GX液相色譜儀測定食品中著色劑的操作步驟

1　 儀器與試劑
1.1 儀器
　　梯度GX液相色譜儀，配紫外
　　色譜柱　C18  250mm×4.6mm×5μm
　　超聲波水浴
　　分析天平（感量0.001g）
　　0.45μm水性濾膜
1.2 試劑
　　甲醇，色譜純。
　　正己烷。
　　聚酰胺粉（尼龍6）：過200目篩
　　磷酸，色譜純。
　　檸檬酸溶液：稱取20克檸檬酸，加水至100mL，溶解混勻。
　　乙酸銨溶液（0.02mol/L）稱取1.54克乙酸銨，加水至1000mL，溶解，經(jīng)經(jīng)0.45μm水性濾膜過濾。
　　無水乙醇-氨水-水（7+2+1）：量取無水乙醇70mL、氨水20mL、水10mL混勻。
合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取按其純度折算為1**%質(zhì)量的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、新紅、赤蘚紅、亮藍(lán)、靛藍(lán)各0.100克，置于100mL容量瓶中，加pH=6水到刻度，配成水溶液。
2 　測定原理
食品中人工合成著色劑用聚酰胺吸附法或液液分配法提取，制成水溶液，注入GX液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離。
3 　試樣溶液的制備
稱取試樣5.000g-10.000g(極ng確至0.0001g)，置于100ml燒杯中，加100ml水，用檸檬酸溶液調(diào)pH到6，加熱至60度，將1克聚酰胺粉加少許水調(diào)成糊狀，倒入試樣溶液中，攪拌片刻，以G3垂融漏斗抽濾，用pH=4的水洗滌3-5次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗滌3-5次，再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水混合溶液解吸3-5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容至5mL。經(jīng)0.45μm水性濾膜過濾，進GX液相色譜儀測定。
4 　色譜條件
色譜柱：C18　250mm×4.6mm×5μm；
　　流動相：以20mmol乙酸銨為流動相A，以甲醇為流動相B，按下表規(guī)定經(jīng)行梯度洗脫；

　　流速：1.0mL/min；
　　溫度：室溫；
　　進樣量：20μL；
　　檢測波長：254nm。