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細(xì)胞CDK2/CYCLIN A激酶活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法定量
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2018-11-18 10:00 780閱讀次數(shù)
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主要用途細(xì)胞CDK2/CYCLINA激酶活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過熒光探針EDANS供體和DABCYL受體雙重標(biāo)記的多肽底物,在CDK2/CYCLINEYZ劑的存在下,受到CDK2/CYCLINA的磷酸化后,不能被位點(diǎn)特異性氨基肽酶切離,而發(fā)生熒光峰值的降低,即采用熒光共振能量轉(zhuǎn)移法來測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或完全純化酶樣品中CDK2/CYCLINA激酶的特異活性定量檢測(cè),以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術(shù)背景細(xì)胞周期素依賴性激酶2(cyclindependentkinase2;CDK2;EC2.7.11.22),又稱為細(xì)胞分裂周期蛋白1(celldivisioncycle1;CDC1)或p33,屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶(serine/threonineproteinkinase)家屬成員之一。其與酵母細(xì)胞的cdc28和cdc2高度進(jìn)化保留。細(xì)胞周期素依賴性激酶2的催化亞體,與細(xì)胞周期素E然后A結(jié)合,允許細(xì)胞由G1期進(jìn)入DNA合成期,達(dá)到調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、DNA復(fù)制、細(xì)胞分裂等。p21Cip1(CDKN1A)andp27Kip1(CDKN1B)是CDK2激酶的YZ劑。CDK2/CYCLINA激酶的磷酸化目標(biāo)序列為HHASPRK?;诹姿峄嚯木哂锌拱被拿盖须x的功能,通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(Fluorescenceresonanceenergytransfer;FRET),即傳遞激發(fā)狀態(tài)的能量由處于較短波長(zhǎng)的供體(donor)到覆蓋供體波長(zhǎng)的受體(acceptor),使得距離依賴性反應(yīng)的供體的散發(fā)光子淬滅(quench),使用2個(gè)熒光探針EDANS供體和DABCYL受體作為FRET對(duì),來標(biāo)記的CDK2多肽底物的兩端,在氨基肽酶(aminopeptidase)的作用下,釋放出強(qiáng)烈熒光的EDANS;一旦在CDK2/CYCLINEYZ劑二氨基吡唑-1氫4-基偶氮酚【4-(3,5-diamino-1H-pyrazol-4-ylazo)-phenol】的存在下,底物受到CDK2/CYCLINA的磷酸化(由ATP的γ-磷酸根到多肽上單一絲氨酸殘基分子上),底物將不能被位點(diǎn)特異性氨基肽酶切離,而無法釋放出EDANS,由此根據(jù)產(chǎn)物熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長(zhǎng)340nm,散發(fā)波長(zhǎng)490nm)的降低,來定量測(cè)定細(xì)胞周期素依賴性激酶2/細(xì)胞周期素A的特異活性。CDK2/CYCLINA反應(yīng)系統(tǒng)為:
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細(xì)胞CDK2/CYCLIN A激酶活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法定量
- 主要用途細(xì)胞CDK2/CYCLINA激酶活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過熒光探針EDANS供體和DABCYL受體雙重標(biāo)記的多肽底物,在CDK2/CYCLINEYZ劑的存在下,受到CDK2/CYCLINA的磷酸化后,不能被位點(diǎn)特異性氨基肽酶切離,而發(fā)生熒光峰值的降低,即采用熒光共振能量轉(zhuǎn)移法來測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或完全純化酶樣品中CDK2/CYCLINA激酶的特異活性定量檢測(cè),以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術(shù)背景細(xì)胞周期素依賴性激酶2(cyclindependentkinase2;CDK2;EC2.7.11.22),又稱為細(xì)胞分裂周期蛋白1(celldivisioncycle1;CDC1)或p33,屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶(serine/threonineproteinkinase)家屬成員之一。其與酵母細(xì)胞的cdc28和cdc2高度進(jìn)化保留。細(xì)胞周期素依賴性激酶2的催化亞體,與細(xì)胞周期素E然后A結(jié)合,允許細(xì)胞由G1期進(jìn)入DNA合成期,達(dá)到調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、DNA復(fù)制、細(xì)胞分裂等。p21Cip1(CDKN1A)andp27Kip1(CDKN1B)是CDK2激酶的YZ劑。CDK2/CYCLINA激酶的磷酸化目標(biāo)序列為HHASPRK。