本文由 上海哈靈生物科技有限公司 整理匯編

2015-04-08 00:00 294閱讀次數(shù)

收藏 評(píng)價(jià) 舉報(bào)

• 分享

立即下載

參與評(píng)論

評(píng)論

登錄后參與評(píng)論

登錄或新用戶注冊(cè)

• 微信登錄
• 密碼登錄
• 短信登錄

請(qǐng)用手機(jī)微信掃描下方二維碼
快速登錄或注冊(cè)新賬號(hào)

微信掃碼，手機(jī)電腦聯(lián)動(dòng)

注冊(cè)登錄即表示同意《儀器網(wǎng)服務(wù)條款》和《隱私協(xié)議》

賬  號(hào)：

密  碼：

圖片碼： 看不清？
換一張？

手機(jī)和郵箱號(hào)注冊(cè)新賬號(hào)>> 忘記密碼？

手機(jī)號(hào)：

圖片碼： 看不清？
換一張？

短信碼： 獲取短信碼

手機(jī)和郵箱號(hào)注冊(cè)新賬號(hào)>> 忘記密碼？

更多資料

• 細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒（中文版）

  細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒（中文版）[詳細(xì)]

  2015-04-08 00:00

  實(shí)驗(yàn)操作

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量檢測(cè)

  主要用途細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過比色探針對(duì)硝基苯胺標(biāo)記人工合成的乙?；痯53多肽底物，經(jīng)過SIRT1脫乙?；?，被位點(diǎn)特異性氨基肽酶水解，釋放黃色對(duì)硝基苯胺，即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品（動(dòng)物、人體）、核蛋白樣品、部分或完全純化酶樣品中SIRT1的活性定量檢測(cè)，以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。技術(shù)背景人體組蛋白脫乙?；福╤istonedeacetylase；HDAC）家屬分成三類共20多個(gè)蛋白：種類I（classI）與酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于細(xì)胞核中；種類II（classII）與酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于細(xì)胞核和細(xì)胞漿里；上述兩大種類的蛋白分子催化結(jié)構(gòu)域含有鋅，且曲古菌素A（trichostatinA；TSA）敏感。種類III（classIII）為NAD+輔助因子必需，又稱為sirtuins，與酵母Sir2（SilentInformationRegulator2）同源，包括SIRT1至7等，為曲古菌素A（trichostatinA；TSA）不敏感型賴氨酸脫乙?；福╨ysyl-deacetylase）。催化賴氨酸脫乙酰基反應(yīng)，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基團(tuán)轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的煙酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。SIRT1位于細(xì)胞核內(nèi)，與酵母Sir2同源性Z高。其功能在于調(diào)節(jié)p53活性和YZ細(xì)胞凋亡。基于人工合成的乙?；痯53（379至382氨基酸位點(diǎn)）多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切離的功能，首先使用比色染料對(duì)硝基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）來(lái)標(biāo)記乙?；痯53多肽底物，其次進(jìn)行脫乙?；?，Z后底物進(jìn)一步在氨基肽酶的催化酶解，釋放出具有強(qiáng)烈吸光值的黃色對(duì)硝基苯胺（波長(zhǎng)405nm），由此來(lái)定量測(cè)定沉默調(diào)節(jié)蛋白1的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為：[詳細(xì)]

  2018-11-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1 （SIRT1）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒

  細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1 （SIRT1）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒[詳細(xì)]

  2015-04-08 00:00

  期刊論文

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 組織沉默調(diào)節(jié)蛋白1活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

