本文由 北京博蕾德科技發(fā)展有限公司 整理匯編

2018-10-20 10:00 1282閱讀次數(shù)

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• 免疫組化技術(shù)總結(jié)

  資料轉(zhuǎn)自丁香園：文檔為免疫組化全園資料整理、經(jīng)驗和教訓(xùn)總結(jié)、親身案例講述、難題集錦等等，多是原創(chuàng)經(jīng)驗和心得體會，難得的免疫組化技術(shù)文檔。[詳細(xì)]

  2018-10-20 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 氣相色譜分離技術(shù)總結(jié)

  氣相色譜分離技術(shù)總結(jié)[詳細(xì)]

  2009-06-19 00:00

  操作手冊

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• 免疫組化問題解答

  免疫組化問題解答[詳細(xì)]

  2013-12-21 00:00

  安裝說明

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• 免疫組化基礎(chǔ)知識

  免疫組織化學(xué)的概念：免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)。免疫組化實(shí)驗所用的抗體有哪些？免疫組化實(shí)驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。免疫組化實(shí)驗所用的組織和細(xì)胞標(biāo)本有哪些？實(shí)驗所用主要為組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本兩大類，前者包括石蠟切片（病理大片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細(xì)胞爬片和細(xì)胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標(biāo)本Z常用、Z基本的方法，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進(jìn)行抗原修復(fù)，是免疫組化中的組織標(biāo)本制作方法。石蠟切片為什么要做抗原修復(fù)？有哪些方法？石蠟切片標(biāo)本均用甲醛固定，使得細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵、羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇，同時蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進(jìn)行IHC染色時，需要先進(jìn)行抗原修復(fù)或暴露，即將固定時分子之間所形成的交聯(lián)破壞，而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。常用的抗原修法有微波修復(fù)法，高壓加熱法，酶消化法，水煮加熱法等，常用的修復(fù)液是pH6.0的0.01mol/L的檸檬酸鹽緩沖液。免疫組化常用的染色方法有哪些？根據(jù)標(biāo)記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標(biāo)法，親和組織化學(xué)法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗體）在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位，其中生物素抗生物素染色法Z常用?？贵w交叉反應(yīng)的原因：指抗體除與其相應(yīng)的抗原發(fā)生特異性反應(yīng)外還與其它抗原發(fā)生反應(yīng)。產(chǎn)生的原因有以下幾個方面：1.抗原特異性指用于免疫動物的抗原性物質(zhì)中含有多種抗原分子，它引起動物產(chǎn)生針對多種抗原分子特異性的相應(yīng)抗體。任何其它物質(zhì)只要含有一種或多種與上述物質(zhì)相同的抗原分子，必將與上述多特異性的抗血清發(fā)生交叉反應(yīng)。2.共同決定簇即兩種抗原分子中都含有相同的抗原決定簇。3.決定簇相似，兩種不同的抗原決定簇，如果結(jié)構(gòu)大致相同，由于空間構(gòu)象關(guān)系，某一決定簇的相應(yīng)抗體可以與大致相同的決定簇發(fā)生交叉反應(yīng)。當(dāng)然抗原一抗體之間構(gòu)象相似時的結(jié)合力小于吻合時的結(jié)合力。多抗和單抗特性比較：1.均一性。一種單抗中，每個抗體的化學(xué)結(jié)構(gòu)和氨基酸順序都相同，只有一種Ig亞類。即單抗是一種純度很高的均一抗體。而從不同動物，不同時期所得到的多抗，各有不同的化學(xué)組成。多抗是多種種類和亞類Ig的混合物。2.穩(wěn)定性。單抗的穩(wěn)定較差，對PH變化敏感，對熱不穩(wěn)定，提純過程中易變性，而多抗的穩(wěn)定性則較好。3.特異性。單抗是單一地針對抗原的某一決定簇，所以用它進(jìn)行血清學(xué)反應(yīng)時，特異性強(qiáng)，敏感性高，一般不發(fā)生交叉反應(yīng)。而多抗能與抗原上的多種抗原決定簇結(jié)合，所以特異性較差，較易引起交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性。單抗的重復(fù)性好，而多抗每批都不一樣。5.沉淀反應(yīng)。多抗由于與抗原多價結(jié)合容易形成網(wǎng)絡(luò)樣沉淀，而單抗只與抗原結(jié)合產(chǎn)生二聚體，不能直接形成抗原抗體沉淀物?？贵w的保存：抗體儲存容器應(yīng)由不吸附蛋白質(zhì)的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如儲存的抗體中蛋白濃度很低（10-100mg/L），就應(yīng)另加隔離蛋白以減少容器對抗體蛋白的吸附，隔離蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。絕大多數(shù)已稀釋的抗體應(yīng)存在4℃-8℃條件下，以免凍融對抗體蛋白產(chǎn)生有害效應(yīng)。抗體原液和已分離的免疫球蛋白組分應(yīng)保存于-20℃條件下，并避免反復(fù)凍融。冷凍的抗體溶液應(yīng)置于室溫中緩慢地解凍，應(yīng)避免用高溫快速解凍。被細(xì)菌污染的抗體常會出現(xiàn)假陽性結(jié)果，應(yīng)將污染的抗體溶液及其他試劑棄之。為防止細(xì)菌污染，可于抗體溶液中加入0.01%疊氮鈉?？贵w經(jīng)真空冷凍干燥后置-20℃以下可保存3-5年。保存稀釋后的單抗應(yīng)加入0.1%疊氮鈉濃度。大多數(shù)稀釋抗體可進(jìn)行冷凍保存，少數(shù)抗體可能會丟失抗原活性。大多數(shù)單抗，只要蛋白濃度適當(dāng)，可在4℃下保存數(shù)月。[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• CD90免疫組化試劑盒