基于磷酸化多肽具有抗氨基肽酶切離的功能,通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(Fluorescenceresonanceenergytransfer;FRET),即傳遞激發(fā)狀態(tài)的能量由處于較短波長(zhǎng)的供體(donor)到覆蓋供體波長(zhǎng)的受體(acceptor),使得距離依賴性反應(yīng)的供體的散發(fā)光子淬滅(quench),使用2個(gè)熒光探針EDANS供體和DABCYL受體作為FRET對(duì),來標(biāo)記的CDK2多肽底物的兩端,在氨基肽酶(aminopeptidase)的作用下,釋放出強(qiáng)烈熒光的EDANS;一旦在CDK2/CYCLINEYZ劑二氨基吡唑-1氫4-基偶氮酚【4-(3,5-diamino-1H-pyrazol-4-ylazo)-phenol】的存在下,底物受到CDK2/CYCLINA的磷酸化(由ATP的γ-磷酸根到多肽上單一絲氨酸殘基分子上),底物將不能被位點(diǎn)特異性氨基肽酶切離,而無法釋放出EDANS,由此根據(jù)產(chǎn)物熒光強(qiáng)度(激發(fā)波長(zhǎng)340nm,散發(fā)波長(zhǎng)490nm)的降低,來定量測(cè)定細(xì)胞周期素依賴性激酶2/細(xì)胞周期素A的特異活性。CDK2/CYCLINA反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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Lumina熒光分光光度計(jì)測(cè)量生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移
- 使用ThermoFisherLumina熒光分光光度計(jì)測(cè)量生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移分子之間的能量轉(zhuǎn)移大多是由輻射導(dǎo)致的。然而當(dāng)不同熒光物質(zhì)非??拷鼤r(shí)(<10nm),會(huì)發(fā)生共振能量轉(zhuǎn)移(RET)。熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)是一種典型的RET現(xiàn)象。在FRET中,使用強(qiáng)光照射以激發(fā)供體能量,處于激發(fā)態(tài)的供體將一部分或全部能量轉(zhuǎn)移給受體,受體被激發(fā)。如果受體熒光量子產(chǎn)率為零,則發(fā)生能量轉(zhuǎn)移熒光熄滅;如果受體也是一種熒光發(fā)射體則呈現(xiàn)出受體的熒光。光照下很多熒光物質(zhì)會(huì)逐漸失去其熒光特性,這種現(xiàn)象被稱為光漂白。為了提高靈敏度,近期生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)得到了廣泛應(yīng)用1。BRET使用生物發(fā)光物質(zhì)代替了熒光供體。由于BRET不在需要直射光線以激發(fā)供體,不存在放射性的能量轉(zhuǎn)移,所以避免了對(duì)樣品的害。熒光素酶是一種螢火蟲體內(nèi)的生物發(fā)光酶,被廣泛用于BRET研究2。本實(shí)驗(yàn)中,選擇Luc8(海腎熒光素酶)作為供體,該物質(zhì)由海腎(Renillareinformis)基因突變而來。Luc8的生物熒光峰值接近480nm。[詳細(xì)]
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2018-09-12 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞γ分泌酶(γ-SECRETASE)活性熒光共振中文版
- 細(xì)胞γ分泌酶(γ-SECRETASE)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途細(xì)胞γ分泌酶(γ-SECRETASE)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過熒光探針NMA供體和DNP受體雙重標(biāo)記的多肽底物,在γ分泌酶的水解作用下,釋放出強(qiáng)烈熒光的NMA,而發(fā)生熒光峰值的變化,即采用熒光共振能量轉(zhuǎn)移法來測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或完全純化酶樣品中γ分泌酶活性的定量檢測(cè),以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,安全可靠。技術(shù)背景γ分泌酶(γ-SECRETASE;EC3.4.24.81),是一種多亞體蛋白酶復(fù)合物(multisubunitproteasecomplex),由4種蛋白組成:早老素蛋白(Presenilin;PS)、呆蛋白(nicastrin)、前咽缺陷蛋白-1(anteriorpharynxdefective1;APH1)和早老素增強(qiáng)蛋白2(presenilinenhancer2)。其為整合性跨膜蛋白,在早期內(nèi)質(zhì)網(wǎng)里組裝和成熟,后期內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行目標(biāo)蛋白切離。γ分泌酶切離由β分泌酶切離淀粉樣前體蛋白(amyloidprecursorprotein;APP)產(chǎn)生C99和α分泌酶切離的C83片段,前者成為具有神經(jīng)毒性的40至42氨基酸長(zhǎng)的淀粉樣β-多肽(amyloid-βpeptide;Aβ),是阿茨罕默疾?。╝lzheimerdisease;AD)的病理變化(淀粉樣斑;amyloidplaque)的主要成分,由此γ分泌酶成為阿茨罕默疾病ZL的抗淀粉樣多肽藥物靶標(biāo)。