1 樣品準(zhǔn)備/提取

1）、稱取已粉碎（已均質(zhì)）的樣品1 g于15 mL離心管中，加入1 mL 0.05 mol/L苯磺酸溶液、1 mL0.25 g/mL鹽酸羥銨溶液、0.4 mL0.1 mol/L乙酸銨溶液(pH4.5)和8 mL乙腈，渦旋混合2 min，4000 rpm離心1 min；

2）、將上清液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中，殘?jiān)凑詹襟E1重復(fù)提取一次；

3）、合并兩次提取液，并加入6 mL和7 mL水，渦旋混合1 min，4000 rpm離心1 min；

4）、取下層清液于旋蒸瓶中，向上層清液加入6 mL，重復(fù)提取一次；

5）、合并兩次下層溶液，40℃減壓蒸至近干，加入5 mL乙腈待凈化。

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2 SPE柱凈化——ProElut Al-N（1 g/6 mL）（Cat.#：65306）上層 ProElut SCX（500 mg/3 mL）（Cat.#：63604）下層

(1)活 化：加入10 mL乙腈，流出液棄去；

(2)上 樣：將待凈化液加入小柱，流出液棄去；

(3)淋 洗：加入5 mL乙腈淋洗小柱，流出液棄去，并去掉上層Al-N小柱；

(4)洗 脫：加入5 mL5%氨水乙腈，收集洗脫液；

(5)重新溶解：將洗脫液在40 ℃下減壓蒸干，1 mL定容液*溶解殘?jiān)?，過微孔濾膜供HPLC分析。

*定容液：乙酸銨緩沖液：鹽酸羥銨溶液=2：1 乙酸銨緩沖液：乙腈：0.05 mol/L乙酸銨溶液(pH4.5)=75:25； 鹽酸羥銨溶液：取1 mL0.25 g/mL鹽酸羥銨溶液用水定容至100mL

分析條件 色譜柱：Platisil ODS，250 x 4.6 mm，5μm（Cat.# 99503）

流 速：1.0 mL/min

檢測(cè)器：UV 591 nm和UV 266 nm

柱 溫：30 ℃

進(jìn)樣量：20 μL

流動(dòng)相：A：乙腈 B：0.05 mol/L乙酸銨溶液(pH4.5)

本方法適用于水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫及其代謝物的檢測(cè)。

孔雀石綠，結(jié)晶紫