶解成分稀釋劑比例備注儲(chǔ)存穩(wěn)定性15ml洗滌液300ml雙蒸水1:2018-25℃將晶體溶解掉2-8℃4周50ul酶聯(lián)物2ml檢測緩沖液1:41臨時(shí)配置,只能使用一次18-25℃30min300ulTMB底物液9mlTMB底物緩沖液1:31臨時(shí)配置,只能使用一次18-25℃10min8.2標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人尿液樣品的稀釋1將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人尿液樣品分別10ul加入到聚苯乙烯或聚丙烯或玻璃試管中,避免太陽直射。2在每一試管中加入500ul檢測緩沖液,旋渦混合。褪黑激素硫酸鹽濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品濃度的樣品必須用檢測緩沖液進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋。9、實(shí)驗(yàn)步驟1將已稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣品分別50ul加入到相應(yīng)的微孔中。2在每一微孔中加入50ul臨時(shí)配置好的酶聯(lián)物。3在每一微孔內(nèi)加入50ul褪黑激素硫酸鹽抗血清。4蓋板,室溫(18-25℃)包被板振蕩器(500rpm)溫育2小時(shí)。5在溫育快要結(jié)束的10分鐘前,請將TMB底物液準(zhǔn)備好。6移去粘性金屬板,棄取孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔用250ul稀釋好的洗滌液洗板4次,吸水紙上拍干以除出殘余液體。7如果可以的話,請用8道移液器加底物液和終止液。加底物液和終止液的時(shí)間間隔應(yīng)當(dāng)相同,使用8在每一微孔中加入200ulTMB底物液。9室溫(18-25℃)包被板振蕩器(500rpm)溫育30min。10在每一微孔中加入100ulTMB終止液,輕請振板以混合溶液。11加終止液后60min內(nèi)在450nm處讀取OD值。10、期望值實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能當(dāng)作確定ZL結(jié)果的**因素,疾病的判斷還應(yīng)當(dāng)與其它臨床觀察和診斷檢測相結(jié)合。以下為明顯正常人群褪黑激素硫酸鹽的正常值:年齡數(shù)目褪黑激素硫酸鹽24小時(shí)尿液(ug)夜間尿液(ug/h)平均值90%的比例平均值90%的比例20-352636.815.6-58.12.80.9-5.636-501729.69.9-52.92.10.6-3.651-651620.412.3-32.81.50.9-2.5>1615.87.5-32.71.00.3-2.3建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室讀確定自己的正常值范圍本譯文僅供參考,詳情請以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司辦公地址:深圳市蛇口太子路18號海景廣場11C研發(fā)ZX:深圳市蛇口沿山路10號6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費(fèi)電話:800-8306296傳真:0755-26814431

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