γ分泌酶與NOTCH調(diào)節(jié)有關(guān)?;诘孜锒嚯腉ly-Gly-Val-Val-Ile-Ala-Thr-Val(源于淀粉樣淀粉樣β-多肽前體蛋白序列708-715),通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(Fluorescenceresonanceenergytransfer;FRET),即傳遞激發(fā)狀態(tài)的能量由處于較短波長(zhǎng)的供體(donor)到覆蓋供體波長(zhǎng)的受體(acceptor),使得距離依賴性反應(yīng)的供體的散發(fā)光子淬滅(quench),使用2個(gè)熒光探針N-甲基氨茴酰NMA(N-Methyl-anthraniloyl)供體和二硝基苯基DNP(2,4-Dinitrophenyl)受體作為FRET對(duì),來標(biāo)記的γ分泌酶選擇性多肽底物的兩端,在γ分泌酶的水解作用下,在丙氨酰(alaninyl)和蘇氨酰(threoninyl)殘基處切離,釋放出強(qiáng)烈熒光的NMA,在熒光分光光度儀下(激發(fā)波長(zhǎng)340-360nm,散發(fā)波長(zhǎng)440-450nm),來定量測(cè)定γ分泌酶的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升底物液(ReagentD)微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentE)微升產(chǎn)品說明書1份[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞丙酮酸激酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途細(xì)胞丙酮酸激酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶的酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用比色法來測(cè)定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取懸液樣品(動(dòng)物、人體、植物、昆蟲等)丙酮酸激酶的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景丙酮酸激酶(PyruvateKinase;PK)是細(xì)胞代謝的調(diào)節(jié)酶,催化細(xì)胞糖酵解的Z后反應(yīng):將磷酸烯醇丙酮酸(phosphoenolpyruvate;PEP)轉(zhuǎn)化成丙酮酸(pyruvate),同時(shí)產(chǎn)生ATP。丙酮酸激酶由4個(gè)相同的亞單位構(gòu)成,在肝組織、肌肉組織和紅細(xì)胞中有不同類型的異構(gòu)體。果糖-2,6-二磷酸(Fructose-2,6-bisphosphate;F2,6BP)是該酶的激活劑,而ATP、蛋氨酸(alanine)、乙酰輔酶A(Acetyl-CoA)是該酶的YZ劑。丙酮酸激酶的活性檢測(cè)用來評(píng)價(jià)細(xì)胞或組織,包括紅細(xì)胞的損害狀況?;诹姿嵯┐急徂D(zhuǎn)化成丙酮酸后,通過乳酸脫氫酶系統(tǒng),測(cè)定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide;NAD)的峰值變化(340nm波長(zhǎng)),來定量分析丙酮酸激酶的活性。丙酮酸激酶反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞NADPH氧化酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途細(xì)胞NADPH氧化酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用化學(xué)發(fā)光分子光澤精受到NADPH氧化酶催化產(chǎn)生的超氧陰離子O2-的還原,然后在其還原過程中釋放能量,由此測(cè)定樣品中特異性氧化還原酶(oxidoreductase)的活性,即采用發(fā)光探測(cè)儀(Luminometer)測(cè)定其相對(duì)冷光單位(RLU)的變化,以此進(jìn)行測(cè)算酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適合于各種細(xì)胞樣品(動(dòng)物或人體)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NADPH氧化酶)的特異活性檢測(cè)。用于免疫、血液研究、蛋白組學(xué)、病理生理學(xué)等研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶,嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,反應(yīng)優(yōu)化,檢測(cè)敏感。技術(shù)背景NADPH氧化酶,通常稱為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(reducednicotinamideadeninedinucleotidephosphateoxidase;NADPHoxidase;EC1.6.3.1)或還原型輔酶II氧化酶,是機(jī)體防御機(jī)制中的重要元素。NADPH氧化酶由6個(gè)亞體構(gòu)成:RhoGTP酶(Rhoguanosinetriphosphatase)和5個(gè)phox(吞噬細(xì)胞氧化酶;phagocyticoxidase)。其中主要包含細(xì)胞膜嵌合蛋白質(zhì)分子(gp91phox、p22phox、flavocytochromeb558等),以及位在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的蛋白質(zhì)分子(p47phox、p67phox、p40phox、Rac1、Rac2等)。其Z特征性的酶活性是超氧化物歧化酶敏感的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶。細(xì)胞膜上的NADPH氧化酶被激活,將還原型輔酶Ⅱ(NADPH)轉(zhuǎn)變?yōu)檠趸洼o酶Ⅱ(NADP),氧分子則獲得電子形成超氧陰離子O2-,由O2-又可生成H2O2和OH-。其超氧陰離子產(chǎn)物具有殺死微生物的功能。NADPH氧化酶異常將導(dǎo)致慢性肉芽腫病(ChronicGranulomatousDisease;CGD)?;诘孜颪ADPH,受到NADPH氧化酶的催化作用,產(chǎn)生超氧陰離子O2-,進(jìn)而超氧陰離子將化學(xué)發(fā)光分子光澤精(lucigenin)還原,并釋放能量,通過發(fā)光探測(cè)儀(Luminometer;470nm波長(zhǎng))檢測(cè),來測(cè)定NADPH氧化酶的活性。其反應(yīng)方式為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞丙酮酸激酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 細(xì)胞丙酮酸激酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2024-09-20 13:41