  主要用途組織沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過比色探針對(duì)硝基苯胺標(biāo)記人工合成的乙?；痯53多肽底物，經(jīng)過SIRT1脫乙?；?，被位點(diǎn)特異性氨基肽酶水解，釋放黃色對(duì)硝基苯胺，即采用比色法來(lái)測(cè)定組織裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品（動(dòng)物、人體）、核蛋白樣品、部分或完全純化酶樣品中SIRT1的活性定量檢測(cè)，以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。技術(shù)背景人體組蛋白脫乙?；福╤istonedeacetylase；HDAC）家屬分成三類共20多個(gè)蛋白：種類I（classI）與酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于細(xì)胞核中；種類II（classII）與酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于細(xì)胞核和細(xì)胞漿里；上述兩大種類的蛋白分子催化結(jié)構(gòu)域含有鋅，且曲古菌素A（trichostatinA；TSA）敏感。種類III（classIII）為NAD+輔助因子必需，又稱為sirtuins，與酵母Sir2（SilentInformationRegulator2）同源，包括SIRT1至7等，為曲古菌素A（trichostatinA；TSA）不敏感型賴氨酸脫乙?；福╨ysyl-deacetylase）。催化賴氨酸脫乙?；磻?yīng)，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基團(tuán)轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的煙酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。SIRT1位于細(xì)胞核內(nèi)，與酵母Sir2同源性Z高。其功能在于調(diào)節(jié)p53活性和YZ細(xì)胞凋亡?；谌斯ず铣傻囊阴；痯53（379至382氨基酸位點(diǎn)）多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切離的功能，首先使用比色染料對(duì)硝基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）來(lái)標(biāo)記乙酰化p53多肽底物，其次進(jìn)行脫乙?；?，Z后底物進(jìn)一步在氨基肽酶的催化酶解，釋放出具有強(qiáng)烈吸光值的黃色對(duì)硝基苯胺（波長(zhǎng)405nm），由此來(lái)定量測(cè)定沉默調(diào)節(jié)蛋白1的活性。用戶自備磷酸鹽緩沖溶液（PBS）：用于清洗組織樣品15毫升錐形離心管：用于樣品處理的容器1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于組織細(xì)胞預(yù)處理培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)物孵育96孔板或100微升1厘米光徑比色皿：用于反應(yīng)和比色的容器酶標(biāo)儀或分光光度儀：用于比色分析注意事項(xiàng)1．本產(chǎn)品為20次操作，包括背景對(duì)照2．操作時(shí)，須戴手套3．系統(tǒng)操作過程中，背景測(cè)定只需1次4．樣品須澄清，至關(guān)重要5．樣品處理時(shí)，避免使用蛋白酶YZ劑、PMSF、烷基胺（alkylamine）等6．孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行比色測(cè)定7．濾波器可以使用波長(zhǎng)400nm替代405nm8．測(cè)定值由低到高變化；酶動(dòng)法測(cè)定可以持續(xù)60分鐘9．測(cè)定值吸光讀數(shù)越高，表明酶活性越高10．比色測(cè)定后，比色皿須清洗徹底11．待測(cè)樣本為核蛋白樣品，其蛋白濃度為50微克/20微升；待測(cè)樣本為組織裂解懸液，其蛋白濃度為200微克/20微升（本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒30030.1）12．如果待測(cè)樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度13．沉默調(diào)節(jié)蛋白1單位活性定義為：在30℃，pH8.0條件下，每分鐘內(nèi)能夠釋放1微摩爾對(duì)硝基苯酚所需的酶量作為一個(gè)活性單位14．本公司提供系列組蛋白脫乙酰基酶檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定2．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感[詳細(xì)]

  2018-11-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）ELISA試劑盒說(shuō)明書

  小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）ELISA試劑盒使用說(shuō)明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）水平。用純化的小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1），再與HRP標(biāo)記的沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）濃度。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說(shuō)明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品：900pg/mL0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為600pg/mL，400pg/mL，200pg/mL，100pg/mL，50pg/mL）。加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng)：試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請(qǐng)避光保存。嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說(shuō)明書有異，以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。（此圖僅供參考）試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測(cè)范圍：22pg/mL-800pg/mL保存條件及有效期：1.試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月[詳細(xì)]

  2018-11-07 14:16

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）ELISA試劑盒使用說(shuō)明書

  我司ELISA試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量保證，價(jià)格優(yōu)惠，試劑盒森貝伽。本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）水平。用純化的小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1），再與HRP標(biāo)記的沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠沉默調(diào)節(jié)蛋白1（SIRT1）濃度。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說(shuō)明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品：900pg/mL0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為600pg/mL，400pg/mL，200pg/mL，100pg/mL，50pg/mL）。加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng)：試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。底物請(qǐng)避光保存。嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說(shuō)明書有異，以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。（此圖僅供參考）試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測(cè)范圍：22pg/mL-800pg/mL保存條件及有效期：1.試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月[詳細(xì)]

