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- yangle406 2017-04-05 00:00:00
- 血液基因組DNA提取試劑盒 操作步驟： 一、小體積全血操作步驟如下： <400ul全血，以300ul血液處理量為例 1、向300ul抗凝劑的血液中加入2.5倍體積的Solution A，顛倒混勻，12000rpm離心1分鐘，棄掉上清。 2、再重復(fù)步驟1一次，棄掉上清。 3、按照第3頁附表配制Solution B與Solution C的混合液（Solution B與Solution C的使用量見附表）。 4、加入150ul混合液，用移液器吹打均勻，60℃水浴或孵箱孵育10分鐘，孵育期間顛倒混勻一次，溶液由紅色變?yōu)辄S綠色或棕色。 5、加入等體積的異丙醇，充分顛倒混勻至出現(xiàn)絲狀或絮狀基因組DNA，12000prm離心1分鐘，棄掉上清。 6、加入800ul 75%酒精，顛倒數(shù)次；12000prm離心1分鐘，用移液器吸掉上清，室溫干燥10~15分鐘。 7、加入150ul Elution buffer，60℃孵育10~15分鐘或過夜溶解DNA，用移液器吹打均勻，-20℃保存基因組DNA。 二、中量全血操作步驟如下： 1~10ml血量，以3ml血液處理量為例 1、向3ml抗凝劑的血液中加入2.5倍體積的Solution A，顛倒混勻，3000rpm離心5分鐘，棄掉上清。 2、再重復(fù)步驟1一次，棄掉上清。 3、按照第3頁附表配制Solution B與Solution C的混合液（Solution B與Solution C的使用量見附表）。 4、加入1.5ml混合液，用1ml移液器或者一次性塑料吸管吹打均勻，60℃水浴或孵箱孵育10分鐘，孵育期間顛倒混勻一次，溶液由紅色變?yōu)辄S綠色或棕色。 5、加入等體積的異丙醇，充分顛倒混勻至出現(xiàn)絲狀或絮狀基因組DNA。 6、用移液器將絮狀物移到加有800ul 75%酒精的1.5ml EP管中，顛倒數(shù)次，12000prm離心3分鐘，棄掉上清，室溫干燥10~15分鐘。 7、加入500ul Elution buffer，60℃孵育10~15分鐘或過夜溶解DNA，用移液器吹打均勻，-20℃保存基因組DNA。 三、大量全血操作步驟如下： 10~20ml血量，以10ml血液處理量為例 1、向10ml抗凝劑的血液中加入2.5倍體積的Solution A，顛倒混勻，8000rpm離心5分鐘，棄掉上清； 2、再重復(fù)步驟1一次，棄掉上清。 3、按照第3頁附表配制Solution B與Solution C的混合液（Solution B與Solution C的使用量見附表）； 4、加入5ml混合液，用一次性塑料吸管吹打均勻，60°C水浴或孵箱孵育10分鐘，孵育期間顛倒混勻一次，溶液由紅色變?yōu)辄S綠色或棕色。 5、加入等體積的異丙醇，充分顛倒混勻至出現(xiàn)絲狀或絮狀基因組DNA； 6、用移液器將絮狀物移到加有800ul 75%酒精的1.5ml EP管中，顛倒數(shù)次，12000prm離心1分鐘，棄掉上清，室溫干燥10~15分鐘； 7、加入1000ul Elution buffer，60℃孵育10~15分鐘或過夜溶解DNA，用移液器或一次性塑料吸管吹打均勻，-20℃保存基因組DNA。
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