飼料中泛酸的測定

1  儀器及試劑

1.1儀 器

1). 分析天平一臺（精度0.1mg）；

2). 超聲波水浴一臺；

3). 容量瓶；

4). 微量進(jìn)樣器（5ul或10μl）一支；

5). 微量可調(diào)移液槍（1000ul）一支、吸頭多個；

6). 旋渦混勻器一臺；

7). 離心機一臺；

8). pH計一臺

9). LC-10TvpGX液相色譜儀；

1.2試 劑

1). 0.1%的磷酸溶液；

2). 1%的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)溶液

3). 磷酸緩沖液

4). 1mol/L的鹽酸溶液

5). 1mol/L的氫氧化鈉溶液

6). 泛酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品：含量≥99%

7). 泛酸鈣標(biāo)準(zhǔn)貯備液

8). 泛酸鈣標(biāo)準(zhǔn)工作液

1.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

泛酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取已知濃度的泛酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品0.02g，置于100ml棕色容量瓶中，用0.1%的磷酸溶解，定容至刻度，搖勻。

泛酸標(biāo)準(zhǔn)工作液液：準(zhǔn)確吸取泛酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液用水按1:10的比例稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。該溶液濃度為20μg/ml。

磷酸緩沖液：稱取3.12 g 二水磷酸二氫鈉溶于1L水中，用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH為5.5，通過0.45濾膜過濾脫氣使用。

2  樣品制備

2.1復(fù)合預(yù)混合飼料：稱取試樣1-2g 或維生素預(yù)混合飼料0.25 -0.5g，極ng確至0.0001g，置于100 mL棕色容量瓶中。加60 mL水浸濕，搖勻，加10mL l%的二乙胺四乙酸二鈉溶液混勻，置于超聲波水浴上振蕩提取15min。用水定容至刻度混合均勻，過濾或離心。再經(jīng)0.45μm濾膜過濾，調(diào)整溶液的濃度大于1μg/mL，進(jìn)樣測定。

2.2濃縮飼料：稱取試樣2-5g ，極ng確至0.00 01g，置于100ml色容量瓶中。加60ml浸濕，搖勻，加10ml l%二乙胺四乙酸二鈉溶液棍勻，置于超聲波水浴上振蕩提取15 min。提取液若出現(xiàn)混濁，需用幾滴氫氧化鈉溶液和鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.5左右，至溶液澄清(用試紙顯示)沉淀蛋白質(zhì)，用水定容至刻度，過濾或離心。再經(jīng)0.45μm濾膜過濾，進(jìn)樣測定。

3  色譜條件

色譜柱：Vertex C18色譜柱　150mm×4.6mm×5μm；

流動相：磷酸緩沖溶液；

流速：1.0ml/min；

溫度：室溫；

進(jìn)樣量：20μL；

檢測波長：200nm。

4  色譜圖