  2018-11-07 14:16

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)胞蛋白磷酸酶1（PP1）活性定磷比色法定量檢測(cè)

  要用途細(xì)胞蛋白磷酸酶1（PP1）活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用特異性底物糖原磷酸化酶a，在PP2AYZ劑存在下，受到PP1去磷酸化后，釋放出游離磷酸根，與孔雀綠染料發(fā)生顯色反應(yīng)后，采用比色法測(cè)定其峰值的變化，以此進(jìn)行測(cè)算單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)胞裂解懸液樣品包括免疫沉淀復(fù)合物和粗提或部分純化酶樣品的蛋白磷酸化酶1活性及其YZ劑的檢測(cè)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞凋亡、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，反應(yīng)優(yōu)化，檢測(cè)敏感。技術(shù)背景蛋白磷酸化酶1（proteinphosphatase1；PP1；EC3.1.3.48），又稱為1型蛋白絲/蘇氨酸磷酸化酶，是7個(gè)主要絲/蘇氨酸磷酸化酶（包括PP1、PP2A、PP2B、PP2C、PP4、PP5、PP6）成員之一，從酵母到人類高度進(jìn)化保留。其參與調(diào)節(jié)多種重要的細(xì)胞生理功能，包括糖原代謝、細(xì)胞分裂、肌肉收縮、信號(hào)傳導(dǎo)、神經(jīng)元功能、轉(zhuǎn)錄、翻譯等，以及與HIV-1轉(zhuǎn)錄過程的調(diào)節(jié)，并且與老年性癡呆等多種疾病密切相關(guān)。PP1分子結(jié)構(gòu)表面的3個(gè)凹槽及β12-β13Loop環(huán)結(jié)構(gòu)，是底物與YZ劑的結(jié)合部位；其催化亞體為37kd，調(diào)節(jié)亞體有2種：目標(biāo)亞體和YZ亞體?；谔禺愋缘孜锾窃姿峄竌，在PP2AYZ劑福司曲星（fostriecin；FOS）存在的情況下，受到蛋白磷酸化酶1的去磷酸化作用，釋放出游離磷酸根，與孔雀綠（malachitegreen）染料發(fā)生顯色反應(yīng)后，在分光光度儀下（660nm波長(zhǎng)）產(chǎn)生峰值的變化，由此測(cè)定蛋白磷酸化酶1（PP1）的特異活性。[詳細(xì)]

  2018-11-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)胞丙酮酸激酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

  細(xì)胞丙酮酸激酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）[詳細(xì)]

  2024-09-20 13:41

  應(yīng)用文章

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)胞酪氨酸酶（tyrosinase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

  主要用途細(xì)胞酪氨酸酶（tyrosinase）活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過酪氨酸酶反應(yīng)系統(tǒng)中底物酪氨酸氧化后，產(chǎn)生多巴色素，呈現(xiàn)吸光峰值的變化，即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解懸液樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種人體和動(dòng)物細(xì)胞，尤其是黑色素細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞裂解懸液樣品中酪氨酸酶的活性檢測(cè)，以及YZ劑篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。技術(shù)背景酪氨酸酶（tyrosinase；EC1.14.18.1）是一種單酚單加氧酶（monophenolmonooxygenase），又稱為單酚酶（monophenolase）或單酚二羥基苯丙氨酸：O2氧化還原酶（monophenoldihydroxyphenylalanin：O2oxidoreductase），具有雙功能的含銅糖蛋白，廣泛存在于植物、酵母和動(dòng)物組織中，其蛋白結(jié)構(gòu)、大小、糖基化方式、激活特征等都不同。人體酪氨酸酶是一個(gè)跨膜蛋白，而催化結(jié)構(gòu)域在黑色素細(xì)胞（melanocyte）或色素細(xì)胞的黑色素器（melanosome）里。酪氨酸酶通過催化L-酪氨酸（L-tyrosine）等的o-羥基化（o-hydroxylation）反應(yīng)變成L-多巴（L-dopamine），進(jìn)而氧化產(chǎn)生黑色素底物多巴醌（dopaquinone），從而由多巴色素（dopachrome）轉(zhuǎn)化為黑色素（melanin）中的真黑素（eumelanin），以及其它色素，包括毛發(fā)和眼睛色素。紫外線可以激活酪氨酸酶活性，嚴(yán)重時(shí)，會(huì)引起色素沉著（hyperpigmentation）。酪氨酸酶基因突變將導(dǎo)致I型眼皮膚白化?。╫culocutaneousalbinism）。酪氨酸酶YZ劑成為增白化妝品的重要元素?；诘孜锢野彼幔诶野彼崦傅拇呋?，產(chǎn)生多巴色素，通過其吸光值的變化（475nm波長(zhǎng)），來(lái)定量測(cè)定酪氨酸酶的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為：[詳細(xì)]

