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- zky914 2017-11-03 00:00:00
- 同物（植物、物、微物）基組DNA提取所同; 同種類或同種類同組織其細胞結(jié)構(gòu)及所含同離差 異提取某種特殊組織DNA必須參照文獻經(jīng)驗建立相應提取， 獲用DNA尤其組織糖酶類物質(zhì)隨酶切、PCR反應等較強YZ作用，用富含類物質(zhì)材料提取基組DNA， 應考慮除糖酚類物質(zhì) 本實驗水稻幼苗材料，習基組DNA提取般 DNA 、材料 水稻幼苗 二、設(shè)備 移液器冷凍高速離機臺式高速離機水浴鍋陶瓷研缽50ml離 管（蓋）及5ml1.5ml離管彎鉤狀玻棒 三、試劑 1、提取緩沖液?：100mmol/L Tris?Cl， pH8.0， 20mmol/L EDTA， 500mmol/L NaCl， 1.5% SDS 2、提取緩沖液?：18.6g葡萄糖6.9g二乙基二硫代碳酸鈉6.0gPVP240ul巰基乙醇加水至300ml 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液：配見第章 5、其試劑：液氮、異丙醇、TE緩沖液水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc 四、操作步驟： （）水稻幼苗或其禾木科植物基組DNA提取 1. 50ml離管加入20ml提取緩沖液?， 60?水浴預熱 2. 水稻幼苗或葉5-10g， 剪碎， 研缽加液氮磨粉狀立即倒入預熱 離管， 劇烈搖混勻， 60?水浴保溫30-60鐘(間，DNA產(chǎn)量高)， 搖 3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液， 顛倒混勻(需帶手套， 防止損傷皮膚)室溫靜置5-10鐘， 使水相機相層(必要重新混勻) 4. 室溫5000rpm離5鐘 5. 仔細移取清液至另50ml離管，加入1倍體積異丙醇，混勻，室溫放置片刻即現(xiàn)絮狀DNA沉淀 6. 1.5ml eppendorf加入1ml TE用鉤狀玻璃棒撈DNA絮團，干凈吸水紙吸干，轉(zhuǎn)入含TE離管，DNA快溶解于TE 7. DNA形絮狀沉淀，則用5000rpm離5鐘， 再沉淀移入TE管收集沉淀，往往難溶解于TE，60?水浴放置15鐘幫助溶解 8. DNA溶液3000rpm離5鐘， 清液倒入干凈5ml離管 9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl)， 37? 10鐘， 除RNA(RNADNA操作、析般影響省略該步驟） 10. 加入1/10體積3mol/L NaAc及2×體積冰乙醇，混勻，-20?放置20鐘左右，DNA形絮狀沉淀
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- 75%乙醇，在植物基因組dna的提取試驗中什么作用
2017-11-02 01:42:40
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- 提取植物基因組DNA，DNA是綠色的
- 我用的是CTAB法提取植物基因組DNA，方法如下：1.稱取材料0.2g，加入適量PVP，500μl冰冷CTAB，20μl冰冷RNA酶研磨；2.研磨后加入500μl加熱的CTAB，裝入1.5ml離心管中... 我用的是CTAB法提取植物基因組DNA，方法如下： 1.稱取材料0.2g，加入適量PVP，500μl冰冷CTAB，20μl冰冷RNA酶研磨； 2.研磨后加入500μl加熱的CTAB，裝入1.5ml離心管中； 3.充分混勻后，65℃水浴1h，期間不時輕緩震蕩； 4.12000rpm離心10min，取750μl上清液至另一離心管中； 5.加入等體積的Tris飽和酚：氯仿：異戊醇（25：24：1），搖勻后12000rpm、離心10min； 6.取上層清液650μl，加入等體積氯仿·異戊醇（24:1），搖勻后12000rpm離心10min； 7.取550μl上清液至另一離心管中，加入等體積異丙醇； 10.-20℃放置1h或室溫下過夜； 11.12000rpm離心10min，倒棄上清液；70%冰冷乙醇洗滌沉淀2次； 12.倒棄上清液，風干沉淀； 14.加100μlTE溶解DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩? 可是不知道為什么Z后異丙醇沉淀出來的DNA居然是深綠色的，已經(jīng)接近黑色了。有的時候同樣的步驟做出來的又是白色或者黃色的，這到底是怎么回事?。∠Ｍ赖娜私o我個提示！ 會不會是因為和氯仿-異戊醇反應的時間過長？因為我發(fā)現(xiàn)我剩下的那些材料過一段時間后都變得很綠。 展開
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