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羊外周血淋巴細胞分離液說明書

本文由 研域(上海)化學試劑有限公司 整理匯編

2018-09-14 10:00 402閱讀次數(shù)

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為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:名稱產(chǎn)品編號規(guī)格A羊外周血淋巴細胞分離液200mlB樣本稀釋液(贈品)2010C1119200mlC清洗液(贈品)2010X1118200mlD說明書羊外周血淋巴細胞分離液說明書【實驗前準備】A.適用儀器Zda離心力可達1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機B.耗材產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號產(chǎn)地15ml離心管散裝339650美國NUNC15ml離心管架裝339651美國NUNC50ml離心管散裝339652美國NUNC50ml離心管架裝339653美國NUNC無菌膠頭滴管或塑料滴管羊外周血淋巴細胞分離液說明書【檢驗方法】全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在20±2℃的條件下進行。首先取抗凝血按體積比1:1的比例與樣本稀釋液(產(chǎn)品編號:2010C1119)混勻,根據(jù)稀釋后的樣本量大小,分以下兩種情況:情況A:稀釋后的血液樣本量小于5ml時,實驗方法如下:1.取一支15ml離心管,先加入與稀釋后樣本等量的分離液(注:分離液Z少不得少于3ml)。2.用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上,400-500g,離心20-30min(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液樣本量越多,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到Z理想分離效果)。3.離心后,此時離心管中由上至下分為四層。**層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色淋巴細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。4.用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細胞層到另一15ml離心管中,往所得離心管中加入10ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細胞。5.250g,離心10min。6.棄上清。7.用吸管以5ml清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細胞。8.250g,離心10min。9.重復6、7、8,棄上清后以0.5ml后續(xù)實驗所需相應液體重懸細胞。情況B:稀釋后的血液樣本量大于等于5ml時,實驗方法如下:1.取一支適當?shù)碾x心管,先加入與稀釋后樣本等量的分離液。2.將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上,550-650g(Zda離心力可至1000g),離心20-30min。(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到Z理想分離效果。加入血液樣本后,樣本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二)。3.剩余步驟同“情況A”中步驟3至步驟9?!咀⒁馐马棥?.全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在20±2℃的條件下進行。為獲得Z理想的實驗結(jié)果,**在取血2h內(nèi)進行實驗,血液存放時間越長,細胞分離效果越差。血液放置超過6h后分離效果更差甚至不能達到分離目的。2.本實驗**不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面,影響細胞分離效果。3.吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加。4.吸取過多的淋巴細胞層上層溶液會導致血漿蛋白及血小板混雜。5.如所實驗后細胞得率或活性過低,請聯(lián)系上海研謹生物以尋求技術(shù)支持幫助。羊外周血淋巴細胞分離液說明書【儲存條件及有效期】18-25℃保存,有效期2年。本品易感染細菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟封后置常溫保存。如4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果?!緟⒖贾担▍⒖挤秶勘緦嶒灹馨图毎崛÷始凹兌染笥?0%。

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