應(yīng)用文章
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熒光顯微成像系統(tǒng)可用于研究細(xì)胞形態(tài)、熒光探針檢測(cè)、熒光共振能量轉(zhuǎn)移和快速分子過程.
- 熒光顯微成像系統(tǒng)可用于研究細(xì)胞形態(tài)、熒光探針檢測(cè)、熒光共振能量轉(zhuǎn)移和快速分子過程.[詳細(xì)]
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2013-10-22 00:00
安裝說明
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大鼠周期素依賴性激酶2(CDK2)ELISA試劑盒
- 大鼠周期素依賴性激酶2(CDK2)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2016-08-03 00:00
操作手冊(cè)
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細(xì)菌丙酮酸激酶(PK)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
- 細(xì)菌丙酮酸激酶總活性光度法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途細(xì)菌丙酮酸激酶總活性光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶的酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用光度法來測(cè)定細(xì)菌裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)菌細(xì)胞裂解萃取懸液樣品丙酮酸激酶的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景丙酮酸激酶(PyruvateKinase;PK;EC2.7.1.40),全稱為ATP-丙酮酸磷酸轉(zhuǎn)移酶(ATP:pyruvatephosphotransferase),是細(xì)胞代謝的調(diào)節(jié)酶,催化細(xì)胞糖酵解的Z后反應(yīng):將磷酸烯醇丙酮酸(phosphoenolpyruvate;PEP)轉(zhuǎn)化成丙酮酸(pyruvate),同時(shí)產(chǎn)生ATP。丙酮酸激酶在糖酵解中活性,而在葡糖生成過程中活性降低。細(xì)菌丙酮酸激酶為同源四聚體(homotetramer),240Kd分子量,分成兩種類型:一種是誘導(dǎo)型(inducible),由果糖-2,6-二磷酸(Fructose-2,6-bisphosphate;F2,6BP)激活;一種是結(jié)構(gòu)型(constitutive),由AMP激活?;诹姿嵯┐急徂D(zhuǎn)化成丙酮酸后,通過乳酸脫氫酶系統(tǒng),測(cè)定還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadeninedinucleotide;NAD)的峰值變化(340nm波長(zhǎng)),來定量分析丙酮酸激酶的活性。丙酮酸激酶反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升反應(yīng)液(ReagentD)毫升底物液(ReagentE)毫升陰性液(ReagentF)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存裂解液(ReagentB)、反應(yīng)液(ReagentD)和底物液(ReagentE)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于樣品制備和保存的容器15毫升錐形離心管:用于樣品制備的容器超聲儀:用于細(xì)菌裂解(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品操作比色皿或96孔板:用于光度分析的容器分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于光度分析[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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組織切割酶/β分泌酶(MENAPSIN 2;β-SECRETASE)活性熒光共振能量 轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織切割酶/β分泌酶(MENAPSIN 2;β-SECRETASE)活性熒光共振能量 轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-01-13 00:00
專利
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細(xì)胞NADPH氧化酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 細(xì)胞NADPH氧化酶活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-01-07 00:00