  CD90免疫組化試劑盒該試劑盒以HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性CD90抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的CD90一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復(fù)合物，顯微鏡下觀察成像。試劑盒所含試劑：試劑A通透液：0.1%Triton-X10010mL（選用）試劑B封閉緩沖液（封閉用）20mL試劑C（原裝進(jìn)口分裝）已稀釋的即用型CD90一抗（2.5ml）試劑D（原裝進(jìn)口分裝）生物素化羊抗兔IgG1支（濃度1.5mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復(fù)合物1支（濃度1μM，稀釋比1:50~1:200）100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%體積比）2．抗原修復(fù)液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復(fù)液）10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修復(fù)液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水700mL，用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實(shí)驗步驟（建議方案）：石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片：將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr；2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修復(fù)：根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫度達(dá)到98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗滌（2×2min）（具體修法見附1）*注：有些抗原勿需修復(fù)，直接進(jìn)入第5步封閉。5.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育30min；6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2hr或4℃；7.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；8.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30min；10.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；11.封閉：滴加試劑Tween20，37℃濕盒孵育封閉20min；12.加HRP-SA：滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20nM），37℃濕盒中孵育30min；13.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min），TBS洗滌（2×5min）；14.顯色：應(yīng)用DAB溶液（試劑F）顯色；15.復(fù)染：自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；16.封片：待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。注意事項：1.修復(fù)后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導(dǎo)致結(jié)晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使用。3.若試劑為微量濃縮液，用前應(yīng)低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween20，否則會影響結(jié)果觀察。5.如須復(fù)染細(xì)胞核，則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封片。附1：抗原修法常用抗原修復(fù)液：檸檬酸緩沖液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修復(fù)液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修復(fù)法切片脫蠟水化處理，TBS沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復(fù)法微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或繼續(xù)微波10~15min，取出微波盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復(fù)法取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復(fù)液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。四、隔水式高壓抗原修復(fù)法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復(fù)液于微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時4~8min即可關(guān)閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。[詳細(xì)]

  2018-10-31 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 免疫組化試劑盒說明書

  免疫組化試劑盒以HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測血液,細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性Dazl抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的Dazl一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復(fù)合物，顯微鏡下觀察成像。用戶自備試劑：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%體積比）2．抗原修復(fù)液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復(fù)液）10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修復(fù)液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g加蒸餾水700mL，用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實(shí)驗步驟（建議方案）：石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片：將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr；2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修復(fù)：根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫度達(dá)到98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗滌（2×2min）（具體修法見附1）*注：有些抗原勿需修復(fù)，直接進(jìn)入第5步封閉。5.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育30min；6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2hr或4℃過一夜；7.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；8.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30min；10.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；11.封閉：滴加試劑Tween20，37℃濕盒孵育封閉20min；12.加HRP-SA：滴加用試劑C稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20nM），37℃濕盒中孵育30min；13.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min），TBS洗滌（2×5min）；14.顯色：應(yīng)用DAB溶液（試劑F）顯色；15.復(fù)染：自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；16.封片：待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。注意事項：1.修復(fù)后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導(dǎo)致結(jié)晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使用。3.若試劑為微量濃縮液，用前應(yīng)低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween20，否則會影響結(jié)果觀察。5.如須復(fù)染細(xì)胞核，則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封片。附1：抗原修法常用抗原修復(fù)液：檸檬酸緩沖液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修復(fù)液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修復(fù)法切片脫蠟水化處理，TBS沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復(fù)法微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或繼續(xù)微波10~15min，取出微波盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復(fù)法取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復(fù)液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。四、隔水式高壓抗原修復(fù)法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復(fù)液于微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時4~8min即可關(guān)閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。[詳細(xì)]