  2018-11-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)胞丙酮酸激酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

  主要用途細(xì)胞丙酮酸激酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶的酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取懸液樣品（動(dòng)物、人體、植物、昆蟲等）丙酮酸激酶的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。技術(shù)背景丙酮酸激酶（PyruvateKinase；PK）是細(xì)胞代謝的調(diào)節(jié)酶，催化細(xì)胞糖酵解的Z后反應(yīng)：將磷酸烯醇丙酮酸（phosphoenolpyruvate；PEP）轉(zhuǎn)化成丙酮酸（pyruvate），同時(shí)產(chǎn)生ATP。丙酮酸激酶由4個(gè)相同的亞單位構(gòu)成，在肝組織、肌肉組織和紅細(xì)胞中有不同類型的異構(gòu)體。果糖-2，6-二磷酸（Fructose-2，6-bisphosphate；F2，6BP）是該酶的激活劑，而ATP、蛋氨酸（alanine）、乙酰輔酶A（Acetyl-CoA）是該酶的YZ劑。丙酮酸激酶的活性檢測(cè)用來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞或組織，包括紅細(xì)胞的損害狀況?；诹姿嵯┐急徂D(zhuǎn)化成丙酮酸后，通過乳酸脫氫酶系統(tǒng)，測(cè)定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reducednicotinamideadeninedinucleotide；NADH）轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamideadeninedinucleotide；NAD）的峰值變化（340nm波長(zhǎng)），來(lái)定量分析丙酮酸激酶的活性。丙酮酸激酶反應(yīng)系統(tǒng)為：[詳細(xì)]

  2018-11-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-3活性比色法定量檢測(cè)

  主要用途細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-3活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過四肽化合物底物Ac-DEVD-pNA，受到半胱氨酸蛋白酶-3的水解，釋放黃色對(duì)硝基苯胺，產(chǎn)生吸光峰值的變化，即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品（動(dòng)物、人體、昆蟲等）半胱氨酸蛋白酶-3（CASPASE-3）的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。技術(shù)背景半胱氨酸蛋白酶（Cysteine-requiringAspartateprotease；CASPASE），或稱半胱天冬蛋白酶，是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的一類蛋白酶家屬。半胱氨酸蛋白酶-3（CASPASE-3；EC3.4.22.56）是半胱氨酸蛋白酶家屬中CED-3（CellDeathGeneNumber3；秀麗隱桿線蟲細(xì)胞死亡基因數(shù)3）分支的一種，又稱CPP32（CysteineProteinaseProtein32kd；半胱氨酸蛋白酶蛋白32）、apopain（凋亡素）、Yama（印度傳說(shuō)中的死亡之神）等。半胱氨酸蛋白酶-3前體為32kd，被切離為17kd和11kd而激活細(xì)胞凋亡。其底物是多聚ADP-核糖多聚酶（poly（ADP-ribose）polymerase；PARP）、半胱氨酸蛋白酶激活DNA酶YZ劑（ICAD）等。半胱氨酸蛋白酶-3的活性檢測(cè)用來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞或組織的凋亡狀況?；谌斯ず铣傻乃碾幕衔锏孜顰c-DEVD-pNA（acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-p-Nithoaniline；乙酰天冬氨酰谷氨酰頡氨酰天冬氨酰對(duì)硝基苯胺）受到半胱氨酸蛋白酶-3的水解，釋放有色對(duì)硝基苯胺，在分光光度儀（405nm波長(zhǎng)）下，測(cè)定吸光峰值的變化，來(lái)定量測(cè)定半胱氨酸蛋白酶-3的活性。半胱氨酸蛋白酶-3反應(yīng)系統(tǒng)為：[詳細(xì)]

