動(dòng)物性食品中

β-受體激動(dòng)劑殘留量的檢測(cè)

　　β-受體激動(dòng)劑能促進(jìn)脂肪分解，抑 制脂肪沉淀，顯著提高酮體的瘦肉率，因此曾被用作畜禽的促生產(chǎn)劑。但這類藥物易在動(dòng)物體組織內(nèi)殘留，通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，引起食物中毒。我國(guó)自2002年起，已經(jīng)將鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺等列為禁用藥品，并列入年度例行監(jiān)測(cè)計(jì)劃。

　　GB 31658.22-2022于2023年2月1日開始實(shí)施，同時(shí)，2023年食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則中畜禽肉及副產(chǎn)品項(xiàng)下以將此標(biāo)準(zhǔn)作為檢驗(yàn)依據(jù)及指定檢測(cè)方法。目前，部分客戶反饋方法的前處理過(guò)程需要經(jīng)過(guò)溶劑萃取、固相萃取兩個(gè)凈化步驟，略顯繁瑣。

　　迪馬科技秉承以客戶需求為中心的服務(wù)理念，在標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，開發(fā)出兩套解決方案，致力于簡(jiǎn)化前處理流程。兩套方案均可減少樣品檢測(cè)時(shí)間，提高客戶工作效率，可供廣大客戶參考。

優(yōu)化方案一：保留溶劑萃取步驟，將固相萃取凈化改為更加快速的QuEChERS凈化；

優(yōu)化方案二：去除溶劑萃取步驟，優(yōu)化固相萃取淋洗過(guò)程。

優(yōu)化方案一1、適用范圍

　　本方案適用于豬肉、豬肝中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、西馬特羅、齊帕特羅、氯丙那林、特布他林、西布特羅、馬布特羅、溴布特羅、班布特羅、克侖丙羅、妥布特羅、利托君、克侖賽羅、馬噴特羅、克侖潘特、羥甲基克侖特羅共18種β-受體激動(dòng)劑單個(gè)或混合物殘留量的檢測(cè)。

2、標(biāo)準(zhǔn)品配制

(1) 混標(biāo)儲(chǔ)備液：精密稱取適量克倫特羅等標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為100μg/mL混標(biāo)儲(chǔ)備液(Cat.#: 47936)。

(2) 混標(biāo)中間液Ⅰ：準(zhǔn)確吸取適量混標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋并定容，配制成濃度為0.1μg/mL混標(biāo)中間液。

(3) 混標(biāo)中間液Ⅱ：準(zhǔn)確吸取適量混標(biāo)中間液Ⅰ，用甲醇稀釋并定容，配制成濃度為0.01μg/mL混標(biāo)中間液。

(4) 內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液：精密稱取適量克倫特羅-D9、萊克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3、西馬特羅-D7、齊帕特羅-D7、氯丙那林-D7、特布他林-D9、西布特羅-D9、鹽酸馬布特羅-D9、鹽酸班布特羅-D9、克侖丙羅-D7、鹽酸妥布特羅-D9、羥甲基克侖特羅-D6，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為10μg/mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。

(5) 內(nèi)標(biāo)工作液：準(zhǔn)確吸取適量?jī)?nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋并定容，配制成濃度為0.1μg/mL內(nèi)標(biāo)工作液。

3、提取

(1) 稱取樣品2.0g于50mL塑料離心管中，加6mL　0.2mol/L乙酸銨緩沖液、40μL β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，渦旋混勻，37℃避光水浴16h，放置室溫，備用。

(2) 取備用液，加100μL內(nèi)標(biāo)工作液，渦旋混勻，8000rmp離心8min，取出上清。

(3) 向下層殘?jiān)尤?mL 0.1mol/L高氯酸溶液，渦旋5min, 8000rmp離心8min，取上清,與步驟(2)上清混勻，用高氯酸調(diào)pH值至1.0±0.2，8000rmp離心8min，取出上清。

(4) 將上清液用10mol/L NaOH溶液調(diào)pH值至10.0±0.5。

(5) 加乙酸乙酯15mL，渦旋5min, 5000rmp離心5min，取上層有機(jī)相。

(6) 下層水相中再加入10mL叔丁基甲醚，渦旋5min, 5000rmp離心5min，取上層有機(jī)相。

(7) 合并兩次有機(jī)相，混勻，50℃水浴氮吹至干，用5mL 2%甲酸溶液超聲1min，渦旋1min溶解殘?jiān)?，備用?/p>

注：0.2mol/L乙酸銨緩沖液：取乙酸銨15.4g，,溶解于1000mL水中，用乙酸調(diào)pH值至5.2；

0.1mol/L高氯酸溶液：取高氯酸8.7mL，用水稀釋至1000mL。

4、凈化

ProElut QUE PLS-A  (Cat.#: 64704)