  2018-11-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 免疫組化染色試劑盒說明書

  免疫組化染色試劑盒說明書[詳細(xì)]

  2014-06-23 00:00

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• 小鼠 Thy1 免疫組化試劑盒

  小鼠ELISA試劑盒該試劑盒以HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性Thy1抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的Thy1一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復(fù)合物，顯微鏡下觀察成像。試劑盒所含試劑：試劑A通透液：0.1%Triton-X10010mL（選用）試劑B封閉緩沖液（封閉用）20mL試劑C（原裝進(jìn)口分裝）已稀釋的即用型Thy1一抗（2.5ml）試劑D（原裝進(jìn)口分裝）生物素化羊抗兔IgG1支（濃度1.5mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復(fù)合物1支（濃度1μM，稀釋比1:50~1:200）100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%體積比）2．抗原修復(fù)液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復(fù)液）10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修復(fù)液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水700mL，用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實(shí)驗步驟（建議方案）：石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片：將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr；2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修復(fù)：根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫度達(dá)到98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗滌（2×2min）（具體修法見附1）*注：有些抗原勿需修復(fù)，直接進(jìn)入第5步封閉。5.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育30min；6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2hr或4℃7.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；8.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30min；10.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；11.封閉：滴加試劑Tween20，37℃濕盒孵育封閉20min；12.加HRP-SA：滴加用試劑C稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20nM），37℃濕盒中孵育30min；13.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min），TBS洗滌（2×5min）；14.顯色：應(yīng)用DAB溶液（試劑F）顯色；15.復(fù)染：自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；16.封片：待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。小鼠ELISA試劑盒注意事項：1.修復(fù)后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導(dǎo)致結(jié)晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使用。3.若試劑為微量濃縮液，用前應(yīng)低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween20，否則會影響結(jié)果觀察。5.如須復(fù)染細(xì)胞核，則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封片。附11：抗原修法常用抗原修復(fù)液：檸檬酸緩沖液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修復(fù)液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修復(fù)法切片脫蠟水化處理，TBS沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復(fù)法微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或繼續(xù)微波10~15min，取出微波盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復(fù)法取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復(fù)液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。四、隔水式高壓抗原修復(fù)法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復(fù)液于微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時4~8min即可關(guān)閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

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• 免疫組化Elivison二步法

  1、石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。2、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的，視具體情況而定）3、每張切片加1滴3%H2O2，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’。4、除去PBS液，每張切片加1滴相應(yīng)的**抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)），室溫下孵育2小時。5、PBS沖洗3×5’。除去PBS液，每張切片加1滴聚合物增強(qiáng)劑，室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’。6、除去PBS液，每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物，室溫下孵育30分鐘。PBS沖洗3×5’。7、除去PBS液，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液（二氨基聯(lián)苯胺），顯微鏡下觀察5分鐘。8、蘇木素復(fù)染，0.1%HCl分化，自來水沖洗，藍(lán)化，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固，晾干后觀察。[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

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• 人IL-29 免疫組化試劑盒

  該試劑盒以HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性IL-29抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的IL-29一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復(fù)合物，顯微鏡下觀察成像。注：本產(chǎn)品僅供實(shí)驗室科學(xué)研究。本步驟是根據(jù)我們長期實(shí)驗得出的有效步驟，不一定是Zyou方法，請客戶根據(jù)具體科研實(shí)驗情況進(jìn)行調(diào)整和優(yōu)化，并歡迎客戶和我們探討。[詳細(xì)]

