三氯蔗糖是我國批準使用的甜味劑，其甜度約為蔗糖的600倍，甜味純正，甜味特性與甜味質量和蔗糖十分相似。在一般食品加工和儲存過程中都非常穩(wěn)定，水溶性很好，適宜于各種食品加工過程。我國規(guī)定可用于飲料、醬菜類、復合調味料、配制酒、雪糕、糕點、餅干、面包等許多領域。

食品安全國家標準《GB 5009.298-2023 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測定》已于2024年3月6日實施，本文參照該標準，利用EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/6mL，貨號：PZ12609）凈化樣品，再用高效液相色譜串聯(lián)質譜檢測進行檢測，建立了食品中三氯蔗糖的分析方法。

關鍵詞

三氯蔗糖；EZsep?；HLB固相萃取柱

1.1 儀器與試劑

MPREP-SPE08固相萃取裝置，貨號：PZ0008，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

4500質譜系統(tǒng)，SCIEX公司；

EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/6mL，貨號：PZ12609），北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

冷凍離心機，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學儀器廠；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

正己烷（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

乙酸鋅，亞鐵氰化鉀，乙酸等化學品均為分析純或以上，購自國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 工作液配制

三氯蔗糖標準儲備液：100ug/mL，溶劑為水，購自壇墨質檢標準物質中心；

三氯蔗糖標準工作液：取1.0mL標準儲備液于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，得到濃度為10μg/mL標樣工作液；

移取10μg/mL的三氯蔗糖標準工作液0.01、0.02、0.05、0.1、0.2mL，分別置于1mL容量瓶中，用水定容至刻度，得到濃度依次為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0μg/mL的標準系列工作液。

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品制備

準確稱取醬油和糕點樣品各2g（精確至0.001g）于50mL離心管中，加人10mL水，渦旋混合器上振蕩3min，加人1.0mL乙酸鋅溶液和1.0mL亞鐵氰化鉀溶液，超聲波提取20min，8500r/min冷凍離心5min，取上清液于25mL容量瓶中，再用10mL水重復提取1次，合并提取液后加水定容至刻度，混勻后轉移至50mL離心管，加人15mL正已烷，渦旋混合器上振蕩3min，8500r/min離心5min，棄去上層正已烷層，下層清液待凈化。

1.3.2 固相萃取凈化

EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/6mL，貨號：PZ12609）依次用4mL甲醇、4mL水進行活化，取10mL1.3.1待凈化液上樣，上樣結束后用3mL10%甲醇水溶液淋洗萃取柱，再用3mL甲醇洗脫萃取柱，收集全部洗脫液，然后用水定容至10mL容量瓶中，混勻過微孔濾膜后供LC-MS/MS測定。

1.3.3 LC-MS/MS儀器條件

色譜柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）

檢測方式：多反應監(jiān)測（MRM）

流動相：A：水 B：甲醇（梯度洗脫程序見表1）

流速：0.6mL/min

進樣量：1μL

表1 梯度洗脫程序

表2 加標回收率結果

圖1 三氯蔗糖標準溶液色譜圖

圖2 醬油加標樣品色譜圖

圖3 糕點加標樣品色譜圖

本實驗使用EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/6mL，貨號：PZ12609）對食品中三氯蔗糖進行凈化，通過高效液相色譜串聯(lián)質譜進行測定，該方法的加標回收率在86.0%~94.3%之間，RSD在2.1%~2.8%之間，滿足標準要求。實驗結果也表明EZsep?HLB固相萃取柱（200mg/6mL，貨號：PZ12609）能很好的完成方法中的凈化工作，并且結果穩(wěn)定、可靠。

[1] 《GB 5009.298-2023 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的測定》