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大鼠關節(jié)炎（CIA）造膜流程
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2018-10-20 10:00 1109閱讀次數(shù)
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膠原誘導關節(jié)炎（CIA）S次應用是用Ⅱ型膠原免疫Wistar(遠親雜交)、Sprague-Dawley(遠親雜交)和Wistar-Lewis(近交)中誘導成功。由于此CIA模型具有與人風濕病關節(jié)炎（RA）相同的免疫和病理特征，因此該模型先后擴展到小鼠及非人靈長類動物，并已作為人類關節(jié)炎研究的廣泛應用的模型。然而，對于CIA模型來說，不同種屬動物之間是有差異的。小鼠對CIA的敏感性與主要組織相容性復合體（MHC）相關，在小鼠品系中只有DBA/1(H-2q)和B10.RⅢ(H-2r)兩個品系對CIA敏感。大鼠對CIA的敏感性也與MHC相關，并與小鼠相比具有較寬的品系范圍。因此，不同MHC型的不同品系的大鼠，盡管關節(jié)炎的發(fā)病率、嚴重程度及抗體和T-cell的特異性在不同品系間不同，但都能夠誘發(fā)關節(jié)炎。
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大鼠關節(jié)炎（CIA）造膜流程- 膠原誘導關節(jié)炎（CIA）S次應用是用Ⅱ型膠原免疫Wistar(遠親雜交)、Sprague-Dawley(遠親雜交)和Wistar-Lewis(近交)中誘導成功。由于此CIA模型具有與人風濕病關節(jié)炎（RA）相同的免疫和病理特征，因此該模型先后擴展到小鼠及非人靈長類動物，并已作為人類關節(jié)炎研究的廣泛應用的模型。然而，對于CIA模型來說，不同種屬動物之間是有差異的。小鼠對CIA的敏感性與主要組織相容性復合體（MHC）相關，在小鼠品系中只有DBA/1(H-2q)和B10.RⅢ(H-2r)兩個品系對CIA敏感。大鼠對CIA的敏感性也與MHC相關，并與小鼠相比具有較寬的品系范圍。因此，不同MHC型的不同品系的大鼠，盡管關節(jié)炎的發(fā)病率、嚴重程度及抗體和T-cell的特異性在不同品系間不同，但都能夠誘發(fā)關節(jié)炎。[詳細]
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2018-10-20 10:00
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富氫水對關節(jié)炎的功效- 富氫水對關節(jié)炎LX的研究我本人10年前就有單側(cè)膝關節(jié)炎，Z明顯的感覺就是天氣潮濕會加重，因為并不十分嚴重也沒有過多關注。2008年開始我經(jīng)常飲用氫水，就在飲用氫水2個月的時候，我就驚奇地發(fā)現(xiàn)自己關節(jié)炎似乎痊愈了，但個人情況不能完全說明問題，后來我們在我校解剖教研室開展的氫水ZL關節(jié)炎的研究中，證明氫水對動物關節(jié)炎能快速有效ZL，再后來日本學者也發(fā)表氫水對人類類風濕關節(jié)炎治LX果的研究，雖然研究規(guī)模比較小，但提示骨關節(jié)炎是氫氣ZL的重要疾病類型，因為關節(jié)炎發(fā)病率非常高，給患者生活帶來很多不良影響，氫氣對關節(jié)炎的ZL研究值得深入開展，尤其是臨床對照研究。骨性關節(jié)炎是Z常見的一種關節(jié)疾病，嚴重威脅著人類的健康與生活，隨著老齡化社會到來，其發(fā)病率逐年增加。骨性關節(jié)炎是一種慢性、進展性關節(jié)疾病，以關節(jié)軟骨變性和丟失及關節(jié)邊緣和軟骨下骨骨質(zhì)再生為特征的慢性關節(jié)炎疾病。目前藥物ZL該病效果差，各種外科ZL如清創(chuàng)、鉆孔減壓、骨軟骨移植、骨膜移植等，雖能暫時緩解疼痛但Z終會失敗。因此尋找一種新的ZL方法迫在眉睫。研究目的：通過動物實驗分析富氫生理鹽水腹腔注射，ZL大白兔創(chuàng)傷性骨關節(jié)炎的可行性及安全性，并探討其對創(chuàng)傷性骨關節(jié)炎的恢復的影響，為臨床上同類疾病ZL提供實驗依據(jù)。研究方法：新西蘭大白兔30只，隨機分為三組：正常對照組10只，生理鹽水組10只，富氫生理鹽水組10只。生理鹽水組和富氫生理鹽水組20只家兔均行手術制作膝骨性關節(jié)炎模型。富氫生理鹽水組：腹腔注射富氫生理鹽水lOml／kg，每3天1次，生理鹽水組：腹腔注射等量生理鹽水，正常對照組不給藥，ZL持續(xù)6周。于ZL前后分別取3組家兔血清及關節(jié)液測定白細胞介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子(TNF)的含量，結(jié)合家兔的行為學表現(xiàn)對治LX果進行評價。研究結(jié)果：①行為學改變上富氫生理鹽水組ZL后有明顯改善(P<0.05)。②膝關節(jié)腫脹評分ZL前兩模型組無差異(P>0.05)，ZL后富氫生理鹽水組優(yōu)于生理鹽水組(P<0.05)。③ZL前兩個模型組血清及關節(jié)液中IL-1、TNF含量升高有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，ZL后富氫生理鹽水組均明顯下降(P<005)，生理鹽水組無明顯變化(P>0.05)。④造模8周后，關節(jié)內(nèi)有渾濁的滑液，股骨髁處可見軟骨表面有重度裂紋及潰瘍形成，軟骨剝脫，達骨質(zhì)，可見軟骨下骨，有骨贅形成。HE染色可見骨組織，軟骨細胞較少。研究結(jié)論：腹腔注射富氫生理鹽水ZL兔骨性關節(jié)炎有一定的LX，將為膝關節(jié)損傷軟骨修復ZL提供一個新思路。選摘《氫思語》[詳細]
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2018-08-19 10:00
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2016-10-20 09:13
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- 雞病毒性關節(jié)炎抗體（Viral Arthritis-Ab）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
- www.biokanu.com雞病毒性關節(jié)炎抗體(ViralArthritis-Ab)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定雞血清，血漿及相關液體樣本中病毒性關節(jié)炎抗體(ViralArthritis-Ab)含量。實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞病毒性關節(jié)炎抗體(ViralArthritis-Ab)水平。用純化的雞病毒性關節(jié)炎抗體(ViralArthritis-Ab)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入病毒性關節(jié)炎抗體(ViralArthritis-Ab)，再與HRP標記的病毒性關節(jié)炎抗體(ViralArthritis-Ab)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的病毒性關節(jié)炎抗體(ViralArthritis-Ab)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中雞病毒性關節(jié)炎抗體(ViralArthritis-Ab)濃度。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品：135pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在**、第二孔中分別加標準品100μl，然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為90pg/ml，60pg/ml，30pg/ml，15pg/ml，7.5pg/ml。2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項：1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標準曲線，**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。計算：以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。（此圖僅供參考）試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11%檢測范圍：4pg/ml-100pg/ml保存條件及有效期：1.試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月[詳細]
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2018-09-22 10:00
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