  2018-10-01 10:00

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• 免疫組化試劑盒使用說明書

  上海哈靈生物科技有限公司免疫組化試劑盒使用說明書保存方法：2-8℃保存。有效期：一年。生產(chǎn)日期：見封口。工作原理：辣根過氧化物酶（HRP）的分子量（40000），它不會遮蓋抗原的結(jié)合部位，具有較高活性及特異性，可溶性佳，生成的產(chǎn)物不擴(kuò)散，可作用于多種底物，產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強(qiáng)，易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。DAB在H2O2存在的情況下，可以作為HRP的電子供體，產(chǎn)生褐色的不溶顆粒，可作為顯色的試劑。試劑盒內(nèi)容：名稱規(guī)格10.01mol/LpH6.0枸櫞酸鹽緩沖液0.5L2PBS緩沖液1L3廣譜二抗1.5mL430%H2O25mL5DAB顯色液I0.3mL6DAB顯色液II0.3mL自備試劑：無水乙醇、蘇木素。操作步驟：1.60℃常規(guī)脫蠟至水后，將石蠟切片先后浸入二甲苯Ⅰ，二甲苯Ⅱ各10min。然后逐級降濃度酒精入水，每次3-5min。①無水酒精3－5min②90%酒精3－5min③85%酒精3－5min④75%酒精3－5min⑤PBS洗滌3次每次5min2.熱修復(fù)抗原：將切片置于0.01mol/LpH6.0枸櫞鈉緩沖液，微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10min后，反復(fù)1-2次，置于室溫自然冷卻。0.01mol/LpH7.0左右的PBS洗滌3次，每次5min3.消除內(nèi)源性過氧化物酶：用3%H2O2室溫孵育5-10min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次，每次5min；4.滴加一抗：滴加適當(dāng)稀釋的一抗到切片上，37℃孵育一定時間或者4℃隔天，pH7.4的PBS洗滌3次，每次5min。（一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來說，陽性染色強(qiáng)度不夠時，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時間；背景過高時，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時間。）5.加入廣譜二抗，37℃孵育一段時間，取出后PBS洗滌3次，每次5min。6.DAB顯色：取DAB顯色液I及II各50微升加至入1mL的水中，配成DAB工作液，滴加到切片上，室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時間。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應(yīng)。7..觀察顯色后自來水沖，蘇木精復(fù)染1-2min，，自來水沖10min，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，干燥，分析拍照[詳細(xì)]

  2024-10-08 14:03

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• 小鼠IL-10 免疫組化試劑盒說明書

  小鼠IL-10免疫組化試劑盒說明書該試劑盒以HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRPStreptavidinConjugate，HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性IL-10抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的IL-10一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，Z后加入HRP-SA，形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復(fù)合物，顯微鏡下觀察成像。小鼠IL-10免疫組化試劑盒所含試劑：試劑A通透液：0.1%Triton-X10010mL（選用）試劑B封閉緩沖液（封閉用）20mL試劑C（原裝進(jìn)口分裝）已稀釋的即用型IL-10一抗（2.5ml）試劑D（原裝進(jìn)口分裝）生物素化羊抗兔IgG1支（濃度1.5mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復(fù)合物1支（濃度1μM，稀釋比1:50~1:200）100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑：1．10mMTBS（pH7.2~7.4）三羥基氨基甲烷1.21g氯化鈉7.6g加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4，Z后定容至1000mLTBS-T：TBS+Tween20（0.05%體積比）2．抗原修復(fù)液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復(fù)液）10mMpH6.0檸檬酸緩沖液檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH值至6.0，Z后定容至1000mL或：0.5MEDTA修復(fù)液（pH8.0）EDTA2H2O186.1g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水700mL，用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0，Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實(shí)驗步驟（建議方案）：小鼠IL-10免疫組化試劑盒石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片：將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr；2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10min；3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2次（每次2min），85%乙醇2min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min；4.抗原修復(fù)：根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫度達(dá)到98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O洗2×2min，TBS洗滌（2×2min）（具體修法見附1）*注：有些抗原勿需修復(fù)，直接進(jìn)入第5步封閉。5.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育30min；6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2hr或4℃7.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；8.封閉：滴加試劑B，37℃濕盒孵育10min；9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育30min；10.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min）；11.封閉：滴加試劑Tween20，37℃濕盒孵育封閉20min；12.加HRP-SA：滴加用試劑C稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20nM），37℃濕盒中孵育30min；13.洗滌：TBS-T洗滌（3×5min），TBS洗滌（2×5min）；14.顯色：應(yīng)用DAB溶液（試劑F）顯色；15.復(fù)染：自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；16.封片：待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。注意事項：1.修復(fù)后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導(dǎo)致結(jié)晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使用。3.若試劑為微量濃縮液，用前應(yīng)低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween20，否則會影響結(jié)果觀察。5.如須復(fù)染細(xì)胞核，則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封片。附1：抗原修法常用抗原修復(fù)液：檸檬酸緩沖液（0.01MpH6.0）、EDTA抗原修復(fù)液（pH8.0或9.0）等等。一、酶消化修復(fù)法切片脫蠟水化處理，TBS沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復(fù)法微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或繼續(xù)微波10~15min，取出微波盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，須自行調(diào)整。三、小鼠IL-10免疫組化試劑盒直接高壓抗原修復(fù)法取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復(fù)液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。四、隔水式高壓抗原修復(fù)法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復(fù)液于微波爐中加熱至沸騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時4~8min即可關(guān)閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。[詳細(xì)]