　　將備用液全部轉(zhuǎn)移到ProElut QuEChERS凈化管中，渦旋2min, 8000rmp離心2min，上清液過(guò)尼龍膜(Cat.#: 37177)，上機(jī)分析。

５、分析條件

UPLC條件

色譜柱：Inspire PFP，100x2.1mm，3μm (Cat.#: 81612)

流速：0.3mL/min

進(jìn)樣量：5μL

柱溫：35℃

流動(dòng)相：A: 0.1% 甲酸水溶液　B: 0.1% 甲酸乙腈

質(zhì)譜條件

電離模式：ESI

掃描方式：正離子掃描

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)

電噴霧電壓：5500V

霧化氣壓力：50psi

輔助氣壓力：50psi

氣簾氣壓力：20psi

離子源溫度：500℃

６、添加回收結(jié)果

優(yōu)化方案二1、適用范圍

　　本方案適用于豬肉、豬肝中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、西馬特羅、齊帕特羅、氯丙那林、特布他林、西布特羅、馬布特羅、溴布特羅、班布特羅、克侖丙羅、妥布特羅、利托君、克侖賽羅、馬噴特羅、克侖潘特、羥甲基克侖特羅共18種β-受體激動(dòng)劑單個(gè)或混合物殘留量的檢測(cè)。

2、標(biāo)準(zhǔn)品配制

(1)混標(biāo)儲(chǔ)備液：精密稱取適量克倫特羅等標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為100μg/mL混標(biāo)儲(chǔ)備液(Cat.#: 47936)。

(2) 混標(biāo)中間液Ⅰ：準(zhǔn)確吸取適量混標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋并定容，配制成濃度為0.1μg/mL混標(biāo)中間液。

(3) 混標(biāo)中間液Ⅱ：準(zhǔn)確吸取適量混標(biāo)中間液Ⅰ，用甲醇稀釋并定容，配制成濃度為0.01μg/mL混標(biāo)中間液。

(4) 內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液：精密稱取適量克倫特羅-D9、萊克多巴胺-D6、沙丁胺醇-D3、西馬特羅-D7、齊帕特羅-D7、氯丙那林-D7、特布他林-D9、西布特羅-D9、鹽酸馬布特羅-D9、鹽酸班布特羅-D9、克侖丙羅-D7、鹽酸妥布特羅-D9、羥甲基克侖特羅-D6，用甲醇溶解并定容，配制成濃度為10μg/mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。

(5) 內(nèi)標(biāo)工作液：準(zhǔn)確吸取適量?jī)?nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋并定容，配制成濃度為0.1μg/mL內(nèi)標(biāo)工作液。

3、提取

(1) 稱取樣品2.0g于50mL塑料離心管中，加6mL　0.2mol/L乙酸銨緩沖液、40μLβ-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶，渦旋混勻，37℃避光水浴16h，放置室溫，備用。

(2) 取備用液，加100μL內(nèi)標(biāo)工作液，渦旋混勻，8000rmp離心8min，取出上清。

(3) 向下層殘?jiān)尤?mL　0.2mol/L乙酸銨緩沖液，渦旋5min, 8000rmp離心8min，取出上清,并與步驟(2)的上清合并。

(4) 向上清液中加入10mL正己烷，渦旋5min, 8000rmp離心2min，棄去上層，下層水相備用。

注：0.2mol/L乙酸銨緩沖液：取乙酸銨15.4g，溶解于1000mL水中，用乙酸調(diào)pH值至5.2。

4、凈化

ProElut PXC 200mg/6mL (Cat.#: 68212)

(1)活化：用5mL甲醇和5mL水活化小柱。

(2)上樣：將備用液全部上柱，棄去流出液。

(3)淋洗：用5mL水、5mL 2.5%甲酸水溶液、3mL 0.1%氨水甲醇淋洗小柱，棄去流出液，推干。

(3)洗脫：用6mL 2.5%氨水甲醇洗脫小柱，推干，接收流出液，混勻。

(4)重新溶解：將流出液在50℃水浴氮吹至近干，先用0.1mL甲醇溶解殘留物，再加入0.9mL甲醇-0.1%甲酸水(1:9)，混勻，過(guò)尼龍膜(Cat.#: 37177)，上機(jī)分析。

５、分析條件

UPLC條件

色譜柱：Inspire PFP，100x2.1mm，3μm (Cat.#: 81612)

流速：0.3mL/min

進(jìn)樣量：5μL

柱溫：35℃

流動(dòng)相：A: 0.1% 甲酸水溶液　B: 0.1% 甲酸乙腈

質(zhì)譜條件

電離模式：ESI

掃描方式：正離子掃描

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)

電噴霧電壓：5500V

霧化氣壓力：50psi

輔助氣壓力：50psi

氣簾氣壓力：20psi

離子源溫度：500℃

６、添加回收結(jié)果

相關(guān)產(chǎn)品信息