  2018-11-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 組織乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

  組織乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）[詳細(xì)]

  2015-05-28 00:00

  期刊論文

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)胞脂質(zhì)比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

  細(xì)胞脂質(zhì)比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）[詳細(xì)]

  2015-05-12 00:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

  細(xì)菌異檸檬酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）[詳細(xì)]

  2015-04-08 00:00

  期刊論文

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 血液總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

  血液總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）[詳細(xì)]

  2015-03-30 00:00

  實(shí)驗(yàn)操作

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 體液總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

  體液總脂肪酶（lipase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）[詳細(xì)]

  2015-03-30 00:00

  安裝說(shuō)明

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)菌琥珀酸脫氫酶（SDH）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書 （中文版）

  細(xì)菌琥珀酸脫氫酶（SDH）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書 （中文版）[詳細(xì)]

  2015-01-05 00:00

  期刊論文

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 純化線粒體琥珀酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

  純化線粒體琥珀酸脫氫酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）主要用途純化線粒體琥珀酸脫氫酶（SDH）活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用合成電子受體染料，通過反應(yīng)系統(tǒng)測(cè)定染料還原后峰值的降低，即采用比色法測(cè)算樣品中單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種純化線粒體裂解懸液樣品琥珀酸脫氫酶的特異性活性檢測(cè)。用于衰老、能量代謝、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，反應(yīng)優(yōu)化，檢測(cè)敏感。技術(shù)背景琥珀酸脫氫酶（succinatedehydrogenase；SDH；EC1.3.99.1）是三羧酸循環(huán)（tricarboxylicacidcycle；TCA）或Krebs循環(huán)中與細(xì)胞線粒體膜相關(guān)的重要元素，位于線粒體內(nèi)膜，參與細(xì)胞呼吸鏈。琥珀酸脫氫酶由27kd和70kd兩個(gè)單體組成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反應(yīng)，產(chǎn)生延胡索酸（furmarate），通過黃素腺嘌呤二核苷酸（FlavinAdenineDinucleotide；FAD）傳遞電子?；阽晁崦摎涿傅姆磻?yīng)原理，使用人工電子受體染料二氯靛酚鈉（2,6-Dichloroindophenolsodium；DCIP），接受來(lái)自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸（ReducedflavinAdenineDinucleotide；FADH2）的電子，而被還原，在分光光度儀下，其吸光值（600nm波長(zhǎng)）的變化，來(lái)測(cè)算琥珀酸脫氫酶的活性。其反應(yīng)方式為：產(chǎn)品內(nèi)容清理液（ReagentA）XX毫升裂解液（ReagentB）XX毫升緩沖液（ReagentC）XX毫升反應(yīng)液（ReagentD）XX毫升底物液（ReagentE）XX毫升陰性液（ReagentF）XX微升產(chǎn)品說(shuō)明書1份保存方式保存清理液（ReagentA）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融；反應(yīng)液（ReagentD）含有毒性物質(zhì)，避免直接用手接觸；底物液（ReagentE），避免光照；有效保證3月用戶自備15毫升錐形離心管：用于樣品制備的容器1.5毫升離心管：用于樣品制備和保存的容器4℃（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品處理DOUNCE勻漿器：用于裂解組織恒溫培養(yǎng)箱或恒溫水槽：用于反應(yīng)物孵育比色皿：用于比色測(cè)定的容器分光光度儀：用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化；底物液（ReagentE）注意避光。然后進(jìn)行下列操作。一、樣品準(zhǔn)備手術(shù)取出動(dòng)物組織，并秤重以確定200毫克組織重量（選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管（選擇步驟）加入XX毫升清理液（ReagentA）清洗（選擇步驟）抽去清洗液移入到一個(gè)液氮凍存管即刻放進(jìn)液氮罐過夜次日從液氮罐里取出，即刻（Z快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組織凍融）放進(jìn)一個(gè)15毫升錐形離心管加入置于冰槽里的XX毫升裂解液（ReagentB）渦旋震蕩5秒，充分混勻即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約20至40下）（注意：參見注意事項(xiàng)8）將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1500g小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的1.5毫升離心管放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為10000g小心抽去上清液加入XX微升裂解液（ReagentB），混勻顆粒群移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)（注意：建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－GMS30030.1）放進(jìn)－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用二、測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品，置于冰槽里設(shè)定好分光光度儀（溫度為25℃）：波長(zhǎng)600nm，間隔60秒，讀數(shù)6次（共5分鐘），并置零緩沖液（ReagentC）在室溫下均衡溫度背景對(duì)照測(cè)定移取XX微升緩沖液（ReagentC）到新的比色皿加入XX微升反應(yīng)液（ReagentD）加入XX微升底物液（ReagentE）放進(jìn)25℃培養(yǎng)箱里靜置3分鐘[詳細(xì)]