  2018-11-04 10:00

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• 免疫組化的方法和優(yōu)點(diǎn)

  上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司專業(yè)供應(yīng)各種屬elisa試劑盒，提供免費(fèi)代測服務(wù)，保證實(shí)驗結(jié)果客觀真實(shí)性。我公司對試劑盒質(zhì)量1**%保證，若存在質(zhì)量問題，我們無條件包退換。若需要了解試劑盒的詳細(xì)信息，請來的咨詢：電話：021-60520498業(yè)務(wù)QQ:1005074258何經(jīng)理免疫組化的方法和優(yōu)點(diǎn)一、免疫組化技術(shù)的基本原理應(yīng)用免疫學(xué)及組織化學(xué)原理，對組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些化學(xué)成分進(jìn)行原位的定性、定位或定量研究，這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。眾所周知，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實(shí)驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體（**抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無色的，因此，還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來（常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒）。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分，在顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量。組織或細(xì)胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測。二、免疫組織化學(xué)染色方法1、按標(biāo)記物質(zhì)的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標(biāo)法和免疫金銀法等。2、按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步、三步或多步法）;與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。3、按結(jié)合方式可分為抗原抗體結(jié)合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法和親和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物（ABC）法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中SP法是Z常用的方法。三、幾種常用免疫組織化學(xué)方法的原理1、免疫熒光方法是Z早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標(biāo)上熒光素，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應(yīng)用比較廣。2、免疫酶標(biāo)方法免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術(shù)?；驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前Z常用的技術(shù)。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是：定位準(zhǔn)確，對比度好，染色標(biāo)本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法，且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬PAP法、ABC法、SP法等。3、免疫膠體金技術(shù)免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針，就能對組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。四、免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)1、特異性強(qiáng)免疫學(xué)的基本原理決定了抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時才會出現(xiàn)交叉反應(yīng)。2、敏感性高在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。3、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合該技術(shù)通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時對不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對病理學(xué)研究的深入是十分有意義的。人集落刺激因子（CSF）ELISAKitHumancolony-stimulatingfactor,CSFELISAKit人激動異構(gòu)酶/細(xì)胞分裂素MB（CKMB）ELISAKitHumancytokininMB,CKMBELISAKit人肌細(xì)胞生成素（MYOG）ELISAKitHumanmyogenin,MYOGELISAKit人γ干擾素誘導(dǎo)單核細(xì)胞因子（MIGF/CXCL9）ELISAKitHumanmonocyteinterferongammainducingfactor,MIGFELISAKit人干擾素誘導(dǎo)T細(xì)胞趨化因子（ITAC/CXCL11）ELISAKitHumanInterferoninducibleT-cellChemoattractant,I-TACELISAKit人白細(xì)胞分化抗原14（CDl4）ELISAKitHumanclusterOfdifferentiation,CDl4ELISAKit人肥大細(xì)胞類胰蛋白酶（MCT）ELISAKitHumanmastcelltryptase,MCTELISAKit人凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）ELISAKitHumanapoptosisinducingfactor,AIFELISAKit人凋亡蛋白酶激活因子1（ICAD）ELISAKitHumanapoptosisproteaseactivatingfactor-1,ICADELISAKit人白細(xì)胞共同抗原（LCA/CD45）ELISAKitHumanleukocytecommonantigen,LCA/CD45ELISAKit人白細(xì)胞分化抗原4（CD4）ELISAKitHumanclusterOfdifferentiation,CD4ELISAKit小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子（RANTES/CCL5）ELISAKitMouseregulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RANTESELISAkit人信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子（Smad1）ELISAKitHumansignaltransduction-Smad1ELISAKit人信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）ELISAKitHumansignaltransduction-Smad7ELISAKit[詳細(xì)]

  2018-11-16 10:02

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