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  是你岳岳Fl9 2016-04-04 00:00:00

  不同生物（植物、動(dòng)物、微生物）的基因組DNA的提取方法有所不同; 不同種類或同一種類的不同組織因其細(xì)胞結(jié)構(gòu)及所含的成分不同，分離方法也有差 異。在提取某種特殊組織的DNA時(shí)必須參照文獻(xiàn)和經(jīng)驗(yàn)建立相應(yīng)的提取方法， 以獲得可用的DNA大分子。尤其是組織中的多糖和酶類物質(zhì)對隨后的酶切、PCR反應(yīng)等有較強(qiáng)的YZ作用，因此用富含這類物質(zhì)的材料提取基因組DNA時(shí)， 應(yīng)考慮除去多糖和酚類物質(zhì)。 本實(shí)驗(yàn)以水稻幼苗為材料，學(xué)習(xí)基因組DNA提取的一般方法。 DNA 一、材料 水稻幼苗 二、設(shè)備 移液器，冷凍高速離心機(jī)，臺式高速離心機(jī)，水浴鍋，陶瓷研缽，50ml離 心管（有蓋）及5ml和1.5ml離心管，彎成鉤狀的小玻棒。 三、試劑 1、提取緩沖液?：100mmol/L Tris?Cl， pH8.0， 20mmol/L EDTA， 500mmol/L NaCl， 1.5% SDS。 2、提取緩沖液?：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸鈉，6.0gPVP，240ul巰基乙醇，加水至300ml。 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液：配方見diyi章。 5、其它試劑：液氮、異丙醇、TE緩沖液，無水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。 四、操作步驟： （一）水稻幼苗或其它禾木科植物基因組DNA提取 1. 在50ml離心管中加入20ml提取緩沖液?， 60?水浴預(yù)熱。 2. 水稻幼苗或葉子5-10g， 剪碎， 在研缽中加液氮磨成粉狀后立即倒入預(yù)熱 的離心管中， 劇烈搖動(dòng)混勻， 60?水浴保溫30-60分鐘(時(shí)間長，DNA產(chǎn)量高)， 不時(shí)搖動(dòng)。 3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液， 顛倒混勻(需帶手套， 防止損傷皮膚)，室溫下靜置5-10分鐘， 使水相和有機(jī)相分層(必要時(shí)可重新混勻)。 4. 室溫下5000rpm離心5分鐘。 5. 仔細(xì)移取上清液至另一50ml離心管，加入1倍體積異丙醇，混勻，室溫下放置片刻即出現(xiàn)絮狀DNA沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用鉤狀玻璃棒撈出DNA絮團(tuán)，在干凈吸水紙上吸干，轉(zhuǎn)入含TE的離心管中，DNA很快溶解于TE。 7. 如DNA不形成絮狀沉淀，則可用5000rpm離心5分鐘， 再將沉淀移入TE管中。這樣收集的沉淀，往往難溶解于TE，可在60?水浴放置15分鐘以上，以幫助溶解。 8. 將DNA溶液3000rpm離心5分鐘， 上清液倒入干凈的5ml離心管。 9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl)， 37? 10分鐘， 除去RNA(RNA對DNA的操作、分析一般無影響，可省略該步驟）。 10. 加入1/10體積的3mol/L NaAc及2×體積的冰乙醇，混勻，-20?放置20分鐘左右，DNA形成絮狀沉淀。

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