  2018-11-08 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書

  主要用途細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2（MMP-2）活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過含硫多肽底物以及特定YZ劑存在與否的情況下，受到MMP2的水解，釋放出巰基，進(jìn)而使用Ellman試劑，產(chǎn)生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物吸光峰值的變化，即采用比色法來(lái)測(cè)定細(xì)胞裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品（動(dòng)物、人體）、部分或完全純化酶樣品中基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性定量檢測(cè)，以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，安全可靠。技術(shù)背景基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrixmetalloproteinases；MMPs）是一類結(jié)構(gòu)高度同源的分泌型或膜相關(guān)性鋅內(nèi)肽酶的總稱，因含有金屬（鋅、鈣）離子而得名。其功能在于分解細(xì)胞外基質(zhì)成分。迄今為止發(fā)現(xiàn)的MMPs至少有28種，幾乎能降解除多糖以外的全部細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix）成分，同時(shí)參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、組織再吸收（tissueresorption）、疾病發(fā)生，例如關(guān)節(jié)炎、癌細(xì)胞浸入轉(zhuǎn)移等。根據(jù)降解的底物不同可將MMPs分為4大類：（1）膠原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖；（2）明膠酶（Ⅳ型膠原酶）：MMP2、MMP9，又稱明膠酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維；（3）基質(zhì)溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12，主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金屬蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內(nèi)絕大多數(shù)細(xì)胞并不儲(chǔ)備MMPs，當(dāng)需要MMPs的信號(hào)傳遞到細(xì)胞后才臨時(shí)合成，合成的MMPs以無(wú)活性的酶原（proenzyme）形式分泌到細(xì)胞外，隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活，一種激活的MMPs可激活另一種MMPs，形成瀑布效應(yīng)?；|(zhì)金屬蛋白酶-2，又稱明膠酶A（gelatinase-A）或IV型膠原酶（typeIVcollagenase），其前體分子量為72kDa，激活后分子量為62和56kDa。它在血清或細(xì)胞上清中濃度通常為10至200納克/毫升。它的作用目標(biāo)是天然和變性膠原蛋白（collagens）、纖維連接蛋白（fibronectin）、彈性纖維蛋白（elastin）、層粘連蛋白-5（laminin-5）、前體腫瘤壞死因子-α（pro-TNF-α）和神經(jīng)（蛋白）聚糖（neurocan）?；|(zhì)金屬蛋白酶-2與腫瘤發(fā)展與轉(zhuǎn)移、血管形成、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病有關(guān)?；诤蚨嚯模╰hiopeptide）底物Ac-PLG（2-mercapto-4-methyl-pentanoyl）-LG-OC2H5，在特異性YZ劑OA-Hy存在與否的條件下，受到MMP2的水解，釋放出巰基（sulfhydrylgroup），進(jìn)而與Ellman試劑5,5-二硫基-雙（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoicacid）；DTNB]反應(yīng)后，產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoicacid；TNB），通過其吸收峰值的變化（412nm波長(zhǎng)），來(lái)定量測(cè)定細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2的特異活性?；|(zhì)金屬蛋白酶2反應(yīng)系統(tǒng)為：[詳細(xì)]

