動物源食品中的獸藥殘留超標(biāo)可能導(dǎo)致人體產(chǎn)生急性或慢性中毒，同時也會使病原體耐藥性增強，從而對人類健康構(gòu)成威脅。因此，做好動物源性食品中獸藥殘留的檢測具有重要意義。氯霉素是一種廣譜抗生素，對革蘭陽性、陰性菌都有很好的作用，且在腦脊液中濃度較高，也常用于治療其他藥物療效較差的腦膜炎患者，但氯霉素可引起嚴(yán)重的毒副作用，建立一種高效、準(zhǔn)確的檢測方法尤為重要。

本實驗參照《GB 29688-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 牛奶中氯霉素殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》，利用EZsep?C18-U固相萃取柱（500mg/6mL，貨號：PZ10705）凈化樣品，建立了一種牛奶中氯霉素的檢測方法，此方法的回收率及平行性良好，適用于牛奶中氯霉素殘留量的檢測。

關(guān)鍵詞：

氯霉素，固相萃取

1.1 儀器與試劑

SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

MVP全自動高通量真空平行濃縮儀，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀（貨號：C020017），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

液質(zhì)聯(lián)用儀SCIEX 4500，SCIEX公司；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

離心機H1850，湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

正己烷（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

乙酸乙酯（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

氯化鈉（分析純），購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司；

EZsep?C18-U固相萃取柱（500mg/6mL，貨號：PZ10705），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司。

1.2 工作液配制

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲備液：100μg/mL，溶劑為甲醇，購自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

氯霉素-D5標(biāo)準(zhǔn)儲備液：100μg/mL，溶劑為甲醇，購自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

標(biāo)準(zhǔn)中間液：移取氯霉素儲備液和氯霉素-D5標(biāo)準(zhǔn)儲備液各100μL，分別用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度均為1.0μg/mL的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)中間液和氯霉素-D5同位素標(biāo)準(zhǔn)中間液。

標(biāo)準(zhǔn)使用液：移取氯霉素中間液和氯霉素-D5標(biāo)準(zhǔn)中間液各1mL，分別用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度均為0.1μg/mL的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用液及氯霉素-D5同位素標(biāo)準(zhǔn)使用液。

移取0.1μg/mL的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0.01、0.05、0.10、0.20、0.50mL分別置于10mL容量瓶中，并均加入氯霉素-D5同位素標(biāo)準(zhǔn)使用液0.2mL，以純水定容至刻度，得到氯霉素濃度依次為0μg/L、0.1μg/L、0.5μg/L、1μg/L、2μg/L、5μg/L，氯霉素-D5濃度固定為2μg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品制備

稱取10.0g牛奶樣品，加入氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用液10μL、氯霉素-D5同位素標(biāo)準(zhǔn)使用液200μL，加入20mL乙酸乙酯，振蕩15min，6000r/min離心10min，取上清液于收集杯中，復(fù)提一次合并上清液，置于MVP全自動高通量真空平行濃縮儀上，按溫度40℃、轉(zhuǎn)速150r/min、真空度200mbar減壓旋蒸至近干，用5mL4%的氯化鈉水溶液溶解殘渣，加入5mL正己烷，振蕩1min，靜置分層，棄去正己烷，再加入正己烷5mL，重復(fù)提取一次，取下層液，待凈化。

1.3.2 固相萃取凈化

用5mL甲醇、5mL水活化EZsep?C18-U固相萃取柱（500mg/6mL，貨號：PZ10705），取1.3.1待凈化液上樣，上樣結(jié)束后用5mL水淋洗固相萃取小柱，再用氮氣吹干萃取柱2min，以5mL甲醇洗脫并收集洗脫液，洗脫液經(jīng)E.T.氮吹濃縮儀在40℃氮氣濃縮至近干，再用1.0mL40%乙腈水溶液重新溶解，過0.22μm微孔濾膜，供LC-MS/MS測定。

1.3.3 LC-MS/MS測定條件

色譜柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

柱溫：40℃；

進樣量：5μL；

離子源參數(shù)：

IS電壓：5500V；

離子源溫度TEM：600℃；

檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）

流動相：乙腈：水=40：60；

流速：0.20mL/min。

表1 加標(biāo)回收率

圖1 氯霉素標(biāo)準(zhǔn)色譜

圖2 牛奶樣品加標(biāo)色譜圖

本實驗使用EZsep?C18-U固相萃取柱（500mg/6mL，貨號：PZ10705）對牛奶中氯霉素進行凈化后通過LC-MS/MS測定，該方法的加標(biāo)回收率在97.6%~105.2%之間，RSD為3.0%，準(zhǔn)確性和精密度均滿足《GB 29688-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 牛奶中氯霉素殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法》要求，實驗方法準(zhǔn)確、可靠。

[1] GB 29688-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 牛奶中氯霉素殘留量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法