實(shí)驗(yàn)操作
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細(xì)胞谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途細(xì)胞谷氨酰胺酶(glutaminase)活性光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過谷氨酰胺酶和谷氨酸脫氫酶的酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)還原后吸光峰值的,即采用光度法來測(cè)定細(xì)胞裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解懸液樣品(動(dòng)物、人體、昆蟲等)谷氨酰胺酶的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景谷氨酰胺酶(glutaminase;EC3.5.1.2)是一種氨基酸水解酶(amidohydrolase),將谷氨酰胺脫氨基(deaminating)轉(zhuǎn)化為谷氨酸。其同工酶具有組織特異性:其功能在肝細(xì)胞中產(chǎn)生的氨,用于合成尿素;在腎小管上皮細(xì)胞中產(chǎn)生的氨通過氨離子分泌,調(diào)節(jié)腎的酸堿平衡;同時(shí)在膠質(zhì)細(xì)胞(glialcell)和腸細(xì)胞中也有表達(dá)。谷氨酰胺酶在藥物和食品工業(yè)方面應(yīng)用廣泛,例如調(diào)味品的生產(chǎn)和白血病ZL的藥物等?;诘孜锕劝滨0吩诠劝滨0访该傅淖饔孟?,轉(zhuǎn)化為谷氨酸和氨氣,進(jìn)而在谷氨酸脫氫酶的催化下,伴隨著氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizednicotinamideadeninedinucleotide;NAD+)轉(zhuǎn)化為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH),產(chǎn)生的吸光峰值的變化(340nm波長(zhǎng)),來定量分析谷氨酰胺酶的活性。其酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-3活性比色法定量檢測(cè)
- 主要用途細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-3活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過四肽化合物底物Ac-DEVD-pNA,受到半胱氨酸蛋白酶-3的水解,釋放黃色對(duì)硝基苯胺,產(chǎn)生吸光峰值的變化,即采用比色法來測(cè)定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體、昆蟲等)半胱氨酸蛋白酶-3(CASPASE-3)的活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景半胱氨酸蛋白酶(Cysteine-requiringAspartateprotease;CASPASE),或稱半胱天冬蛋白酶,是調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的一類蛋白酶家屬。半胱氨酸蛋白酶-3(CASPASE-3;EC3.4.22.56)是半胱氨酸蛋白酶家屬中CED-3(CellDeathGeneNumber3;秀麗隱桿線蟲細(xì)胞死亡基因數(shù)3)分支的一種,又稱CPP32(CysteineProteinaseProtein32kd;半胱氨酸蛋白酶蛋白32)、apopain(凋亡素)、Yama(印度傳說中的死亡之神)等。半胱氨酸蛋白酶-3前體為32kd,被切離為17kd和11kd而激活細(xì)胞凋亡。其底物是多聚ADP-核糖多聚酶(poly(ADP-ribose)polymerase;PARP)、半胱氨酸蛋白酶激活DNA酶YZ劑(ICAD)等。半胱氨酸蛋白酶-3的活性檢測(cè)用來評(píng)價(jià)細(xì)胞或組織的凋亡狀況?;谌斯ず铣傻乃碾幕衔锏孜顰c-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-p-Nithoaniline;乙酰天冬氨酰谷氨酰頡氨酰天冬氨酰對(duì)硝基苯胺)受到半胱氨酸蛋白酶-3的水解,釋放有色對(duì)硝基苯胺,在分光光度儀(405nm波長(zhǎng))下,測(cè)定吸光峰值的變化,來定量測(cè)定半胱氨酸蛋白酶-3的活性。半胱氨酸蛋白酶-3反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人細(xì)胞周期素(Cyclin A)ELISA試劑盒說明書
- 人細(xì)胞周期素(CyclinA)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人CyclinA單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CyclinA與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人CyclinA,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液,在450nm處測(cè)OD值,CyclinA濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CyclinA濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):20ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成40ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入40ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測(cè)程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CyclinA含量。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CyclinA檢測(cè)濃度小于31pg/ml。2.特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人CyclinA。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10.2%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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活體細(xì)胞溶酶體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒
- 主要用途活體細(xì)胞溶酶體形態(tài)/活性熒光染色試劑是一種旨在通過長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光染料特異性地聚集在溶酶體,并呈現(xiàn)紅色,用于分析和觀察溶酶體形態(tài)以及雙重染色或重疊染色定位的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種溶酶體(動(dòng)物、人體、昆蟲等)的形態(tài)觀察、活性探測(cè)和定位標(biāo)記。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,活體檢測(cè),分辨率高,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,滯留持久。技術(shù)背景溶酶體(lysosome)是一種普遍存在于真核細(xì)胞中的細(xì)胞器,含有酸性水解酶,例如酯酶、淀粉酶、蛋白酶、核酶等,分解各種細(xì)胞殘?jiān)蛷U棄物質(zhì),包括過多的或破損的其它細(xì)胞器、食物顆粒、吞噬的細(xì)菌和病毒等。其大小為0.5至1.5微米,球圓形,溶酶體內(nèi)pH為5.0左右。溶酶體功能異常會(huì)引起溶酶體貯積癥(1ysosomalstoragedisorders;LSDs),例如家族性白癡病(Tay-sachsdisease)和龐貝氏癥(Pompe’sdisease)。溶酶體熒光探針LysoTrackerRED,是一種向酸性(acidotropic)探針,含有熒光基團(tuán)在弱堿上,高度選擇性地染色酸性細(xì)胞器溶酶體。探針自由通過細(xì)胞膜,選擇性地聚集在溶酶體內(nèi)。它可以對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行直接染色,在590nm波長(zhǎng)可以清晰看到被染成紅色的溶酶體。[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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活體細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒
- 活體細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-28 00:27
報(bào)價(jià)單
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細(xì)胞酪氨酸酶(tyrosinase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
- 主要用途細(xì)胞酪氨酸酶(tyrosinase)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過酪氨酸酶反應(yīng)系統(tǒng)中底物酪氨酸氧化后,產(chǎn)生多巴色素,呈現(xiàn)吸光峰值的變化,即采用比色法來測(cè)定細(xì)胞裂解懸液樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種人體和動(dòng)物細(xì)胞,尤其是黑色素細(xì)胞和黑色素瘤細(xì)胞裂解懸液樣品中酪氨酸酶的活性檢測(cè),以及YZ劑篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景酪氨酸酶(tyrosinase;EC1.14.18.1)是一種單酚單加氧酶(monophenolmonooxygenase),又稱為單酚酶(monophenolase)或單酚二羥基苯丙氨酸:O2氧化還原酶(monophenoldihydroxyphenylalanin:O2oxidoreductase),具有雙功能的含銅糖蛋白,廣泛存在于植物、酵母和動(dòng)物組織中,其蛋白結(jié)構(gòu)、大小、糖基化方式、激活特征等都不同。人體酪氨酸酶是一個(gè)跨膜蛋白,而催化結(jié)構(gòu)域在黑色素細(xì)胞(melanocyte)或色素細(xì)胞的黑色素器(melanosome)里。酪氨酸酶通過催化L-酪氨酸(L-tyrosine)等的o-羥基化(o-hydroxylation)反應(yīng)變成L-多巴(L-dopamine),進(jìn)而氧化產(chǎn)生黑色素底物多巴醌(dopaquinone),從而由多巴色素(dopachrome)轉(zhuǎn)化為黑色素(melanin)中的真黑素(eumelanin),以及其它色素,包括毛發(fā)和眼睛色素。紫外線可以激活酪氨酸酶活性,嚴(yán)重時(shí),會(huì)引起色素沉著(hyperpigmentation)。酪氨酸酶基因突變將導(dǎo)致I型眼皮膚白化?。╫culocutaneousalbinism)。酪氨酸酶YZ劑成為增白化妝品的重要元素?;诘孜锢野彼?,在酪氨酸酶的催化下,產(chǎn)生多巴色素,通過其吸光值的變化(475nm波長(zhǎng)),來定量測(cè)定酪氨酸酶的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1 (SIRT1)活性比色法定量檢測(cè)