  2018-11-08 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  • 

• 細(xì)胞PTEN活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書

  細(xì)胞PTEN活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書主要用途細(xì)胞PTEN活性定磷比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用特異性合成底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），在PTEN去磷酸化后，釋放出游離磷酸根，與孔雀綠染料發(fā)生顯色反應(yīng)后，采用比色法測(cè)定其峰值的變化，以此進(jìn)行測(cè)算單位酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)胞裂解懸液樣品的PTEN活性及其YZ劑的檢測(cè)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞凋亡、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)、神經(jīng)病變等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶，嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，反應(yīng)優(yōu)化，檢測(cè)敏感。技術(shù)背景細(xì)胞張力蛋白同源在10號(hào)染色體缺失性磷酸酶（phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosometen；PTEN；EC3.1.3.67），又稱為多發(fā)性晚期腫瘤突變基因1（mutatedinmultipleadvancedcancers1；MMAC1），是一個(gè)腫瘤YZ基因，位于染色體10q23.3，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物515kb，蛋白產(chǎn)物175氨基酸。PTEN蛋白含有一酪蛋白磷酸酶的功能區(qū)和約175個(gè)氨基酸左右的與骨架蛋白張力蛋白（tenasin）、輔助蛋白（auxilin）同源的區(qū)域，是一種雙重特異性磷酸酶，能使酪氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、磷酯酰肌醇（phosphoinositide）等去磷酸化。PTEN具有調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、防止細(xì)胞過度生長(zhǎng)和分開裂解、參與細(xì)胞凋亡、粘附、遷移、浸潤(rùn)，控制細(xì)胞內(nèi)磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate；PIP3）水平，調(diào)控Akt/PKB信號(hào)通路等功能。PTEN基因突變和缺失將導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，以及多發(fā)性錯(cuò)構(gòu)瘤綜合征（Cowdensyndrome）等?；诘孜锪字＜〈?3,4,5-三磷酸，在PTEN的催化下，水解產(chǎn)生磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2），同時(shí)釋放出游離磷酸根，進(jìn)而與孔雀綠染料發(fā)生顯色反應(yīng)產(chǎn)生其峰值的變化（660nm波長(zhǎng)），以此測(cè)算PTEN的活性。產(chǎn)品內(nèi)容清理液（ReagentA）120毫升裂解液（ReagentB）10毫升緩沖液（ReagentC）1毫升陰性液（ReagentD）1毫升反應(yīng)液（ReagentE）200微升終止液（ReagentF）1毫升顯色液（ReagentG）4毫升標(biāo)準(zhǔn)液（ReagentH）500微升產(chǎn)品說(shuō)明書1份保存方式保存裂解液（ReagentB）、緩沖液（ReagentC）、反應(yīng)液（ReagentE）和顯色液（ReagentG）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融；其余的保存在4℃冰箱里；終止液（ReagentF）和顯色液（ReagentG）具有腐蝕性，避免直接用手接觸；顯色液（ReagentG）避免光照，有效保證6月用戶自備15毫升離心管：用于樣品處理的容器1.5毫升離心管：用于樣品處理和保存的容器細(xì)胞刮脫棒：用于貼壁細(xì)胞脫離（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品收集培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)物比色皿：用于比色的容器分光光度儀：用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液放進(jìn)冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好25cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶或60mm細(xì)胞培養(yǎng)皿的待測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞（5X106細(xì)胞）小心加入3毫升預(yù)冷的清理液（ReagentA），覆蓋生長(zhǎng)表面小心抽去清理液使用細(xì)胞刮脫棒輕柔刮脫細(xì)胞加入3毫升清理液（ReagentA），混勻細(xì)胞移入到預(yù)冷的15毫升錐形離心管（注意：懸浮細(xì)胞從這一步驟開始）放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g小心抽去上清液加入500微升裂解液（ReagentB），充分混勻轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管QL渦旋震蕩15秒置于冰槽里孵育30