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動物組織氧化應(yīng)激活性氧魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

本文由 上海銘博生物科技有限公司 整理匯編

2018-11-08 10:00 532閱讀次數(shù)

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動物組織氧化應(yīng)激活性氧魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途動物組織氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑是一種旨在通過自由基探針魯米諾和強化劑的參與下,植物樣品中的活性氧族使發(fā)光物氧化降解并發(fā)光,在化學(xué)發(fā)光儀(Luminometer)的幫助下定量檢測樣品中活性氧族(過氧化氫)的生成和數(shù)量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適用于各種動物和人體組織的活性氧族的檢測??梢员挥糜诩毎蛲觥⑺ダ?、代謝和營養(yǎng)學(xué),以及發(fā)育生物學(xué)(男性不育)等的研究。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡易,性能穩(wěn)定,檢測敏感。技術(shù)背景超氧自由基陰離子(superoxideradical;O2-)、過氧化氫(hydrogenperoxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxylradical;OH-)、過氧化基(peroxylradical;ROO-)、氫過氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxylradical)、氮氧基(nitricOxide;NO-)、過氧亞硝基陰離子(peroxynitriteanion;ONOO-)次氯酸(hypochlorousacid;HOCl)、半醌自由基(semiquinoneradical)、單線態(tài)氧氣(singletoxygen)等細胞內(nèi)活性氧族(ReactiveOxygenSpecies;ROS)的產(chǎn)生和增多,甚而導(dǎo)致諸如男性不育、冠心病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腫瘤、退行性病變等各種病理狀況。魯米諾(luminol),又稱氨基鄰苯二甲酰肼(luminol;3-aminophthalichydrazide5-amino-2,3-dihvdro-1,4-phthalazinedione),是一種脂溶性的發(fā)光劑,氧化后生成魯米諾自由基而化學(xué)發(fā)光,具有460nm左右峰值的帶狀光譜,肉眼可觀察到鮮明的紫藍色。魯米諾以單價氧化形式與超氧自由基陰離子反應(yīng),產(chǎn)生不穩(wěn)定性內(nèi)過氧化物或二氧環(huán)丁烷(Dioxetane),由此分解成電激發(fā)狀態(tài),通過釋放光子,回復(fù)到基態(tài)。魯米諾作為探針,可以檢測植物中過氧化氫、超氧自由基陰離子和羥自由基,其中過氧化氫Z強,其發(fā)光強度與過氧化氫水平成正相關(guān)。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升強化液(ReagentB)毫升發(fā)光液(ReagentC)毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存強化液(ReagentB)和發(fā)光液(ReagentC)在-20℃冰箱里,嚴格避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器微型臺式離心機:用于去除樣品雜質(zhì)DOUNCE勻漿器:用于裂解組織樣品超聲儀:用于裂解組織樣品測試管:用于發(fā)光檢測用的專用試管化學(xué)發(fā)光儀:用于檢測化學(xué)發(fā)光實驗步驟樣品預(yù)處理手術(shù)取出動物組織,并秤重以確定組織重量(選擇步驟)放進預(yù)冷的15毫升錐形離心管(200毫克組織)(選擇步驟)加入xx毫升清理液(ReagentA)(選擇步驟)小心抽去清理液(ReagentA)放進一個15毫升錐形離心管加入置于冰槽里的xx毫升清理液(ReagentA)即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器在冰槽里用研磨棒勻化組織(約80下)將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管QL渦旋震蕩5秒,充分混勻(選擇步驟)在冰槽里,置于200瓦超聲儀下,功率50%,猝擊5秒轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的1.5毫升離心管放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘,速度為3000g(或6000RPM,例如eppendorf5415)小心移取1毫升上清液到新的預(yù)冷的1.5毫升離心管(選擇步驟)移取5微升進行蛋白定量測定,并調(diào)整蛋白濃度為20毫克/毫升(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-GMS30030.1)置于冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作(1小時內(nèi))

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