- 主要用途細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過比色探針對(duì)硝基苯胺標(biāo)記人工合成的乙?;痯53多肽底物,經(jīng)過SIRT1脫乙?;?,被位點(diǎn)特異性氨基肽酶水解,釋放黃色對(duì)硝基苯胺,即采用比色法來測(cè)定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、核蛋白樣品、部分或完全純化酶樣品中SIRT1的活性定量檢測(cè),以及YZ劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景人體組蛋白脫乙酰基酶(histonedeacetylase;HDAC)家屬分成三類共20多個(gè)蛋白:種類I(classI)與酵母Rpd3蛋白同源,包括HDAC1、2、3、8,存在于細(xì)胞核中;種類II(classII)與酵母Hda1蛋白同源,包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR,存在于細(xì)胞核和細(xì)胞漿里;上述兩大種類的蛋白分子催化結(jié)構(gòu)域含有鋅,且曲古菌素A(trichostatinA;TSA)敏感。種類III(classIII)為NAD+輔助因子必需,又稱為sirtuins,與酵母Sir2(SilentInformationRegulator2)同源,包括SIRT1至7等,為曲古菌素A(trichostatinA;TSA)不敏感型賴氨酸脫乙?;福╨ysyl-deacetylase)。催化賴氨酸脫乙酰基反應(yīng),以及由NAD+和乙酰(acetyl)基團(tuán)轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的煙酰胺(nicotinamide)和O-乙酰ADP核糖(O-acetyl-ADP-ribose)。SIRT1位于細(xì)胞核內(nèi),與酵母Sir2同源性Z高。其功能在于調(diào)節(jié)p53活性和YZ細(xì)胞凋亡?;谌斯ず铣傻囊阴;痯53(379至382氨基酸位點(diǎn))多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys(Ac)具有抗氨基肽酶切離的功能,首先使用比色染料對(duì)硝基苯胺(p-Nitroaniline;p-NA)來標(biāo)記乙?;痯53多肽底物,其次進(jìn)行脫乙?;琙后底物進(jìn)一步在氨基肽酶的催化酶解,釋放出具有強(qiáng)烈吸光值的黃色對(duì)硝基苯胺(波長(zhǎng)405nm),由此來定量測(cè)定沉默調(diào)節(jié)蛋白1的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞 3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性終點(diǎn)比色法定量
- 細(xì)胞3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途細(xì)胞3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性終點(diǎn)比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過3-磷酸甘油磷酸激酶和3-磷酸甘油醛脫氫酶酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷(NADH)氧化后峰值的降低,即采用比色法來測(cè)定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞(動(dòng)物、人體、昆蟲等)裂解懸液樣品3-磷酸甘油醛脫氫酶的總活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人細(xì)胞周期素B(Cyclin B)ELISA試劑盒說明書
- 人細(xì)胞周期素B(CyclinB)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人CyclinB單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CyclinB與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人CyclinB,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液,在450nm處測(cè)OD值,CyclinB濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CyclinB濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):160ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入2ml蒸餾水混勻,配成80ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液975ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入80ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液25ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測(cè)程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CyclinB含量。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CyclinB檢測(cè)濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人CyclinB。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10.2%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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