分鐘放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415）小心移取500微升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管移取2微升進(jìn)行蛋白定量測(cè)定（注意：建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－HL30030.1）即刻放進(jìn)－70℃保存或置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作二、測(cè)定準(zhǔn)備準(zhǔn)備好待測(cè)樣品（例如細(xì)胞裂解萃取液等），置于冰槽里（注意：樣品須澄清）設(shè)定好分光光度儀（溫度為30℃）：波長(zhǎng)為660nm，并置零準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管按下表分別加入陰性液（ReagentD）和標(biāo)準(zhǔn)液（ReagentH）到每個(gè)離心管，混勻?qū)?至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用，避免光照；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表管號(hào)陰性液（ReagentD）標(biāo)準(zhǔn)液（ReagentH）測(cè)定體系標(biāo)準(zhǔn)磷濃度10100微升20微摩爾/升225微升75微升15微摩爾/升350微升50微升10微摩爾/升475微升25微升5微摩爾/升5100微升00標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定移取20微升陰性液（ReagentD）到新的比色皿加入5微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液在37℃溫度下孵育10分鐘加入8微升終止液（ReagentF），混勻加入100微升顯色液（ReagentG），混勻室溫下靜置15分鐘，避免光照即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)：獲得吸光讀數(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至7四次構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光單位（A）；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)磷濃度（微摩爾/升）樣品背景測(cè)定移取20微升緩沖液（ReagentC）到新的比色皿加入5微升待測(cè)樣品（總量100微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白）在37℃溫度下孵育10分鐘加入8微升終止液（ReagentF），混勻加入100微升顯色液（ReagentG），混勻室溫下靜置15分鐘，避免光照即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)：獲得吸光讀數(shù)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品背景對(duì)應(yīng)磷濃度樣品活性測(cè)定移取10微升緩沖液（ReagentC）到新的比色皿加入5微升待測(cè)樣品（總量100微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白）在37℃溫度下孵育2分鐘加入10微升反應(yīng)液（ReagentE）在37℃溫度下孵育10分鐘加入8微升終止液（ReagentF），混勻加入100微升顯色液（ReagentG），混勻室溫下靜置15分鐘，避免光照即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)：獲得吸光讀數(shù)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品活性對(duì)應(yīng)磷濃度計(jì)算樣品活性{[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品活性對(duì)應(yīng)磷濃度（微摩爾/升）根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品背景對(duì)應(yīng)磷濃度（微摩爾/升）]X5（體系倍數(shù)）X樣品稀釋倍數(shù)}÷10（反應(yīng)時(shí)間；分鐘）＝納摩爾磷/毫升/分鐘÷（樣品蛋白濃度）毫克/毫升＝納摩爾磷/毫克/分鐘注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為25次操作，包括5次標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定操作時(shí)，避免污染母液操作時(shí)，須戴手套終止液（ReagentF）和顯色液（ReagentG）具有腐蝕性，避免直接用手接觸樣品切忌使用磷酸緩沖液和脫氧膽酸納處理比色測(cè)定后，比色皿須清洗徹底如果用戶沒有660nm波長(zhǎng)，可以使用600至660nm的任一波長(zhǎng)替代顯示綠色表明具有較強(qiáng)酶活性空白對(duì)照讀數(shù)應(yīng)小于0.2建議待測(cè)樣本蛋白濃度為100微克/5微升；如果樣本酶活性過低或過高，則可以增加或降低樣本量；（本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－HL30030.1）鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶活性單位濃度定義：在37℃溫度下，pH8.0的情況下，每單位酶在單位時(shí)間內(nèi)（每分鐘）釋放1微摩爾的磷本公司提供系列磷酸化酶檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)準(zhǔn)確[詳細(xì)]

  2018-11-19 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

  |

  • 
  • 
  • 
  •