植物DNA的提取問(wèn)題
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我是做細(xì)菌研究的，有個(gè)課題需要用到植物的DNA?？墒翘崛〕龅腄NA到用70%的乙醇洗滌三次之前那步時(shí)候沒(méi)有發(fā)現(xiàn)絮狀的DNA，而且液體的顏色很深。洗滌之后的沉淀物顏色也偏綠而不是透明的... 我是做細(xì)菌研究的，有個(gè)課題需要用到植物的DNA。 可是提取出的DNA到用70%的乙醇洗滌三次之前那步時(shí)候沒(méi)有發(fā)現(xiàn)絮狀的DNA，而且液體的顏色很深。 洗滌之后的沉淀物顏色也偏綠而不是透明的。請(qǐng)問(wèn)是不是研磨不充分還是其他的什么原因？ 還有研磨的時(shí)候必須用液氮么？可以用-70C下保存的新鮮葉片直接研磨么？ 展開(kāi)
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- 楊成功3 2010-09-09 00:00:00
- .DNA提取的幾種方法 (1).濃鹽法 利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時(shí)蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來(lái). 也可用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細(xì)胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白. 兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些. 以稀鹽酸溶液提取DNA 時(shí)，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離。在提取過(guò)程中為YZ組織中的DNase對(duì)DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL，0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA. （2）.陰離子去污劑法: 用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合，因?yàn)殛庪x子去污劑能夠破壞這種價(jià)鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA. （3）.苯酚抽提法: 苯酚作為蛋白變性劑，同時(shí)YZ了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時(shí)，由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA 。此時(shí)DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團(tuán)，取出。此法的特點(diǎn)是使提取的DNA保持天然狀態(tài) . （ 4）.水抽提法: 利用核酸溶解于水的性質(zhì)，將組織細(xì)胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% ?80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，Z后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過(guò)程中加入SDS.
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- 背鄉(xiāng)棄愛(ài) 2010-08-24 00:00:00
- 具體問(wèn)題如何？太不明確了！
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- iypoctnm 2010-08-24 00:00:00
- 中間似乎需要高速低溫離心的，有些植物種類因?yàn)槎嗵堑瘸煞诌^(guò)多而導(dǎo)致離心無(wú)法去除，則需要添加一些可以降解多糖的(糖蛋白)的成分，我們做過(guò)的植物一般的草本的相對(duì)容易提取，木本的則混合物較多，難以提取的很純。
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